非小细胞肺癌 PD-L1（SP263）检测与判读

免疫治疗时代的到来，不仅促进了免疫治疗药物的不断革新和发展，更是将免疫治疗相关生物标记物的检测提升到了一个全新的高度。PD-L1 作为第一个获批的免疫治疗预测性标记物，目前已有 4 个免疫组织化学（IHC）检测获得 FDA/CE/NMPA 批准用于不同适应症的伴随或补充诊断，并且不同检测的判读标准以及 cutoff 值在不同适应症中也均有不同，因此其检测与判读具有相当的复杂性。

NSCLC 作为免疫治疗发展相对较快的领域，其 PD-L1 的检测自然也受到了更多的关注。如何准确规范的进行 PD-L1（SP263）检测及判读，有哪些注意事项和更高效的方法。2020 年 6 月 29 日，我们特别邀请了来自复旦大学附属肿瘤医院的李媛教授就《非小细胞肺癌 PD-L1（SP263）检测与判读》做了专题分享，分享围绕 PD-L1（SP263）抗体及判读要求、NSCLC PD-L1（SP263）检测与判读以及 NSCLC PD-L1（SP263）图像分析进行了逐一展开。

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PD-L1（SP263）抗体及判读要求

PD-L1 属于细胞膜上的一个跨膜蛋白，由胞外区，跨膜区和胞内区 3 个部分组成。PD-L1（SP263）抗体属于抗人源 PD-L1 兔单克隆抗体，抗原结合位点位于 PD-L1 蛋白的 284-290 位肽段（胞内区），除与该区域结合外，还有研究观察到 SP263 能够与 203-217 位肽段（胞外区）进行结合。

一个完整的 PD-L1（SP263）伴随诊断体系应包含：VENTANA BenchMark IHC 平台，PD-L1（SP263）抗体，VENTANA OptiView 检测试剂盒以及 PD-L1（SP263）评分系统。根据 2019 加拿大 CAP-ACP 发布的 PD-L1 检测指南建议：发布 PD-L1 检测的病理学家应该接受专业组织，试剂制造商或接受过 Train-The-Trainer 培训的病理学家提供的培训，此外病理学家还应对 PD-L1 IHC 诊断的准确性和判读精度进行验证。

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NSCLC PD-L1（SP263）检测与判读

PD-L1（SP263）IHC 检测的组织固定液推荐采用 10% 的中性福尔马林固定，固定时间为 6-72 h，不可接受用酒精进行固定，切片准备好后应尽快染色，如需保存，可在 2-8℃ 和 15-30℃ 进行保存，12 月以内完成染色；检测的阳性对照建议使用胎盘组织，可接受的胎盘染色模式为滋养层细胞呈强至中等强度的均一膜染色和弱至强的胞浆染色；PD-L1（SP263）的染色特征通常表现为肿瘤细胞（TC）环周膜染色，任何强度或模式的膜染色，包括基底、侧面的部分或完整环周膜染色都应纳入 TC 评分，但细胞质染色或仅基底膜染色不纳入评估范围；虽然在 NSCLC 的 PD-L1（SP263）的染色中只关注 TC 着色，但是 PD-L1（SP263）也会对免疫细胞（IC）进行染色，因此分辨 IC 和 TC 染色非常重要。

PD-L1（SP263）判读的评分标准为有任何强度 PD-L1 膜染色的肿瘤细胞在所有肿瘤细胞中所占的百分比（%）；整个 PD-L1（SP263）的判读流程需要 3 张连续切片，一张用于 HE 染色，一张用于 PD-L1（SP263）染色，一张用于兔单克隆抗体阴性对照染色，同时还需要将先前合格的人足月胎盘组织捞于同一张切片在同一仪器中运行染色，染色过程需要确保 HE 切片可接受，阳性/阴性对照组织切片染色可接受，并最终由经过培训的病理学家根据 VENTANA PD-L1（SP263）测定评分算法确定结果。

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NSCLC PD-L1（SP263）图像分析（IA）

通过 IHC 评估肿瘤细胞，肿瘤相关免疫细胞上的 PD-L1 表达是目前应用最广泛的检测手段，但由病理专家进行的判读通常为估值且工作量较大，此外，不同病理学家的判读可能由于经验习惯不同而存在主观差异，因此未来图像分析软件可能成为辅助病理学家提升 PD-L1 IHC 判读准确度的一个强大工具。基于自动化数字病理算法开发出的 uPath PD-L1（SP263）系统近日获得 CE 批准用于 NSCLC PD-L1（SP263）染色结果判读，目前的数据显示：PD-L1（SP263）IA 算法在 50% cut-off 评估阈值与人工评估高度符合，但在 1% cut-off 值的一致性较低，未来还需要进一步的机器学习来进行矫正。

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