之前我们简单介绍过全血、血浆、血清（“IVD仪器检测的全血、血浆、血清是什么？”），血液中除了占比55%的液体成分血浆，另外一类主要的有形成分就是占血液比重45%的血细胞。
而去医院看病，做的“血常规”检测，其实就是针对血细胞进行检测。血细胞主要包括了：红细胞、白细胞、血小板。血细胞因为其形状也被称为血球，所以血细胞分析仪，也被称为血球仪。
血常规主要通过血细胞分析仪，对全血中的血细胞进行检测，比如对红细胞、白细胞、血小板进行计数和百分比计算；对红细胞和血小板体积分布进行检测等。
血细胞分析仪进行血常规检测，总会提到三分类（3diff）、五分类（5diff）这两个概念。其实主要是指的血细胞分析仪对白细胞的分类能力。分类，来自于英文的Differential。
如果血细胞分析仪能从白细胞中区分出淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞，则被称为五分类。如果只能区分出淋巴细胞、单核细胞、粒细胞，则被称为三分类。
注：中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞三种粒细胞，细胞内有颗粒，所以都被称为粒细胞，如上面的分化示意图。其中嗜酸性粒细胞内部的颗粒，能被酸性染料很好的染色。嗜碱性粒细胞内部的颗粒，能被碱性染料很好的染色。而中性粒细胞内部的颗粒，对酸、碱性的染料都不敏感。
如下图是一张五分类血细胞分析仪的检验报告。
下面一张图是三分类的血细胞分析仪的检验报告。
对于三分类，有的仪器上是指淋巴细胞、单核细胞、粒细胞三种，有的则是淋巴细胞、中间细胞、粒细胞。大部分的三分类仪器只有Coulter直流阻抗法（“Coulter原理”）的测试通道，Coulter直流阻抗法只能测出细胞的体积大小。但嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和单核细胞，在体积上是重合的。
同时嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和单核细胞这三种细胞体积大小，介于淋巴细胞和嗜碱性粒细胞体积之间，所以称为中间细胞（或混合细胞）。
而且部分体积较大的淋巴细胞和部分体积较小的单核细胞，在体积大小这个参数上是有重叠的；部分体积较大的单核细胞和部分体积较小的粒细胞细胞，在体积大小这个参数上也有重叠。
最终在一张白细胞体积分布直方图上，只能根据界标（以某个体积为分界值，如上图T1、T2），强行按界标将白细胞划分为三类，并计算相应细胞群的数量、百分比等。
可以看出，如果仅仅只有一个直流阻抗法（“Coulter原理(1)--塑料纸上诞生的自动血细胞计数仪”）测试通道的三分类仪器，所得到的三分类结果并不准确，只能是一个大概值。
这就像让一个人去一个看不见内部的盒子里盲抓不同类型的小球，手只可以感知球的大小，但抓到同一大小的球，颜色或者球内部包裹的东西可能不一样，并不是同一种球。
单纯的一个细胞体积大小参数，无法实现准确的白细胞种类识别，因为白细胞之间的体积大小分布是存在重叠的。后来诞生了射频电阻法，即在Coulter直流阻抗法的基础，增加一个射频信号。
射频（Radio frequency，RF）又称无线电频率、无线射频、高周波，为在 3kHz至 300GHz这个范围内的振荡频率，这个频率相当于无线电波的频率，以及携带着无线电信号的交流电的频率。
在Coulter电阻法的恒流源上叠加一个射频信号，射频遇到细胞后，会穿透细胞膜，细胞膜内的粗糙、复杂的细胞核会对射频信号形成一定程度的阻挡。细胞的核型复杂程度不同，经过的射频表现出来的脉冲信号不同，基本上呈正比关系。即细胞内部复杂度的参数可以被识别出来。
射频就像给盲抓小球的手增加了一个感知体积大小之外的探测器，提高了手抓目标小球的准确性。
淋巴细胞、单核细胞、粒细胞在体积上有重叠，但细胞内部复杂度不同，射频信号会有差异。体积参数 细胞核复杂度两个参数，可以将白细胞的种类进行准确区分，如下图。
当然鞘流光学法，利用前向散射光（表征体积参数） 侧向散射光（表征细胞内部复杂度），也可以进行准确的三分类。
五分类需要进一步分出嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞，主流的是利用鞘流光学法的相关参数来进行区分，也有依靠射频电阻加特殊试剂的方案，后面会再做详细的介绍。
血常规检测，使用的真空采血管的类型是下面这种紫色管帽的采血管，里面增加了抗凝剂，可以看到内部有一些小液珠，就是抗凝剂。
相对于血细胞分析仪用来分析血液中的有形的细胞，生化分析、免疫分析等主要是用来分析血液中的液态的血清中的一些微量成分。
有了血细胞分析仪，已经分析出各种血细胞的信息了，为什么还进一步需要流式细胞仪呢？
在免疫学中，淋巴细胞的很多亚群（如下面的细胞分化示意图），起着不同的关键性作用，比如都属于淋巴细胞的T细胞（又分辅助性T细胞、抑制性T细胞）、B细胞、NK细胞。但他们都是淋巴细胞，体积、细胞内复杂度等参数都太相近了，无论是Coulter直流电阻 射频 前向散射光 侧向散射光，都无法将这些淋巴细胞亚群进行有效区分。
这个时候，就需要对关注的淋巴细胞亚群，采用特异性抗体染料进行标记，然后到流式细胞仪上测试，利用鞘流光学法，通过激光器将抗体染料激发，产生特定波长荧光，利用光电探测器检测荧光信号。这样就又多出了荧光参数，通过流式细胞仪可以分出更加细致的细胞亚群。这个我们后面讲到流式细胞仪时，再做详细介绍。
下面这个视频只演示了流式细胞仪的前向散射光（反应细胞大小）、侧向散射光（反应细胞内复杂度）两个参数，没有演示荧光。
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