规模化猪场疫病综合防治，蓝耳 - 链球综合症第一，猪流行性腹泻第二，非洲猪瘟第三，没有第四！迄今，由于疫苗市场一直未有一种对猪流行性腹泻免疫效果确切的疫苗可供免疫，技术上暂时仍未有任何有效措施能够百分百确保猪流行性腹泻疫情不发生，但疫情发生后却有有效的技术手段快速有效地加以控制。
有效控制猪流行性腹泻疫情，必须具备两个基本条件：（1）思想上能够做到与时俱进；（2）具备强有力的执行能力。在一些不具备以上两个基本条件的猪场，如果正巧遇上致病力较强的猪流行性腹泻病原感染，猪流行性腹泻对猪场的影响，几乎是灾难性的！疫情从十一、十二月开始暴发，可以一直持续到次年七、八月，小猪死亡率超过 80%。一场猪流行性腹泻疫情，足以导致整个猪场破产！
不是技术力量非常雄厚的猪场遇猪流行性问题，建议第一时间寻找真正能够解决问题的专业机构协助，不要道听途说或自己东碰西撞。时间每耽误一天，小猪死亡增加几十、几百乃至上千头。
版本说明
《猪流行性腹泻》（完整版）内容比较详尽，但篇幅比较繁长，可供专家学者深入研究猪流行性腹泻参考。猪场临床兽医如嫌阅读太费时，可参看本微信公众号的《猪流行性腹泻》（精髓版）。
《猪流行性腹泻》（精髓版）的查阅路径：进入“中小猪企抱团联盟”公众号主页，点开下面的“科学养猪”菜单项，选择“兽医防疫”子菜单项，打开“规模化猪场兽医防疫”页面，从中点开“实战操作”，然后在“实战操作”页面中查找。
1 病原学
猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus, PEDV），与猪传染性胃肠炎病毒、猫冠状病毒、犬胃肠炎病毒和人冠状病毒，同属于冠状病毒科（Coronaviridae）冠状病毒属（Coronavirus）1 群。
PEDV 在肠上皮细胞的形态特征与其他冠状病毒相同，病毒通过胞浆内膜以出芽的方式进行装配。但在粪样中检测到的病毒粒子则具有多形性，并倾向于球形，直径约 95～190 nm（包括纤突在内）。大多数病毒粒子有一个电子不透明的中央区，顶端膨大的纤突长 18～23 nm，从核衣壳向外呈放射状排列[2]。
基因组为单股正链具有感染性的 RNA，全长 28 033 nt。5ˊ端非翻译区（5ˊUTR）长 296 nt；3ˊ端非翻译区（3ˊUTR）长 334 nt。剩余基因组序列包括 6 个 ORF，从 5ˊ～3ˊ端依次为编码复制酶多聚蛋白 1ab（pp1ab）、纤突蛋白（S）、ORF3 蛋白、小膜蛋白（E）、膜糖蛋白（M）和核衣壳蛋白（N）的基因。pp1ab 基因占全基因组 2/3，长 20346 nt；S 基因、ORF3 蛋白基因、E 基因、M 基因和 N 基因长度依次为 4 152, 675, 231, 681, 1 326 nt[3, 4]。
pp1ab 分子质量约 753 ku，主要功能包括负链 RNA、前导 RNA、sgmRNA 和子代病毒 RNA 的转录以及对多聚蛋白切割产生具有功能产物的蛋白酶切割，其在病毒感染早期发挥重要作用[2, 5]。ORF3 蛋白分子质量约 25.3 ku，据认为与病毒毒力有关[5]。以上两种蛋白，为病毒的非结构蛋白；其余 S, E, M, N蛋白，则属于结构蛋白。S 蛋白是位于病毒粒子表面的纤突糖蛋白，分子质量 180～220ku，由 1 383 个氨基酸组成，在病毒粒子与细胞表面受体结合后通过膜融合侵入宿主细胞和在感染宿主体内介导中和抗体产生的过程中发挥重要作用[6]。N 蛋白为磷酸化的核衣壳蛋白，分子质量 55～58 ku，由 441 个氨基酸组成，与病毒基因组 RNA 相互缠绕形成病毒核衣壳。N 蛋白在 PEDV 的结构蛋白中所占比例最大，在感染的细胞中能得到大量表达。猪在感染 PEDV 早期，体内就能产生高水平的抗 N 蛋白抗体，又鉴于冠状病毒 N 蛋白的保守性强，利用 N 蛋白来建立 PEDV 分子生物学诊断技术具有很好的应用前景[7]。M 蛋白分子质量 27～32 ku，由 226 个氨基酸组成，在病毒粒子的组装和出芽过程中具有重要作用。因它能介导机体产生 α 干扰素，可以作为 PEDV 基因工程疫苗的候选抗原[8]。E 蛋白分子质量约 8.8 ku，由 76 个氨基酸组成，为位于病毒囊膜上的小包膜蛋白，其对于病毒的组装和出芽，是非常必要的[9]。
与其他冠状病毒相比，PEDV 分离培养相对比较困难。从 PEDV 发现开始，很多学者尝试用不同的方法将 PEDV 适应于细胞，但经过近 10 年努力未获成功[10]。直到 1988 年，Hofmann 等首次在培养基含胰酶的 Vero 细胞上成功繁殖出 PEDV。此后，Kadoi 等又相继在仔猪膀胱、肾脏的原代细胞和KSEK6、IB-RS-2、MA104、CPK、ESK 的传代细胞系上成功培养出PEDV[11]。在国内，中国人民解放军农牧大学于 1982 年首次将本病毒接种胎猪肠组织上皮细胞和胎猪小肠组织绒毛上皮细胞培养获得成功[12]。1991 年，李树根等[13]在细胞培养液加入胰酶（60 μg），将 PEDV 适应于 Vero、PK15 和ST 传代细胞系获得成功。此后，哈尔滨兽医研究所又将 PEDV 适应于 Vero 细胞增殖，并能顺利继代[14]。直到目前，PEDV 尚未被发现存在不同血清型。
该病毒对乙醋和氯仿敏感，在蔗糖中的浮密度为 1.18g/mL。适应细胞培养的 PEDV 经 60°C 处理 30min 失去感染力，但在 50°C 条件下相对稳定。病毒耐酸能力较强，在 4°C pH4.0~9.0 以及 37°C pH 6. 5~7. 5 条件下稳定。从患病仔猪的肠灌液中浓缩和纯化的病毒不能凝集家兔、小鼠、猪、豚鼠、绵羊、牛、马、雏鸡和人的红细胞，说明 PEDV 没有凝血活性。
2 流行病学
本病仅发生于猪，各种年龄猪均可感染发病。哺乳仔猪、保育小猪和肥育猪的发病率很高，但以哺乳仔猪受害最为严重。母猪发病率变动很大，约为 15%～90%。病猪是主要传染源，病毒存在于肠绒毛上皮和肠系膜淋巴结，随粪便排出后，污染环境、饲料、饮水、交通工具及用具而传染。
本病多发生于冬春寒冷季节，每年 12 月至次年 3 月为发病高峰期。主要感染途径是消化道，但消化道不是唯一感染途径，PEDV 还可通过呼吸道和肌肉接种感染。经此 3 种途径感染的猪存在明显的临床差异：肌肉接种猪最易感，口服猪次之，滴鼻猪不易感。最早排毒出现在受感染后 2 d（肌肉注射组），最迟排毒出现在受感染后 6 d（滴鼻组）。感染猪在症状出现前即排毒，临床症状消失后很长一段时间（受感染后 63～74 d），仍可在其粪便中检出 PEDV [15]。
如果猪场陆续有仔猪出生或断奶，病毒会不断感染新生仔猪和失去母源抗体保护的断奶仔猪，使本病呈地方流行性，新生仔猪和 5～8 周龄断奶仔猪持续性顽固性腹泻。
3 发病机理
病毒经口和鼻感染后，直接进入小肠，并在小肠和结肠绒毛上皮细胞浆中进行复制（该病毒不能在其他脏器内增殖和复制）。病毒增殖首先造成细胞器损伤，继而出现细胞功能障碍，使肠绒毛萎缩，吸收表面积减少，小肠粘膜碱性磷酸酶含量显著减少，进而引起营养物质吸收障碍，这是造成腹泻的主要原因，属于渗透性腹泻。严重腹泻引起脱水，是导致死亡的主要原因[14]。
免疫系统发育完善的小猪、肥育猪、母猪感染本病后具有较强的抗病力，7 日龄以上仔猪和成年猪都可见到明显的局部免疫反应。7 日龄内仔猪因免疫系统尚未完全发育成熟，受 PEDV 感染后，病毒在仔猪空肠中后段、回肠、盲肠粘膜绒毛柱状上皮细胞内复制和增殖，破坏肠粘膜柱状上皮细胞，引起肠绒毛裸露、断裂、融合及肠上皮细胞内各种酶类活性降低或缺乏，导致免疫系统破碎或损伤、消化功能障碍，呈现出脱水、腹泻等症状，严重者衰竭死亡。但 7 日龄内仔猪发病后，仍然存在抗损伤的防御反应，表现为肠粘膜上皮再生修复，肠粘膜集合淋巴结淋巴细胞增殖，肠粘膜集合淋巴结及肠粘膜固有层内的巨噬细胞捕捉病毒颗粒，呈递抗原给 T 辅助淋巴细胞和 SmIg + B淋巴细胞，使之转变为 IgM、IgA 和 IgG，进而阻止 PEDV 感染、定居、复制，修复损伤的肠绒毛上皮而逐渐痊愈[16, 17]。
PEDV 感染后，首先激发肠道粘膜局部体液免疫反应，继而刺激全身体液免疫反应。粘膜局部体液免疫以 IgA 为主，全身体液免疫以 IgG 为主。粘膜局部免疫反应早于全身免疫反应 3～6 d。粘膜局部免疫反应周期短（约 30 d左右），全身免疫周期较长（约 60 d 左右）[17]。
4 临床症状
自然感染潜伏期一般 5～8 d，人工感染潜伏期 8～24 h。发病猪场常见初生小猪产后数小时即发病。
主要临床症状为水样腹泻，或腹泻兼呕吐。呕吐多发生于吃食或吃奶后，症状轻重因年龄大小而异，年龄越小，症状越重。发病率因猪场而异，在有的猪场，所有日龄猪均可感染发病，发病率高达 100%。7 日龄以内仔猪常在持续腹泻 3～4 d 后脱水死亡，死亡率平均 50%，有时高达 100%。日龄较大的仔猪或肥育猪在同圈饲养的猪受感染后多全群腹泻，约 1 周后自然痊愈，死亡率 1%～3%，对应激敏感的猪种或更高。死亡常见于腹泻早期或发生腹泻之前，剖检病死猪常可见背部肌肉坏死。成年猪症状较轻，有的仅表现为呕吐，重者水样腹泻，3～4 d 自愈。
与传染性胃肠炎相比，PEDV 在封闭猪场内不同育肥猪群间的传播速度较慢，病毒通常需要 4～6 周或以上才能感染不同猪舍的猪群。在暴发过急性腹泻的猪场，小猪断奶后 2～3 周可能出现持续性腹泻；产房 7 日龄内小猪常因受同群病猪或周围环境中病原感染，腹泻一批小猪接一批小猪地持续蔓延。最近几年，有的猪场在一年中最炎热的 7, 8 月份，新生小猪腹泻发病依然存在。
病猪体温正常或稍高，精神沉郁，食欲减退或废绝。断奶猪、母猪常呈现精神委顿、厌食和持续腹泻，约 1 周之后逐渐恢复正常，少数病猪康复后生长发育不良。
哺乳小猪腹泻，呈现出病毒性腹泻共有的发病特征：（1）常整窝发病，厌食，不吃奶，先吐后泻，快速消瘦（如图 1），由于缺少小猪吸吮刺激，母猪也因干奶而致逐渐无奶，个别母猪甚至受小猪粪便感染而出现腹泻症状。（2）腹泻粪便腥臭。（3）腹泻粪便呈油性，并常粘满小猪全身。使小猪显得非常脏，全身油滑，抓住后象泥鳅一样很容易从手中滑脱。小猪康复后，被毛仍残存一层黑色油渍（如图 2 ）。（4）有喜欢爬到母猪身上睡觉的特异行为（如图 3 ）。这种行为，可能与腹泻造成腹痛有关。因小猪腹部疼痛，爬到母猪身上睡觉，可以利用母猪的体热，缓解腹部痛楚。
图 1 整窝发病，快速消瘦
图 2 腹泻粪便呈油性，粘满全身
图 3 发病小猪有爱爬到母猪身上睡觉的怪异行为
5 病理变化
眼观变化仅限于小肠，小肠扩张，肠壁变薄，透明，内充满黄色液体，肠系膜充血，肠系膜淋巴结水肿，小肠绒毛缩短。组织学变化：见空肠段上皮细胞的空泡形成和表皮脱落，肠绒毛显著萎缩。绒毛长度与肠腺隐窝深度的比值由正常的 7:1 降到 2:1 或 3:1。上皮细胞脱落最早发生于腹泻后 2 h。
超微结构变化主要发生于小肠细胞胞浆中，细胞器减少，出现电子半透明区，接着微绒毛和末端网状结构消失，部分胞浆突入肠腔，肠细胞变平、紧密连接消失，脱落进入肠腔内。在结肠，含病毒的肠细胞出现一些细胞病变，但不见细胞脱落。
6 流行现状
在一些防疫条件不佳或产房、保育舍防潮保温设备比较落后的猪场，该病几乎每年都出现暴发性流行，并导致大批哺乳小猪乃至保育小猪脱水死亡。如猪场防疫条件较好，且产房、保育舍防潮保温设备比较先进，该病暴发的风险略低，但亦难以百分百保证不出现暴发流行。2011 年秋末至 2012 年夏初，全国 70%以上的猪场暴发此病。甚至在全年气温最高的 7, 8 月份，仍有猪场出现暴发流行。显示 PEDV 的致病力，有逐步加强之势。
一般观察到如下临床表现：（1）哺乳小猪常整窝发病，先吐后泻，腹泻粪便呈水样，并因脱水而快速消瘦，挤压腹泻小猪腹部有水柱状稀粪从肛门喷出；（2）腹泻粪便腥臭；（3）腹泻康复小猪全身沾满油渍；（4）部分发病哺乳小猪有爱趴到母猪身上睡觉的特异行为，即可基本认定腹泻病原属于病毒性的。如果发病猪病料经实验室 PCR 检测存在 PED 病原，即可进一步确诊猪病毒性腹泻的主要病因，为猪流行性腹泻。
送实验室作 PCR 检测的病料，须来自发病猪空肠后段至回肠段肠道及肠道内容物。采集方法：先用细线把须采样送检的肠道两端扎死，剪出该段肠道，连肠道内容物一起，- 20℃ 冰箱急冻保存，并及时送实验室检测。
据赛普诺®技术团队对过百个猪场的生产应用观察：目前经生产实证对猪流行性腹泻免疫唯一有效的疫苗，仍只有超高抗原猪流行性腹泻组织灭活苗（以下简称腹泻高效苗）。但为提高腹泻高效苗的免疫效果并有效预防传染性胃肠炎，猪场每年最少仍需选用来源正当的腹泻二联或三联苗（如天邦或诺蓓威腹泻二联灭活苗）对所有母猪一刀切作 1 次普免。
腹泻高效苗每头份（相当于 10 mL）的抗原含量，相当于普通腹泻苗的1000 倍。观察发现：经过腹泻高效苗紧急免疫的母猪，母源抗体对小猪的免疫保护效果不是一般地好。经第 1 次紧急免疫约 7 天后，小猪发病明显减少，症状明显减轻；经第 2 次紧急免疫后，小猪发病基本被控制。连续 3 年对多个免疫猪场观察：只要是经过 2 次腹泻高效苗有效免疫的母猪，终其一生所哺育的小猪都不会发生腹泻。
（1）后备母猪。选用天邦或诺蓓威腹泻二联灭活苗，按选留或购进批次，每批于配种前免疫 2 次。两次免疫的时间间隔，最好达到 21 天或以上，最短不能低于 14 天。每次免疫每头颈部肌肉注射 1 头份（相当于 2mL）。
（2）经产母猪。选用天邦或诺蓓威腹泻二联灭活苗，每年 10 月全群普免 1 次，每头颈部肌肉注射 1 头份（相当于 2 mL）。28 天后，猪场如有腹泻高效苗可供选用，选用腹泻高效苗，全群再加强免疫 1 次，每头颈部肌肉注射接种 10 mL。
腹泻疫情一旦发生，经济损失在所难免，但如果紧急免疫、空栏消毒和发病猪对症治疗等综合措施应用得当，一般经过 2 周左右时间，疫情即可有效被控制，疫情暴发对生产造成的损失，可以降低至很小。
选用腹泻高效苗，所有经产母猪全群紧急免疫 1 次，2 周后再加强免疫 1次。每次免疫每头颈部肌肉注射接种 10 mL。
哺乳小猪断奶空栏后，如果产床的漏缝地板能够拆开，最好把漏缝地板拆开后再消毒，以减少清洗和消毒存在的死角。拆开后的漏缝地板，冲洗干净后用 3% 烧碱溶液浸泡。栏架、保温箱和生产用具等冲洗干净后，喷淋 3% 烧碱溶液消毒。待产母猪上产房前 1 天，装上漏缝地板，产床、保温箱和生产用具等再次冲洗干净，用 0.25% 消特灵喷雾消毒 1 次。
坚决做到全进全出，合理安排好小猪断奶时间（必要时提前断奶），小猪断奶时母猪和小猪同时移出产房，保证每个单元产室断奶后空置时间 5 天以上。产室空置期间，如果条件允许，24 小时连续负压抽风排气，置换空置产室的室内空气，并让产室内的尘埃自然漂散或干燥，以逐步减少空气中的尘埃量或通过自然干燥使尘埃中的 PED 病原灭活。如果产室密封条件好，空置期间最好采用“福尔马林+高锰酸钾”的办法熏蒸消毒。
根据不同生产阶段的猪舍建筑结构、栏舍设备配套情况及 PED 对不同生产阶段猪群危害的严重程度，对于不同生产阶段的猪群，可考虑选择不同的治疗方案：
（1）哺乳小猪。思密达（或其他品牌的蒙脱石类止泻剂），每天 2 次，每次每头 3g，温水调至糊状灌服，结合日常治疗黄白痢或猪球虫病常用的抗生素肌肉注射，直到腹泻症状停止。
（2）保育小猪。饮水中添加食品级柠檬酸（添加量约 0.5%，以 pH 值达到 4 以下为准），必要时还可加入一些耐酸的抗生素，如：阿莫西林（250g / 吨饮水）、强力霉素（150g / 吨饮水）或伴畜安（500g / 吨饮水）。
小猪饮用柠檬酸水，可增加胃肠道酸度，抑制 PEDV 在胃肠道内繁殖。保育小猪饮水中添加柠檬酸治疗，不但可以确保发病猪顺利康复，而且发病猪病程也可大大缩短。据赛普诺多个客户猪场反映：这种方法若应用得好，发病猪群一般在发病 3～4 天后即可恢复正常采食，病情严重程度大大降低，基本能够做到腹泻对保育小猪的健康和后续生长无任何影响。一些哺乳后期出现腹泻症状的小猪，亦可考虑提前断奶至保育舍让其饮用柠檬酸水，即可加快小猪痊愈，又可大大减少对发病小猪治疗的工作量。
（3）中大猪。如果发病不很严重，可考虑让其自然耐过。反之，须考虑饲料中添加抗生素（如痢菌净）预防继发感染，并可同时添加思密达或其他品牌的蒙脱石类止泻剂（ 2 kg / 吨饲料），减少病毒感染对肠道粘膜的损伤。
（4）种公猪、空怀或妊娠母猪、后备公母猪。无须治疗，让其自然耐过。
（5）哺乳母猪。出现症状后须及时止泻，减少腹泻粪便对产床的污染。止泻方法：颈部肌肉注射痢菌净（乙酰甲喹），每天1 次，每次每千克体重 3 mg。必要时也可饲料中投喂思密达或其他品牌的蒙脱石类止泻剂，1 日 2 餐，每餐5g。
9.1 PED 有违常理的临床表现
据赛普诺®技术团队对广东省内外过百个 PED 发病猪场的临床观察，发现PED 的如下 2 个临床表现，违背常理：
一些产前曾经出现过腹泻症状的腹泻发病耐过母猪，产后哺乳小猪仍然腹泻。母猪经野毒感染所产生的母源抗体，不足以为哺乳小猪提供坚强的免疫保护。
一些成功应用腹泻高效苗紧急免疫成功地控制了 PED 疫情的猪场，哺乳小猪一直很正常，但母猪零星的腹泻症状，却一直可以持续很长时间。哺乳母猪一边腹泻一边哺乳，小猪不受任何影响。
综合以上 PED 违背常理的临床表现，结合 PEDV 只能在小肠和结肠柱状上皮细胞浆中进行复制的病原学特征，对于 PEDV 的免疫机理，可归纳为如下几点（如图 4）：
消化道的局部感染，也许可以通过刺激肠道的细胞免疫反应，为感染猪本身提供免疫保护，但不能刺激机体产生有效的体液免疫反应，诱发具有免疫保护能力的体液免疫抗体。
由于 PEDV 不能在小肠和结肠绒毛细胞之外的其他组织器官中增殖和复制，病毒侵入机体小肠和结肠绒毛细胞并在其中大量复制和增殖后，虽可通过淋巴和血液循环的转移有效接触机体的体液免疫系统，但因进入淋巴和血液循环后就不再复制和增殖，体液免疫系统所能接触到的抗原非常有限，难以产生高效的体液免疫抗体。
图4 PED 免疫机理示意图
肌肉注射接种 PED 抗原，可有效刺激机体体液免疫反应产生免疫抗体。只要接种的抗原量足够多，体液免疫反应产生的母源抗体足够高，母源抗体通过初乳的传递，即可为哺乳小猪提供坚强的免疫保护。
体液免疫反应产生的免疫抗体，不能为机体自身提供有效的免疫保护。这可能是因为免疫抗体不能进入肠道柱状上皮细胞。免疫抗体水平再高，但因无法进入肠道柱状上皮细胞，或虽有部分能够进入肠道柱状上皮细胞但数量不够，不能完全中和肠道柱状上皮细胞中受感染的大量 PEDV 病毒，从而不能为机体提供有效的免疫保护。
免疫抗体不能为自身提供有效的免疫保护，却可以通过初乳传递途径为哺乳小猪提供有效免疫保护。这是 PED 异于其他传染性疾病的一个非常独特之处。
目前大多数腹泻三联（或二联）疫苗（包括弱毒苗和灭活苗）的产品说明书，都主张该疫苗应作后海穴注射，很多猪场也是按说明书推荐的方法作后海穴注射。但基于以上 9.2 的论述，由于肠道局部感染不能有效刺激机体体液免疫反应产生具有免疫保护能力的母源抗体为哺乳小猪提供免疫保护，PED 疫苗不适宜用后海穴注射。
仅从保护母猪本身角度，且选用的是 PED 弱毒苗，后海穴注射接种方式或许存在一定的科学根据。因后海穴注射可以把疫苗推送至最接近直肠的位置，使病毒快速到达肠道，并在肠道定植和复制，更好地刺激肠道局部细胞免疫反应。但灭活苗推荐后海穴注射免疫接种方式，没有任何科学根据。
2012 年，赛普诺®技术团队曾对某广泛被选用的腹泻三联弱毒苗三种抗原和腹泻发病小猪病料 PEDV 抗原进行过一次对照定量检测。
对该疫苗中三种抗原定量检测结果显示：疫苗中猪传染性胃肠炎和轮状病毒的抗原含量，分别相当于 PED 抗原含量的 25 倍和 2.5 倍。
对照腹泻发病小猪病料和疫苗的检测显示：PED 发病小猪每克小肠与肠道内容物混合物中的 PEDV 含量，超过每头份腹泻三联弱毒苗中 PEDV 抗原含量的 200 倍。
2016 年冬，赛普诺®技术团队再次对广东某腹泻发病猪场的小猪病料进行检测，将发病小猪病料稀释到 800 倍，PCR 检测仍能电泳出清晰的扩增产物条带（如图 5）。相当于将发病小猪病料稀释到 800 倍，PCR 仍能检测出腹泻病毒。
图 5 腹泻发病小猪病料 PCR 检测结果
以上两次对腹泻发病小猪病料的检测结果，均显示腹泻发病小猪病料中的 PEDV 抗原含量超高。
快速有效控制猪流行性腹泻疫情的关键，在于成功地获取符合技术要求的超高抗原病料，要求所采集到的腹泻病猪病料稀释到 200 倍， PCR 仍能检测到腹泻病毒。
9.5.1 超高抗原腹泻病料采集操作
自观察到小猪开始出现呕吐或腹泻症状后，停止使用任何药物，待挤压小猪腹部可以看到肛门有水柱样腹泻物喷出时，即行剖杀小猪。打开小猪腹部，自十二指肠开始逐渐往下翻，当发现肠道开始出现肠壁变薄、肠道充盈黄色或乳白色混浊液体时，用细绳把肠道结死，然后再顺着肠道往下翻，直至见不到肠壁变薄、肠道充盈黄色或乳白色混浊液体的肠道时，再次用细绳把肠道结死，用剪刀剪去两个结以外的肠道，留下两个结之间的肠道，即是所需要的病料。冰箱 -20oC 冷冻保存备用。
图 7 超高抗原 PEDV 病料采集操作
9.5.2 超高抗原腹泻病料采集注意事项
生产上为成功地获取符合技术要求的超高抗原腹泻病料，必须特别注意如下几方面问题：
疫情流行阶段的把握。通常情况下，在疫情暴发初期，由于母猪母源抗体水平较低甚至完全没有，小猪发病最典型。在这个阶段，所采病料病毒含量最多。据实验室检测结果，这个阶段所采的病料，30% 的检测样本稀释至 400 倍 PCR 仍可检测出腹泻病毒；100% 的检测样本稀释至 200 倍 PCR 仍可检测出腹泻病毒。
随着疫情发展，大部分母猪在经受野毒感染后，逐渐产生母源抗体，因母源抗体对病毒存在一定中和作用，发病小猪肠道及肠道内容物中的病毒含量逐渐降低。
发病后用药对病料抗原的影响。一般出现呕吐或腹泻症状后用过药物治疗的小猪，所采病料稀释到 50 倍，PCR 基本都检测不出腹泻病毒。不管用作治疗的药物是抗菌素，还是蒙脱石之类的止泻剂。具体原因未知。
小猪发病时间的把握。小猪发病初期，肠道病变刚刚开始，发生病变的肠道长度较短，肠道及肠道内容物中的病毒含量有限。随着病程发展，发生病变的肠道逐步延长，肠道及肠道内容物中的病毒含量逐渐增多，并逐渐达到高峰。但高峰期过后，因肠粘膜不断脱落，肠壁逐渐变薄，肠壁所含病毒越来越少；随着肠道内容物逐渐被排空，随肠道粘膜脱落至肠道内容物的病毒也因之逐渐被排空，肠道内容物中的病毒也越来越少。
如要采集到病毒含量较高的病料，就必须根据发病小猪肠道及肠道内容物中病毒含量的这一变化规律，选择一个小猪发病恰当的时间点，以确保在这个发病时间点内，小猪肠道及肠道内容物中病毒含量最高。据多个猪场的临床经验：这个时间点，一般在小猪开始出现呕吐或腹泻症状后的12～24 小时。在这个时间点内，剖出的小猪可见 70% 以上肠道已出现病变，肠壁开始变薄，肠道充盈黄色或乳白色混浊液体（如图 6 右上）。如果剖杀过晚，小猪肠道虽 100% 已出现病变，但肠道内容物已被排空，整个肠道充盈透明水样液体。这种透明水样液体，成份主要是肠道脱水渗出的体液，病毒含量不多（如图 6 左下）。
变肠段的选取。理论上，由于 PEDV 主要在空肠中后段、回肠、盲肠粘膜绒毛柱状上皮细胞内复制和增殖，应以自空肠中后段至盲肠之间，出现肠壁变薄、肠道充盈黄色或乳白色混浊液体的肠道及肠道内容物为主（如图 6 右上和右下）。
实际剖杀腹泻发病小猪时，经常会发现结肠的肠道及肠道内容物病变看似更典型，抗原含量应该更高一些。但实验室检测结果表明：结肠及肠道内容物中的 PEDV 抗原含量其实不高，稀释到 50 倍 PCR 基本都检测不出腹泻病毒。
图 6 腹泻小猪发病不同阶段的病料比较
9.6 PED 疫苗质量问题及疫苗研发方向
现阶段，传染性胃肠炎和轮状病毒的疫苗质量问题，已经基本解决。只要是母猪群免疫过正规厂商腹泻三联弱毒苗或灭活苗的猪场，基本都不会再出现猪传染性胃肠炎和轮状病毒流行。这些猪场如发生病毒性腹泻，基本都是 PED。
腹泻三联弱毒苗或灭活苗对 PED 免疫效果较差的根本原因，仍是疫苗中 PEDV 抗原含量不足。基于以上 9.4 的检测结果，同种疫苗中，PEDV 是疫苗中三种抗原中含量最少的一个。由于 PEDV 对细胞的适应性差，PEDV 的细胞培养相当困难。如何有效提高疫苗中的 PED 抗原含量，乃是研制免疫效果确切的 PED 疫苗首先必须克服的技术问题。
如果选用弱毒疫苗方案，也许将每头份疫苗中的 PEDV 抗原量提高 10~20 倍，就能达到预期效果。抗原量提高 10~20 倍，技术上也应该不难做到，问题是 PED 的弱毒疫苗方案不可行。
PEDV 虽然通过肌肉注射最易感，但因不能在小肠和结肠以外的其他组织器官内增殖和复制，弱毒疫苗通过肌肉注射到达注射部位后，活病毒的数量并不能通过增殖的方式在体内进一步增加。选择肌肉注射接种方式，同等抗原含量的 PED 弱毒苗与灭活苗，理论上免疫效果并无差异。
选择后海穴注射，也许可以使 PED 活病毒快速转移至肠道柱状细胞，并在肠道柱状细胞中增殖和复制。但基于以上 9.2 的论述，后海穴注射不能诱导有效的母源抗体以为哺乳小猪提供免疫保护。别说是后海穴注射，就算直接把活病毒接种至肠道柱状细胞，也无法实现通过免疫接种诱导母源抗体以为小猪提供免疫保护的目的。PED 疫苗的研究开发，只能选择灭活苗途径。但灭活苗如需要取得预期免疫效果，每头份的抗原量，最起码应该在现有疫苗抗原量的基础上提高 1000 倍。
弱毒苗后海穴免疫接种，是否真正能够为被接种猪提供有效的免疫保护，仍是一个不确切的命题。所幸 PED 对成年猪和 10 日龄以上的小、中、大猪影响都不大，且化学药物也很容易控制，因此，对于不用哺育小猪的成年公猪和小、中、大猪，基本没有免疫必要，PED 唯一需要免疫的猪群，只有母猪群（包括后备母猪和经产母猪）。
生产实践证明，腹泻高效苗免疫方案，是直到目前为止控制腹泻疫情的唯一有效方案。但腹泻高效苗的获得，完全取决于能否成功获得符合技术要求的超高搞原的腹泻病料。鉴于获取超高抗原腹泻病料的代价非常昂贵，一些猪场因舍不得投入昂贵的疫苗费用，只愿意对部分重胎母猪进行免疫。疫情暂时性被控制后，当未免疫过腹泻高效苗的母猪开产时，仍有可能再度复发。而疫情一旦复发，基本很难再次找到符合制作腹泻高效苗的原料，从而把猪场 PED 疫情综合防治工作逼入绝境。这就是所谓舍不得孩子套不到狼！
在一些只对部分母猪作腹泻高效苗紧急免疫或选用抗原量达不到技术要求的“腹泻高效苗”免疫的猪场，当小猪再度发病时，所采病料稀释到 100 倍，PCR 基本都检测不出腹泻病毒，大多数猪场都在稀释到 50 倍 PCR 仍可检测出腹泻病毒的水平。
很多学者都主张反饲，不少猪场的技术人员也热衷于反饲。但生产实践证明：这些学者和技术人员可能都高估了反饲的作用。虽然部分猪场通过反饲幸运地控制了 PED 流行，但这种幸运不能被当作一种成功经验广为传播。生产上，不少猪场都深受反饲之害。
反饲相当于让母猪消化道接受 PED 野毒人工感染。如上 9.1 和 9.2 所述，由于消化道局部感染无法刺激机体产生有效的体液免疫反应，诱发具有保护能力的体液免疫抗体。通过收集腹泻发病小猪粪便投喂母猪、以期刺激母猪产生母源抗体为哺乳小猪提供免疫保护的反饲方法，其对于预防哺乳小猪发病的预期效果，实际非常有限。
适得其反的是，由于母猪在 PEDV 感染期内，血液和乳液中均存在大量 PED 病毒，且有的感染猪在临床症状消失很长时间（63～74d）后仍可向外排毒，反饲方法若应用不当，如某些猪场所执行的反饲方案一样，定期于母猪预产期某个时间点进行反饲，其不但将人为导致 PED 野毒在母猪群中长期存在，延长母猪群 PEDV 带毒期，而且人为导致部分母猪乳液带毒，小猪哺食过带毒的初乳或常乳后，初生小猪因接触初乳中的病原而直接感染发病，哺乳小猪也将因持续受到常乳中的病原刺激而加剧腹泻和脱水症状。
最近几年的 PED 疫情，很多猪场小猪发病都比较早，有的哺乳小猪出生当日即出现腹泻症状。这很容易让人怀疑 PEDV 是否存在胎盘垂直感染途径。但从已有的研究[18]和多个猪场综合防治的临床经验来看：PEDV 不存在胎盘垂直感染传播。
之所以小猪发病比较早，可能与 PED 的发病潜伏期较短有关。因发病潜伏期比较短，小猪自感染至出现症状的时间也就比较短。PEDV 人工感染的潜伏期仅为 8～24h，理论上，小猪出生 8 小时后，即有可能出现腹泻或呕吐症状。
既然母源抗体对哺乳小猪存在坚强的免疫保护，为什么一些坚持对母猪作腹泻高效苗免疫的猪场，仍不时会出现哺乳小猪 PED 散发性发病呢？这其中存在一个小猪乳前或早期感染问题。虽然母源抗体对小猪存在免疫保护作用，但小猪自开始哺食初乳到初乳中的母源抗体对小猪产生健全的免疫保护需要一段时间（一般 7～10 天），如果小猪在哺食初乳之前已经接触过 PED 病原，或虽在哺食初乳之前未接触过 PED 病原但在初乳中母源抗体对小猪形成健全免疫保护之前接触过 PED 病原，仍会受这些病原感染而出现腹泻症状。
发病潜伏期短，以及小猪乳前或早期感染的存在，为 PED 的综合防治带来巨大困扰，也是导致当前很多猪场 PED 疫情蔓延不止的关键性因素。
PEDV 呼吸道感染的感染力虽不强，但这种感染途径却是客观存在的。在一些 PED 发病比较严重的猪场，产房室内弥漫着一股浓烈的、病毒性腹泻所特有的腥溴味，空气中漂浮着大量被 PED 病原污染过的尘埃粒子。如果空气中的 PED 病原净化不彻底，小猪通过呼吸接触到这些病原，或通过口舌接触到这些病原后，同样会受这些病原感染而发病。
无论初乳中母源抗体多么高效，只要小猪周围环境中仍然存在 PED 病原，且小猪在母源抗体对其产生有效免疫保护之前（正常情况下需要 7～10 天时间）接触到这些病原，各种加强对母猪免疫以期通过母源抗体保护小猪的努力，都将化为泡影。
小猪断奶后的产床空栏消毒和产房室内空气净化，是彻底切断 PED 病原从前一批哺乳小猪传染给后一批小哺乳小猪的唯一有效途径。在一些坚持对母猪作腹泻高效苗免疫的猪场，哺乳小猪仍会不时出现 PED 散发甚至暴发，但把母猪移出到其他猪舍产仔和哺乳，小猪一切正常，一回到产房产仔和哺乳，小猪马上有问题。神奇得就象一些迷信的养猪朋友所说的那样：产房有“鬼”。为了驱“鬼”，有人请道士，有人贴避邪符。关键问题乃是空栏和消毒措施做得不够彻底，哺乳小猪乳前或在母源抗体对哺乳小猪形成坚强免疫保护之前已经接触到周围环境或空气中的 PED 病原。
如果母猪已经按免疫程序作过腹泻高效苗免疫，PED 疫情仍无法有效彻底被控制，必须进一步认真检讨一下如下几个方面的工作是否仍存在纰漏：
消毒剂的选用是否合理？因 PEDV 耐酸性较强，普通消毒剂（特别是一些猪场爱用的酸碘消毒剂）对 PEDV 的消毒效果都不是很理想，必须做到用两种以上不同成份的消毒剂各消毒一次，且其中一次必须选用烧碱。
空栏消毒是否留下卫生死角？空栏消毒如果做得不够细致，很容易留下卫生死角。若潜藏在这些卫生死角的 PED 病原不被彻底清除，空栏消毒仍然难以实现预期效果。
有没有充分考虑 PED 存在空气传播途径这一因素，采取相应措施对产房室内空气中的PED病源进行净化？
在一些经过最严格空栏消毒措施 PED 仍难以根治的猪场，可能还需要考虑备用产栏方案。辟出适当数量远离产房的中大猪栏、公猪栏、后备母猪栏或妊娠母猪限位栏，作为备用产栏。平时只要观察到散发性病例，即时隔离至备用产栏饲养，空出的产栏即时喷洒 3% 烧碱溶液消毒。如果发病数量多、病情严重且难以控制，须考虑把所有产房母猪和哺乳小猪隔离至备用产栏饲养，把所有产房全部空出，经彻底空栏消毒至少 7 天后，再上新的待产母猪。
9.13 充足的母乳对于快速有效控制疫情的重要意义
腹泻高效苗控制猪流行性腹泻的机理：在于通过免疫母猪产生高效的母源抗体，小猪通过吸食母乳获得母源抗体，直接进入胃肠道中和胃肠道中的腹泻病毒。如果没有充足的母乳，再高效的母源抗体也无法通过母乳有效传递给小猪。所有为控制疫情而付出的努力，结果都必然只是一个画饼。
为保证充足的母乳，一是要舍得花钱购买价钱稍贵的大品牌饲料，二是一定要想办法控制好猪群的衣原体感染。以赛普诺技术团队对养猪行业的了解：目前在国内，至少有 70% 以上的猪场存在严重衣原体感染。感染过衣原体的母猪，产后长期低烧，乳房炎，无乳或严重缺乳，再高效的腹泻高效苗用在这些母猪身上也难以见效（详见相关阅读：《衣原体性腹泻》）。
9.14 相关病原的控制问题
除衣原体外，与腹泻疫情控制相关的病原，还有蓝耳 - 链球综合症。近一两年，赛普诺技术团队在协助多个猪场处理疑似猪流行性腹泻疫情的过程中，发现这些猪场的腹泻发病小猪排泄物都能同时检出传染性胃肠炎和流行性腹泻病毒，且小猪发病后期都出现毛长、关节肿大等蓝耳 - 链球综合症症状，腹泻高效苗免疫效果都不尽如人意，但加强控制好蓝耳 - 链球综合症后，腹泻症状却逐渐消失了（详见相关阅读：《链球菌性腹泻》）。
[1] 郭林, 唐利, 刘昱. 2011年病毒性腹泻的新特点和防控措施[J]. 猪业科学, 2012, (2): 54-55.[2] Sueyoshi M, Tsuda T, Yamazaki K, et al. An immunohistochemical investigation ofPorcine epidemic diarrhea[J]. Comp Path, 1995, (113): 59-67.
[3] Knipe DM, Howley PM, GriffinDE, et al. Fields virology(4thed) [M]. Philadelphia: LippincottWilliams & Wilkins , 2001.
[4] Kocherhans R, Bridgen A, Ackermann M , et al. Completion ofthe Porcineepidemicdiarrhoea coronavirus (PEDV) genomes equence[J] . Virus Genes, 2001,23(2): 137-144.
[5] Song DS , Yang JS, Oh JS, et al. Differentiaion of a Verocelladapted Porcineepidemic diarrhea virus from Korean fieldstrains by restriction fragment lengthpolymorph ismanalysis ofORF 3[J]. Vaccine, 2003, 21: 1833-1842.
[6] Kang TJ, Seo JE, Kim DH, et al. Cloning and sequence analysis of the Koreanstrain of spike gene of Porcine epidemicdiarrhea virus and expression of itsneutralizing epitope inplants[J]. Protein Expr Purif , 2005, 41( 2) : 378- 383.
[7] Lee HK, YeoS G. Cloning and sequence analysis of the nucleocapsid gene ofPorcine epidemic diarrhea virus Chinju 99[J]. Virus Genes, 2003, 26( 2) :207-212.
[8] Fan JH , Li YJ . Cloning and sequence analysis of the Mgeneof Porcine epidemicdiarrhea virus LJB/ 03[J] . VirusGenes, 2005, 30(1): 69-73.
[9] 余丽芸, 侯喜林. 流行性腹泻病毒M基因与甲病毒载体重组RNA的构建[J]. 动物医学进展,2005, 26(5): 73-76.
[10] 孙东波, 冯力, 时洪艳, 陈建飞. 猪流行性腹泻病毒分子生物学研究进展[J]. 动物医学进展, 2006, 27(10): 11-14.
[11] Kadoi K, Sugioka H, Satoh T, et al. The propagation of a Porcineepidemicdiarrhea virus in swine celllines[J]. NewMicrobiol , 2002, 25(3): 285-90.
[12] 宣华, 邢德坤, 王殿瀛, 等. 应用猪胎肠单层细胞培养猪流行性腹泻病毒的研究[J]. 中国人民解放军兽医大学学报, 1984, 4(3): 202-207.
[13] 李树根, 李施力, 霍燕琼, 等. 使用细胞培养单层分离猪流行性腹泻病毒[J]. 中国兽医科技, 1991, 10: 24-25.
[14] 蔡宝强. 家畜传染病学[M].第4版. 北京:中国农业出版社, 2002. 216-218.
[15] 王新平, 朱维正. 猪流行性腹泻病毒实验感染猪排毒规律的研究[J]. 兽医大学学报，1988, 8(1): 59-63．
[16] 徐国栋, 李峰, 张广峰. 国内猪流行性腹泻防治概况[J]. 畜牧与兽医, 2011, 43(12): 88-92.
[17] 张远钰. 猪流行性腹泻发病机制及免疫病理学研究进展[J]. 中国病理生理杂志, 1992, 8(4) : 443-446．
[18] 冷和平, 丘民希, 曾俊霞. 从一个猪场的临床案例解析猪流行性腹泻的综合防制问题[J]. 养猪, 2012, (4): 99-103.
联系客服
