为了进一步验证中草药的抑菌和杀菌作用，为开发绿色药品提供依据，在实验室通过大黄、黄芩、黄柏、大青叶、西红柿汁、羊胆汁对大肠杆菌等几种病原菌进行了药敏试验，现将试验过程及结果报告如下：
1 材料与方法
1.1试验用菌种 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、绿脓杆菌由河北农业大学微生物实验室提供。
1.2药品 大黄、黄芩、黄柏、大青叶购于保定乐仁堂药店；羊胆汁由保定第一肉联厂提供；西红柿从菜市场购得。
1.3培养基的制备 除营养肉汤是按常规制备外，其他如营养琼脂、SS琼脂都为市售。无菌羊血清及脱纤绵羊血采自河北农业大学畜牧教学基地羊群。
1.4单味中药的处理 称取大黄100克，切细磨碎，加5～6倍水，加热煮沸30分钟，过滤。药渣再加同量水加热煮沸30分钟，过滤。将两次滤液合并后，蒸发浓缩到250毫升备用。黄芩、黄柏、大青叶用同样方法处理。
西红柿汁的制作：将500克西红柿洗净，凉干，置于无菌操作台上经紫外线灯照射1小时，然后在无菌操作台内剥皮，切块，放入无菌豆浆机中绞碎，再用无菌纱布过滤，收集滤液备用。
1.5细菌培养 将大肠杆菌接种于营养肉汤，营养琼脂和SS琼脂；将金黄色葡萄球菌接种于含15%氯化钠的营养肉汤和营养琼脂平板；将链球菌接种于血清肉汤和血液琼脂平板，绿脓杆菌接种于营养肉汤和营养琼脂，然后置于37℃恒温箱中培养24小时。
1.6药敏片的制作
1.6.1纸片的制备 将购买的新华1号定性滤纸用打孔器打成直径6微米的圆形小纸片，然后每50小片放入一个清洁干燥的青霉素空瓶内，瓶口以单层牛皮纸包裹，15磅压力20分钟高压灭菌后，放在37℃恒温箱中数天，使完全干燥后备用。
1.6.2药敏片的制备 取大黄、黄芩、黄柏、大青叶的制备液，西红柿汁及羊胆汁各0.25毫升分别滴加到装有50片小纸片的青霉素小瓶内，并翻动纸片以使各纸片充分浸透药液。在瓶上贴好标签，并将瓶放入37℃恒温箱内过夜，干燥后进行密封，待用。
1.7药敏试验 在酒精灯旁，从培养各细菌的培养基上挑取本菌，然后接种于同一类型的培养基上，再用灭菌的小镊子夹取已作好的各药物的药敏片，分别密贴于上述的培养基表面并作好标记。将贴好药敏片的各细菌培养基放置于37℃恒温箱内，放置时要使贴纸片的平板底部在下，培养24小时后观察结果。
2 结果
由实验结果可以看到，大黄、黄芩、黄柏、大青叶、西红柿汁及羊胆汁对大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌及绿脓杆菌都有不同程度的抑菌作用。它们对链球菌及绿脓杆菌基本表现为中度敏感。对于大肠杆菌，除黄芩、西红柿汁表现为高敏感性外，其余都表现为中度敏感。其中，黄芩、西红柿汁对大肠杆菌的抑菌圈直径分别为16 微米、17微米，抑菌作用明显。
3 讨论
大黄、黄芩、黄柏、大青叶及羊胆汁具有抑菌、杀菌的作用,大黄含有大黄素和大黄酸，有较强的抗菌作用，能抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、链球菌等病原菌。据报道大黄＋陈石灰（2∶1）配成撒布剂可治疗化脓创；与地榆末配合调油，搽于局部，可治疗火伤和烫伤。禽菌灵（大黄、穿心莲、甘草、吴茱萸、苦参、白芷、板蓝根）在兽医临床上使用效果良好。大黄、甘草汤也以治疗仔、幼畜脐炎效果显著而被广泛应用。黄芩、黄柏分别可在加味三黄散及丹皮地黄汤中见到，起到清热凉血、抗菌、止痢、消肿的功效。大青叶为十字花科一年生草本植物菘蓝、蓼科一年生草本植物蓼蓝、马鞭草科落叶灌木路边青及爵床科多年生灌木状草本植物马蓝的叶、叶茎及根，其中以菘蓝、蓼蓝为最好。大青叶的主要有效成分是菘蓝甙，有抗菌消炎，清热解毒的功效。目前家畜临床上常用于治疗流感、脑炎、腮腺炎、肝炎等多种病毒性疾病及其他全身性感染疾病的化脓疮。大青叶加工后所得色素称为青黛，青黛提取物90%为靛玉红，有凉血消斑、抗肿瘤、保肝、破坏白血病细胞、提高机体免疫力、抗菌的功能。羊胆汁可以提取胆色素，它含有硫酸化糖蛋白、β－葡萄糖醛酸酶、无机盐类及解毒素，因而具有抗菌作用。
4 结论
大黄、黄芩、黄柏、大青叶、西红柿汁及羊胆汁对大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌及绿脓杆菌都有不同程度的抑菌作用。它们对链球菌及绿脓杆菌基本表现为中度敏感；对于大肠杆菌，除黄芩、西红柿汁表现为高敏感性外，其余都表现为中度敏感；对于金黄色葡萄球菌，除大黄、黄芩、西红柿汁表现为高敏感性外，其余也表现为中度敏感性。
河北省保定市畜牧水产局 季晓明 卢冬梅
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