三个主题
一、如何让更多的人选择FISH
二、如何让FISH价值最大化
三、FISH面对的挑战
质控：
检测前：
固定很重要；切片厚度3-4um，淋巴瘤2-3um，合格制片大于等于50个肿瘤细胞/片；
检测中：
试剂、仪器、环境（温度低于15摄氏度，对结果影响很大）
结果判读：
明确判读标准/阈值
病例1： HER2：选定一个区域后，按顺序判读，排除不能判读的细胞；
病例2和3：肺腺癌，ALK/ROS1：精准识别肿瘤细胞；红绿信号分开间距不大的情况，结合其他结果，例如IHC等平台结果
病例4：梭形细胞肿瘤ALK：15-20%阳性；炎性肌纤维母细胞性肿瘤的阳性模式
病例5：动脉瘤性骨囊肿：多核巨细胞不是肿瘤细胞
病例6：直肠腺癌-绒毛状管状腺瘤：HER2在不同区域阳性不同
病例7：肺癌ALK：同一张切片ALK阳性不同，小细胞癌区域与腺癌区域阳性模式不同。
病例8：小圆细胞恶性肿瘤EWSR1：FISH阴性，NGS阳性，EWSR1-FEV，CUT-OFF值难定，结合形态判读。
病例9：毛细胞星形细胞瘤，BRAF 分离探针：效果不好，KIAA1549和BRAF只有1.94Mb间距，假阴性。
病例10：梭形细胞肿瘤：SS18-SSX1融合导致FISH假阴性。难以解释的假阴性。
病例11：恶性肿瘤：TFE3易位，YAP1-TFE3融合。
FISH挑战：1、间距小，假阴性；2、CUT-OFF值不确定；3、难以解释的假阴性；4、无法明确partner 基因；5、NGS
问答环节：
1、炎性肌炎母？
答：同一个基因在不同肿瘤中的阳性模式可能不同。有特殊就在报告里备注。
2、胶质瘤间变少突往往伴有拷贝数增多，例如2红5绿，报告备注1P和19q缺失，但拷贝数有增多，这个有临床意义，预后可能更差。
3、炎性肌母肉瘤的伙伴基因会不会导致IHC表达不同？
答：有，ALK核旁阳性或点状阳性，这个伙伴基因就是一个特殊的基因。
4、RNA seq包括哪些基因？
答：在检测融合基因有优势。
5、肠癌HER2没有明确指南，应该参考什么？
答：参考乳腺或胃癌的指南需要备注
6、DAPI下如何辨认肿瘤细胞？
答：每次看FISH前都要看HE，与申请FISH的诊断一起看下HE
7、淋巴瘤三打击阈值？
答：接近CUT-OFF值时参考经典判读。
8、ALK单红能算阳吗？
答：看试剂判读标准；看背景，背景是双色就
9、多核巨细胞
答：多核巨细胞不能报多倍体
10、肠癌50%肿瘤细胞>2
答：异质性要详细、客观的描述，
11、不能确定的需要其他平台验证吗？
答：要，这种病例少，积累经验，更利于准确发表告。
12、乳腺10%簇阳？
答：报告中要报区域阳性比例，结合指南，需要备注的就备注是否有异质性。
13、各个探针阈值？
答：不同基因在不同肿瘤里阈值可能不同，例如ALK在肺癌和软组织肿瘤中的就不一样，建议设一个灰色区间，例如10-30%，30%以上阳，10%一下阴，之间就具体情况具体判读。
14、穿刺组织中异常信号的肿瘤比例不足10%，怎么发报告？
答：一般不发阳性，可建议手术样本再送检。
15、融合探针记单融合还是双融合？
答：看试剂说明书，是什么肿瘤，什么阳性模式，CUT-OFF值是多少。例如单融合算阳，但阈值就高。
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