以 PD-1/PD-L1 抗体为代表的免疫检查点抑制剂是近些年肿瘤免疫治疗研究的热点，目前已有多种 PD-1/PD-L1 抗体获得了美国 FDA 批准，用于治疗黑色素瘤、肺癌、尿路上皮癌等多个瘤种。患者对抗 PD-1/PD-L1 抗体的治疗应答与体内 PD-L1 的表达水平有关，因而 PD-L1 表达水平检测对于指导临床治疗和筛选获益人群具有重要价值。
近日在上海举办的肺癌免疫治疗新进展专家会上， Ventana 美国总部的病理学家张利平博士对美国 FDA 批准的 PD-1/PD-L1 抗体和相关检测产品做了介绍，比较了 4 种 PD-L1 检测克隆的特点，并以其中两个克隆号（Ventana SP263 和 Ventana SP142）为例，对其检测结果的判读标准进行了解读。
FDA批准的PD-1/PD-L1抗体和相关检测
目前，美国 FDA 批准的 PD-1/PD-L1 抗体包括 Nivolumab、Pembrolizumab、Atezolizumab、Avelumab 及 Durvalumab。各个药物目前已批准的适应证有所差异，其中值得注意的是 Pembrolizumab 近期被批准用于微卫星高度不稳定（MSI-H）的实体瘤的治疗，而无需考虑肿瘤的组织学类型。
除了 Avelumab 以外，其余四个药物都有对应的 PD-L1 检测，相应的检测技术见下表：
四种PD-L1检测克隆的比较
上述 4 种 PD-L1 检测克隆中仅 Dako IHC 22C3 为伴随诊断，其余均为补充诊断。两类诊断技术的开发、研制和临床验证过程一致，其区别在于伴随诊断对于安全、有效地使用相应药物是必需的，而补充诊断不是必需的，但可以帮助临床医生对个体患者的治疗风险/益处进行评估。
国际肺癌研究协会（IASLC）牵头发起的 Blueprint 项目对上述 4 种 PD-L1 IHC 检测克隆进行了比较。结果显示，28-8、22C3 和 SP263 对肿瘤细胞的染色特征相近，而 SP142 相对特殊，其对肿瘤细胞的染色呈「点状」特性（图 1）。另一方面，SP142 相比于其他 3 种克隆对免疫细胞的染色更为突出（图 2）。
图1：相比于其他 3 种克隆，SP142 对肿瘤细胞的染色呈点状特性
图2：SP142 对免疫细胞的染色更明显和突出
Ventana PD-L1检测判读标准解读
Ventana SP263
在非小细胞肺癌（NSCLC）中，SP263 对肿瘤细胞（TC）的染色可呈现不同模式，包括基底和侧面膜染色、单纯基底膜染色以及细胞质围核染色（图 3），后者实际并未在胞膜染色，应从阳性 TC 中排除。
图3：SP263对TC的染色模式
Ventana SP263 对肿瘤细胞（TC）PD-L1 表达的评估方法为：有任何强度 PD-L1 膜染色的肿瘤细胞在所有肿瘤细胞中所占的百分比；但计分报道的 PD-L1 表达水平只能以十分位数和四分位数表示。
SP263 对免疫细胞（IC）的染色呈弥漫性特征，其评估应包括如下肿瘤区域内的 IC：①与肿瘤连续的周围基质，②肿瘤细胞群内基质，但需排除坏死区（图 4）；IC 种类包括淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞、树突状细胞和粒细胞。
图4：肿瘤相关IC的评估范围
免疫细胞 PD-L1 表达的评分方法为：有任何强度 PD-L1 染色 IC 占总 IC 的百分比，同样只计分报道十分位数和四分位数。但与 TC 评估有所不同的是，若总 IC 为 1%，则计分报道的结果只能是 0%、＜100% 或 100%。
Ventana SP142
SP142 检测需要使用一套扩增试剂，这导致其染色特征与其他克隆不同，即扩增后将呈现为点状或颗粒状染色。SP142 对于 NSCLC 的肿瘤细胞染色表现为环周膜染色或基底膜和侧面膜染色（图 5），均可以是粒状染色。
图5：肿瘤细胞的H&E染色及SP142 IHC染色
SP142 对 IC 的染色常表现出深棕色点状或线状染色，可能显示圆周染色，可分布在肿瘤内和/或肿瘤周围基质中，也可以是单细胞分布和/或聚集体。这一特性使 SP142 检测下，IC 的染色更为「突出」和易于辨认。
Ventana SP142 对 TC 和 IC 染色的评估和评分需采用逐步评分法，根据染色细胞的百分比各分为 4 个等级（图 6）。
图6：SP142 对肿瘤细胞和免疫细胞的逐步评分方法
值得注意的是，SP142 对 IC 染色的评分方法为：肿瘤区域内有任何强度 PD-L1 染色的免疫细胞所占面积的百分比。这可能对病理医生的判读过程造成一定难度，但通过对 Ventana 提供的典型染色切片及参考图像的学习，可以更好的掌握 SP142 对 IC 染色的评分。
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