早期非小细胞肺癌(eNSCLC)辅助免疫诊疗中PD-L1免疫组化（IHC）染色示例及解读

杨军教授

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西安交通大学第二附属医院病理科主任，博士，主任医师、博士生导师。

三秦人才津贴、教育部新世纪优秀人才、第五届陕西省青年科技奖获得者。

兼陕西省抗癌协会理事、陕西省抗癌协会肿瘤分子分型专委会主任委员，陕西省医师协会病理科医师分会副会长，陕西省医学传播学会理事、现代肿瘤杂志编委、南方医科大学学报特约编委。

主要从事病理诊断和生物技术研发。先后承担国家自然科学基金2项，获国家专利15项（转化2项），发表论文90多篇。

课程介绍

　　根据IMpower010试验结果，非小细胞肺癌辅助免疫治疗的关口发生迁移。2022年3月，中国国家药品监督管理局正式批准了阿替利珠单抗（商品名：泰圣奇, Tecentriq）单药用于PD-L1（SP263）检测病理诊断评估为≥1%肿瘤细胞（TC/TPS）PD-L1免疫组化染色阳性、经手术切除且以铂类为基础化疗之后的II-IIIA¹期非小细胞肺癌患者的辅助治疗。

IMpower010研究为eNSCLC辅助免疫治疗提供新思路

　　IMpower010是首个验证早期肺癌辅助免疫治疗疗效的III期临床研究。研究在IB-IIIA期经手术根治、1-4个周期辅助化疗后的NSCLC患者中对比了阿替利珠单抗（Atezolizumab）和最佳支持治疗（BSC）的疗效及安全性²。

　　研究表明，对于手术切除、化疗后经PD-L1（SP263）检测病理评估为≥1%肿瘤细胞PD-L1免疫组化染色阳性的II-IIIA期的NSCLC患者，与BSC相比，阿替利珠单抗单药辅助治疗显著延长患者无病生存期（DFS），疾病复发或死亡风险降低了34%（HR=0.66；95% CI:0.50-0.88；p=0.004），3年DFS率达到60%^3-5。

PD-L1检测在eNSCLC辅助免疫治疗中的临床价值

　　基于IMpower010研究的该项适应症已获FDA批准并被写入了2022肺癌NCCN指南（第8版）。推荐阿替利珠单抗用于Ⅱ-ⅢA期完全切除术后，驱动基因阴性，PD-L1（SP263）检测病理评估PD-L1表达阳性率≥1%肿瘤细胞PD-L1免疫组化染色阳性或Ⅳ期非小细胞肺癌EGFR，ALK，ROS1阴性且PS评分0-2分，均以铂类为基础化疗的NSCLC患者的术后辅助免疫治疗。上述适应症已获中国国家药品监督管理局正式批准，写入中国临床肿瘤学会（CSCO）非小细胞肺癌指南2022版推荐方案。

　　对于手术切除经PD-L1（SP263）检测病理评估≥50%肿瘤细胞PD-L1免疫组化染色阳性的II-IIIA期的NSCLC患者在辅助化疗后继续应用阿替利珠单抗治疗可降低57%肿瘤复发或死亡风险⁶。且阿替利珠单抗治疗组的早期复发或死亡事件更少。阿替利珠单抗的安全性特征与既往单药治疗和其他治疗线一致。

　　杨军教授表示,“研究结果表明，根据PD-L1（SP263）的检测结果对患者进行分层，更有利于评估及筛选出辅助性免疫治疗可能获益的潜在人群。这同时提示，对PD-L1检测进行规范并确保诊断结果的准确性和一致性对于早期非小细胞肺癌免疫辅助治疗有重要的临床价值。”

PD-L1（SP263）检测eNSCLC判读规则简介

　　IMpower010研究中, 是将用PD-L1（SP263）检测肿瘤细胞PD-L1的表达状态的病理评估设置为研究终点。总体而言，PD-L1检测结果的判读是病理医生在光学显微镜下评估肿瘤区域中PD-L1的染色情况，计算PD-L1染色阳性细胞的比例，并根据染色比例为临床治疗提供参考信息。

　　杨军教授表示，“依据PD-L1检测来指导肺癌后续临床治疗方案，因此，检测流程和染色判读的规范化则显得至关重要。临床病理实践中，PD-L1检测是采用免疫组化（IHC）方法完成的，检测前的组织处理必须应遵循病理规范化诊断总则要求。根据染色强度高于背景着色的膜染色肿瘤细胞百分比（%TC/TPS）来确定NSCLC组织中的PD-L1染色阳性的肿瘤细胞数^7,8。除保证检测前样本处理规范外，还应常规应设立阳性及阴性对照。正常胎盘组织（滋养层细胞强表达，绒毛间质细胞不表达）是建议采用的组织对照之一⁹。”

　　PD-L1（SP263）免疫组化染色评估NSCLC PD-L1表达关注的是肿瘤细胞表面PD-L1的表达情况（TC/TPS）。%TC/TPS肿瘤细胞阳性比例评分的定义为：

　　使用PD-L1（SP263）免疫组化染色时只观察肿瘤细胞膜染色情况，细胞质阳性着色忽略不计。部分或全部细胞膜表达的任何线性或颗粒状染色的肿瘤细胞均算作阳性细胞。若PD-L1（SP263）仅有肿瘤细胞基底膜染色不能算作阳性，需同时伴有侧膜染色时才可判为阳性。IMpower010研究涉及eNSCLC相关适应症中，TC/TPS<1%诊断为阴性表达，≥1%诊断为阳性表达。另外，对于肺癌PD-L1表达评估，TC/TPS 1%-49%为低表达，TC/TPS≥50%为高表达，上述数值区间均对临床用药有指导意义。免疫抑制剂临床实践相关界值有TC/TPS≥1%、≥5%、≥10%、≥50%。

　　根据判读标准，PD-L1（SP263）免疫组化染色结果的判读需要不少于100个肿瘤细胞，当肿瘤细胞数量不足100时，应在检测报告中明确注明样本中的肿瘤细胞数量。

PD-L1（SP263）肺癌判读实践示例及解读

PD-L1（SP263）免疫组化染色结果判读中的对照设置

表1. 足月胎盘对照组织PD-L1伴随诊断免疫组化染色结果评估标准

表2. PD-L1（SP263）表达强度

NSCLC PD-L1免疫组化染色不同阈值示例（TC/TPS）

NSCLC肿瘤细胞（TC）PD-L1（SP263）免疫组化染色示例

NSCLC，H&E和 PD-L1（SP263）检测：显示肿瘤细胞膜和细胞质染色不同范围的病例（20x）。

   以上三组图片分别展示了PD-L1在肿瘤细胞不同表达强度。当观察发现着色弱或不能准确判读着色位置时应切换至高倍镜进一步观察，并在高倍镜视野下进行判读。

NSCLC PD-L1（SP263）实践病例读片1

H&E 20X

PD-L1 20X

H&E：具有肺泡巨噬细胞的肿瘤细胞（箭头）。

VENTANA PD-L1（SP263）检测：阳性肺泡巨噬细胞染色（箭头）与相邻的PD-L1阴性肿瘤细胞，染色百分比为0。

判读结果：PD-L1（SP263）TC/TPS=0

NSCLC PD-L1（SP263）实践病例读片2

H&E 20X

PD-L1 20X

H&E：具有淋巴细胞和浆细胞免疫细胞的肿瘤细胞。

VENTANA PD-L1（SP263）检测：点状（蓝色箭头）和弥漫性（黑色箭头）免疫细胞染色与相邻的PD-L1阴性肿瘤细胞，染色百分比为0。

判读结果：PD-L1（SP263）TC/TPS=0

NSCLC PD-L1（SP263）实践病例读片3

H&E 40X

PD-L1 40X

H&E：具有中性粒细胞（蓝色箭头）的肿瘤细胞。

VENTANA PD-L1（SP263）检测：中性粒细胞显示PD-L1表达（蓝色箭头），病例也有肿瘤细胞膜染色（黑色箭头）。

判读结果：PD-L1（SP263）TC/TPS=70%

NSCLC PD-L1（SP263）实践病例读片4

H&E 20X

PD-L1 20X

VENTANA PD-L1（SP263）检测：肿瘤和免疫细胞染色均为阴性（0%）。

判读结果：PD-L1（SP263）TC/TPS=0

NSCLC PD-L1（SP263）实践病例读片5

H&E 10X

PD-L1 10X

VENTANA PD-L1（SP263）检测：不到1%的肿瘤细胞表现出膜染色。

判读结果：PD-L1（SP263）TC/TPS＜1%

NSCLC PD-L1（SP263）实践病例读片6

H&E 10X

PD-L1 10X

VENTANA PD-L1（SP263）检测：2%的肿瘤细胞表现出膜染色。

判读结果：PD-L1（SP263）TC/TPS=2%

NSCLC PD-L1（SP263）实践病例读片7

H&E 4X

PD-L1 4X

VENTANA PD-L1（SP263）检测：具有 5%细胞的肿瘤，以蓝色勾勒出膜染色。肿瘤区域（由活的肿瘤和周围的结缔组织增生和炎症组成）包含表达PD-L1的免疫细胞区域。

判读结果：PD-L1（SP263）TC/TPS=5%

NSCLC PD-L1（SP263）实践病例读片8

H&E 10X

PD-L1 10X

VENTANA PD-L1（SP263）检测：在低倍镜下可观察到10%的肿瘤细胞表现较弱的膜染色（黑色箭头）。此时应转为高倍镜进一步从膜染色中分辨出细胞质染色（尤其应观察蓝色箭头处）。

NSCLC PD-L1（SP263）实践病例读片9

H&E 10X

PD-L1 10X

H&E：坏死区域（蓝色箭头）。

VENTANA PD-L1（SP263）检测：20% 的肿瘤细胞表现出膜染色。注意从评分应排除坏死处（蓝色箭头）和着色的免疫细胞。

判读结果：PD-L1（SP263）TC/TPS=20%

NSCLC PD-L1（SP263）实践病例读片10

H&E 10X

PD-L1 10X

VENTANA PD-L1（SP263）检测：50%的肿瘤细胞表现出膜染色。应注意着肿瘤细胞包膜着色弱（蓝色箭头处）的区域也应参与评分。

判读结果：PD-L1（SP263）TC/TPS=50%

NSCLC PD-L1（SP263）实践病例读片11

H&E 20X

PD-L1 20X

VENTANA PD-L1（SP263）检测：全部肿瘤细胞膜染色（100%），且无肿瘤相关免疫细胞染色。

判读结果：PD-L1（SP263）TC/TPS=100%

　　总之，确保PD-L1（SP263）检测的组织符合病理规范化诊断总则要求，染色判读流程、室内外质控等符合规范才能确保病理评估结果的准确性。基于规范的PD-L1（SP263）检测，进而对术后需辅助免疫治疗的eNSCLC患者进行肿瘤细胞PD-L1表达进行评估具有重要的临床意义。

参考文献

1.国际抗癌联盟/美国癌症联合会分期系统第 7 版. 

2.Adjuvant Atezolizumab Holds Its Own in NSCLC.Cancer Discov.Aug 10 2022:Of1. doi:10.1158/2159-8290.Cd-nb2022-0052

3.Felip E, Altorki N, Zhou C, et al. Adjuvant atezolizumab after adjuvant chemotherapy in resected stage IB-IIIA non-small-cell lung cancer (IMpower010): a randomised, multicentre, open-label, phase 3 trial. Lancet. Oct 9 2021;398(10308):1344-1357. doi:10.1016/s0140-6736(21)02098-5

4.Heather A. Wakelee ea. IMpower 010: Primary results of a phase III global study of atezolizumab versus best supportive care after adjuvant chemotherapy in resected stage IB-IIIA non-small cell lung cancer (NSCLC). . 2021;

5.Altorki N FE, Zhou C, et al. IMpower010: characterization of stage IB-IIIA NSCLC patients by type and extent of therapy prior to adjuvant atezolizumab. Presented at: International Association for the Study of Lung Cancer 2021 World Conference on Lung Cancer; September 8-14. 2021;

6.Felip E AN, Zhou C, et al. Atezolizumab vs best supportive care in Stage II-IIIA NSCLC with high PD-L1 expression: sub-analysis from the pivotal Phase III Impower010 study. ELCC. 

7. IMpower010: Overall survival interim analysis of a phase III study of atezolizumab vs best supportive care in resected NSCLC. IMpower010 OS IA. 

8.VENTANA PD-L1 (SP263) Assay, Summary of safety and effectiveness data (SSED). FDA. 

9.非小细胞肺癌PD-L1免疫组织化学检测规范中国专家共识. 中国肺癌杂志. 2020;23(09):733-740. 

Document Number：MC-CN-02465

有效期至：2024年9月29日

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