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蛭弧菌及其在水产养殖动物疾病防治中的应用(2)

全国水产技术推广总站 王玉堂

二、蛭弧菌的科研现状

(一)国外的研究

自1962年Stolp和Petzlod首次研究蛭弧菌以来,国外学者对蛭弧菌的生态学和生物学特性等已开展了大量研究。Shilo等人于1965年就对蛭菌的形态学展开了研究;其后的Starr等人在蛭弧菌分子生物科特性方面进行了研究;最近的Lambert、Martin、Nunez、Rendulic等人在蛭弧菌的裂解机制及其生活周期的动力学方面取得重大研究进展。


国外学者的主要研究方向有:蛭弧菌基因及相关蛋白在生活周期中特性与功能,如淀粉酶基因、cya和类crp基因、MCP基因、丝氨酸蛋白酶和转运蛋白、外膜蛋白(OMPS);蛭弧菌种间变异的研究,如外膜蛋白(OMPS)、脂多糖(LPS)、16sDNA序列、细胞大小、形状、噬菌斑大小、生长能力、染色情况、对宿主的敏感性等;借助原子力显微镜对蛭弧菌109J裂解宿主世界语的动力学研究;环境因素对蛭弧菌存活周期的影响,如重金属镉、苯酚、尿素等;从分子水平对蛭弧菌进行鉴定的研究PCR引物的设计等。


(二)国内的研究

我国对蛭弧菌的研究起步较晚,但研究进展较快。


1979年,我国首次开展了蛭弧菌的研究;研究中发现蛭弧菌对许多动物包括人体和植物的致病菌,如霍乱弧菌、伤寒沙门氏菌、副溶血弧菌、福氏志贺菌及大肠杆菌、嗜水气单胞菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、荧光假单胞菌等均有显著的裂解作用。中国水产科学研究院黄海水产研究所、中国海洋大学、上海海洋大学、江苏省海洋渔业研究所等单位的研究也证明,蛭弧菌对水产养殖动物中常见的副溶血弧菌、溶藻弧菌等革兰氏阴性菌的裂解率可达97.33%。


1981年,我国卫生部将“细菌寄生菌—蛭弧菌的研究”(用生物学方法杀灭EITor霍乱弧菌)列为重点研究课题,并于1985年取得重大突破,研究成果获卫生部科技进步奖。


1982年,司稚东等人开展了蛭弧菌的系统性研究,在生物学特性、培养保藏方法、生态学及污水净化等方面取得很多成果;此后大批科研工作者开展了相关研究:如吴承龙等人研究了蛭弧菌某些生物学特性—形态、对不同宿主菌的裂解活性等;秦生巨、黄文等人研究了蛭弧菌保藏方法—冷冻干燥法、4℃营养肉汤液保藏法、-20℃甘油保藏法;赵孝先等人研究了蛭弧菌在细胞匀浆中增殖—大肠杆菌、大豆根瘤菌(灭活)、枯草芽孢杆菌(灭活)、酵母菌(灭活)匀浆液培养蛭弧菌;邵桂元等人研究了蛭弧菌最适培养条件—温度、PH值等;杨淑专、李戈强、马志宏、杨莉等人分别研究了蛭弧菌对虾类致病菌—肠型点状气单胞菌、荧光假单胞菌、鳗弧菌等的裂解作用,用注射注解和浸泡感染方式研究蛭弧菌对欧洲鳗细菌性疾病的防治及其水质指标—PH值、总硬度、浊度、生物耗氧量等。这些研究为蛭弧菌在水产养殖病害防治中的应用奠定了重要理论基础。


蛭弧菌微生物生态制剂最早是1990年应用于水产养殖方面,由秦生巨等与江苏省微生物研究所合作,将它用于养殖珍珠的三角帆蚌的嗜水气单胞菌病防治上;1991年,又与中国水产科学研究院淡水渔业研究中心合作,将它用于淡不鱼细菌性疾病的防治和养殖水体的改良上;1993年,与上海海洋大学合作,将它用于甲鱼和河鱼屯鱼细菌性防治和水体改良上;1996年,在上海奉贤等地小范围地用于南美白对虾养殖细菌病防治和水体改良上,均取得较稳定、较好效果。


1991年,南京麦克生物工程有限公司试制成功蛭弧菌微生物生态制剂,并按国务院《兽药管理条例》的规定进行了小试、中试及临床试验等一系列试验。1994年,农业部批准由南京麦克生物工程有限公司(江苏巨豹实业有限公司的前身)申报的“蛭弧菌微生物生态制剂”为国家二类新兽药,同时发布了《蛭弧菌微生物生态制剂质量标准》。与此同时,农业部批准蛭弧菌为我国兽用微生物生态制剂生产用菌株。在国际上,我国是继美国之后第二个批准蛭弧菌为兽用微生物生态制剂生产用菌株的国家。其后又开展了规模化生产技术研究、应用研究等。


1997~1998年,随着南美白对虾的大量养殖,蛭弧菌微生物生态制剂开始大范围应用于水产养殖业。当时有几家专门仿制蛭弧菌微生物刘的公司成立。


迄今为止,我国对蛭弧菌的研究所取得的主要成果可概括为以下几点:一是我国建立了蛭弧菌的研究方法;二是发现了蛭弧菌在加热或氯仿致死的宿主中可迅速、更多地出现噬菌斑的宿主菌中增殖的蛭弧菌仍能感染活的宿主菌,具有重要理论和实践价值;三是研究证实蛭弧菌对动物包括人体和植物的致病菌有裂解作用;四是制定了我国动物用蛭弧菌微生物制剂的制造和检验规程,建立了动物用蛭弧菌微生物生态制剂国家质量标准等。


但到目前为止,尚有一些问题有待进一步研究。一是蛭弧菌的噬菌机制尚未阐明。二是蛭弧菌生态学研究不够深入。三是蛭弧菌长效稳定的保藏方法不够全面。四是缺乏水体污染物对蛭弧菌影响的研究。五是缺乏蛭弧菌合理使用或测水施用的研究。六是有待研究高效专一的蛭弧菌及其制剂。七是有待加强蛭弧菌制剂的新剂型等。


三、蛭弧菌在水产养殖业的应用前景

目前,蛭弧菌已在我国商品化生产,并在水产养殖业中广泛应用。其主要生产单位和产品有:宝来利来(泰安)兽药饲料公司的淡水水产动物专用噬菌26(噬菌蛭弧菌溶液),广东省新的生物工程研究所有限公司的复合噬菌蛭弧菌,南京(香港)威力克生物有限公司的鱼虾宝、蟹宝、鳝宝、蛙宝、鳗鱼宝、虾宝,南京福润德动物药业有限公司的三联噬菌皇(水产动物专用),SPSinc.燕金科技发展有限公司的百得菌、噬菌蛭弧菌多株冻干粉型活菌制剂,江苏省海洋水产研究所的克菌1号——噬菌蛭弧菌生态制剂,南京行安科贸有限公司的解毒养水宝,北海兰大生物科技公司的鱼虾神等。


蛭弧菌在水产养殖业中应用前景十分广阔。主要用途有:一是蛭弧菌是我国水产养殖动物病害生物防治的一种新工具,利用蛭弧菌控制和减少池塘中细菌性疾病发生。二是蛭弧菌是水产养殖水体的生物改良剂,利用蛭弧菌对水体中细菌的裂解作用,去除有害于水产养殖动物的致病菌,降低氨氮含量,改善养殖水体环境,减少鱼病的发生;与光合细菌合用,还有控制养殖水体的COD、硫化物等作用。三是蛭弧菌是细菌性疾病防治的“活性抗生素”,因为蛭弧菌能裂解一些异养细菌,使养殖水体中的水产养殖动物致病菌浓度大大降低,进而降低了细菌性疾病的发生率。


蛭弧菌微生物制剂作为防治养殖动物疾病起效较慢,所以,一般将其作为预防用途效果较好。其效应最佳期:一是在虾、蟹幼体开食时期使用,既可以使蛭弧菌在肠壁附着而起到屏障作用,又可以发送动物消化道环境,促进摄食与重生长,增强抗病能力;二是在虾、蟹的快速生长有使用,既能清除环境中的有害细菌,又能消灭动物体内的有害细菌,使虾、蟹健康生长,降低发病率;三是在虾、蟹饵料转换期使用,可以虾、蟹安全渡过转换期,避免致病菌的侵袭;四是在虾、蟹发病,经抗生素治疗后使用,可以帮助虾、蟹尽快恢复体质,起到明显的保健作用;五是当虾、蟹处在应激状态时使用,可以起到镇静作用,减少虾、蟹因应激死亡量,特别是能减少台风暴雨对虾、蟹的应激影响。

实践证明,科学使用蛭弧菌微生物制剂,可以起到较好的水产养殖动物疾病防治效果。早期使用能够保持池塘水体例处于良好状态,维持水养殖水体生态相对平衡,提高菌种培育成活率和鱼、虾的生长速度。一旦发病后再施用,效果就会差一些。如果生产早期连续使用3~4次,池水就会相对稳定,基本上没有细菌病的发生。



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