文献摘要（十九）| 人乳蛋白在人乳腺内的预先消化

J Mammary Gland Biol Neoplasia. 2017 December ; 22(4): 251–261. doi:10.1007 /s10911-018-9388-0.

背景与目的：

以往的研究表明，人乳中的蛋白酶会释放数百种人乳蛋白来源的肽。然而，人乳蛋白消化是否始于乳腺内的问题仍然没有完全得到解答。本研究的主要目的是确定人乳蛋白降解为多肽是否始于乳腺内。次要目的是确定哪些人乳蛋白酶参与蛋白水解，并预测哪些释放的肽具有生物活性。

方法：

哺乳期母亲（n = 4）将其乳汁直接挤到置于冰块上的抗蛋白酶混合物中，并立即冷冻，以抑制其中的蛋白酶活性。通过质谱分析和数据库检索对样品进行肽谱分析。基于多肽组学的蛋白酶预测和生物活性预测分别采用了几种不同的方法。

结果：

人乳中含有1100多种独特的肽，这些肽是由人乳蛋白在乳腺内水解而来的。肽来自42种人乳蛋白，包括306种具有潜在生物活性的肽。

结论：

直接母乳喂养的婴儿能获得部分预消化的蛋白质以及许多生物活性肽。根据多肽组学数据预测，纤溶酶是乳腺内水解人乳蛋白最活跃的乳蛋白酶。乳蛋白酶在乳腺内活跃地裂解乳蛋白，启动功能肽段的释放。

讨论：

在以往的研究中，对乳蛋白能否在乳腺中被水解成多肽这一问题的评估，是基于母乳的单一样本，并受到了乳汁收集后热处理引起的泌乳后蛋白质水解影响。本研究更加谨慎地分析，通过立即应用抗蛋白酶、放置于冰上以及冷冻，来防止泌乳后蛋白质水解，分析了来自于4位母亲各2份的乳汁标本，以此来解答该问题。识别出的肽类与既往研究结果总体相一致，有力地支持了蛋白水解确实发生在乳腺内这一假设。

本研究确认了来自于母乳中42种人乳蛋白的多肽。其中，最丰富的肽来自于β-酪蛋白、αs1-酪蛋白、骨桥蛋白、聚免疫球蛋白受体、嗜乳脂蛋白（如图1所示），与以往人类母乳标本中多肽组学研究相一致。四位母亲乳汁中共有的肽类超过总数的95%，仅找到1-3%的肽类有差异，表明母亲间的蛋白水解活动高度相似。

有研究表明，除了蛋白酶，母乳中还含有多类蛋白酶抑制因子，包括（根据含量从高到低）α-1-抗胰蛋白酶、抗凝血酶III、α-1-抗胰凝乳蛋白酶、α-2-抗纤维蛋白溶酶和血浆丝氨酸蛋白酶抑制剂。但在本研究中，没有检测到源于这些抑制因子的多肽，这个结果表明了这些蛋白酶抑制因子可能不是在乳腺中由蛋白酶分解而来，或者是释放的这些多肽浓度太低以至于检测不到。事实上，虽然乳腺中存在一定数量的蛋白酶抑制因子，但仍有蛋白质水解活性，这表明了蛋白酶抑制因子的活性不及水解活性高。

本研究中，只有两种肽精确匹配已知的生物活性肽序列；然而，有35个序列与已知的生物活性肽存在超过80%的同源性。研究报道，母乳中的大多数生物活性肽都来源于β-酪蛋白或乳铁蛋白。然而，在本实验中，我们并没有发现乳腺中存在将乳铁蛋白水解的固有蛋白酶的显著活性，只在一位母亲中发现了来自于乳铁蛋白的一种肽，但这种肽与已知的抗菌肽非常匹配。到目前为止，还没有发现来自骨桥蛋白的生物活性肽，尽管它是乳汁中肽的最大来源之一。

总体来说，这些结果首次清晰地证明了母乳中的蛋白质水解消化始于乳腺里。但是，我们还不清楚这种早期蛋白水解对于婴儿总体的蛋白质消化有多重要的贡献。未来的研究应进一步探讨哺乳时间、孕周、母亲年龄和怀孕次数是否影响乳腺内蛋白质的消化。

图1. 人乳中被鉴定的来源于乳蛋白的多肽数量(A)和丰度(B)。结果以均数±标准差表示，n = 8。CASB，β-酪蛋白；OSTP，骨桥蛋白；CASA1，αs1-酪蛋白；BT1A1, 嗜乳脂蛋白亚家族1成员A1；PIGR，聚合免疫球蛋白受体；CEL, 胆盐激活脂肪酶；PLIN2，脂滴包被蛋白-2；MUC1，粘蛋白-1；FIBA,纤维蛋白原α-链；CASK,κ-酪蛋白；TRFL，乳铁蛋白

仅供学习参考