前言 /
生老病死是自然规律，不过医学的进步正在不断帮助我们理解背后的机制，不断探索对抗衰老的方法。
衰老是一个涉及氧化应激、炎症、自噬、线粒体损伤、端粒酶损伤等的多因素过程。随着年龄的增长，衰老细胞的持续积累会产生不良后果。
这些非增殖细胞占据关键的细胞生态位，并分泌促炎细胞因子，从而导致衰老相关的疾病和虚弱状态。因此，有理论认为人类衰老是衰老细胞积累的结果。
免疫系统在衰老中起着关键作用，自然杀伤（NK）细胞是主要的固有淋巴细胞亚群，在各种生物学反应过程中扮演着重要角色，包括监测和消除衰老细胞。NK细胞真的可以用来进行抗衰治疗吗？
来自美国The BioBox公司和Restem公司的科学家在《Biochemistry and Biophysics Reports》发表了题为“Autologous NK cells propagated and activated ex vivo decrease senescence markers in human PBMCs”的文章，使用5例受试者的自体增殖和活化的NK（aNK）细胞来证明其对抗衰老的作用。
研究论文
他们基于标记物p16和β-半乳糖苷酶，发现aNK细胞可以减少体外衰老细胞，减少人类免疫的衰老。此外，炎性细胞因子panel数据表明，消除免疫衰老，可以减少衰老相关的炎症反应的作用。
具体而言，他们使用来自单个供体的细胞，通过流式细胞术研究了NK细胞的表型特征。PBMC（外周血单个核细胞）有平均值为11.2%的CD3（-）CD56（+）NK细胞（范围5.9–13.6）。培养15天后（范围14–19），指数期高峰收获的aNK细胞平均值为91.0% CD3（-）CD56（+）（范围83.4–96.0）。
PBMC和aNK细胞的CD3与CD56流式细胞术
（来源：Chelyapov, N., et al. 2022）
这种扩增和刺激NK细胞的方法是有效的吗？为了确认清楚这点，他们用乳酸脱氢酶（LDH）释放试验在体外测试了PBMC和aNK细胞对K562细胞（一种恶性白血病细胞系）的细胞毒性。
结果发现，在体外，aNK细胞对K526细胞具有较高的细胞毒活性，且呈剂量依赖性。
随后，他们使用衰老皮肤成纤维细胞，通过中性红摄取和释放试验评估了NK细胞的细胞毒性作用。
不出所料，在K562细胞中观察到aNK细胞对衰老皮肤成纤维细胞的细胞毒性水平高于天然NK细胞。
PBMC和aNK细胞对K562细胞的细胞毒性作用
（来源：Chelyapov, N., et al. 2022）
为了证明aNK细胞的抗衰作用，他们向Cohort 1（3位受试者）输注了1次aNK细胞，向Cohort 2（2位受试者）输注了2次aNK细胞，并在多个时间点分析了血液中的衰老标志物（p16和β-半乳糖苷酶）。
在Cohort 1中他们发现，受试者年龄越大，在输注aNK细胞之前p16和β-半乳糖苷酶的水平越高，在输注aNK细胞后，p16和β-半乳糖苷酶均有较大减少。数据表明，aNK细胞可能会减少PBMC中的衰老标志物表达。
在Cohort 2中，结果数据证明了再次输注aNK细胞或可更持久地减少免疫衰老。
aNK细胞单次输注和两次输注对衰老标志物p16的影响
（来源：Chelyapov, N., et al. 2022）
这项研究从衰老标志物的角度，验证了一次及两次输注aNK细胞的安全性，以及它减少免疫衰老的效果和持久性。这开拓了一种新的治疗方法，可以减少炎症和免疫衰老等有害特征。
除了内在的对免疫系统的作用，NK细胞是否可以改善外在的衰老，例如皮肤皱纹呢？
来自韩国Immunis Bio公司和国际圣玛丽医院的科学家在《Journal of Cosmetics, Dermatological Sciences and Applications》发表了题为“Potential of Natural Killer Cell Enriched Conditioned Media for Skin Care and Anti-Aging”的文章，研究了富含NK的淋巴细胞（NKEL）条件培养基（CM）的皮肤护理作用。
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首先，他们将健康献血者的PBMC与经处理的NK溶液在KBM502中培养14天，并对培养细胞表型进行分析。通过细胞因子阵列证实MIP-1α/β、CCL5（RANTES）、GM-CSF、IFN-γ、IL-5、IL-8、IL-13和MIF显著增加。
NKEL CM的细胞因子阵列（来源：Kim, DS, et al. 2021）
随后，他们进行了MTT分析（一种检测细胞存活和生长的方法），探究了NKEL CM对HaCaT细胞（永生化角质形成细胞）活力的影响。结果表明，NKEL CM在角质形成细胞中没有显著的细胞毒性。
NKEL CM对HaCaT角质形成细胞增殖的影响
（来源：Kim, DS, et al. 2021）
下一步就是研究NKEL CM对细胞运动和迁移的影响了，因为细胞迁移是伤口愈合的一个重要过程。其中，上皮细胞-间充质细胞转换（EMT）主要发生在角质形成细胞中。
E-钙粘蛋白是一种作为EMT标志物的细胞粘附连接蛋白，他们发现用NKEL CM处理的角质形成细胞的E-钙粘蛋白浓度依赖性降低，这意味着NKEL CM通过影响E-钙粘素的表达来实现细胞的运动和迁移。
NKEL CM对HaCaT角质形成细胞E-钙粘蛋白表达下调的影响
（来源：Kim, DS, et al. 2021）
除了标志物变化的证据外，不妨再看看NKEL CM对细胞迁移的实际作用。他们使用划痕细胞迁移实验，来检测NKEL CM对HaCaT角质形成细胞的迁移作用。根据结果，他们发现随着NKEL CM浓度的升高，细胞迁移增加。
NKEL CM对HaCaT角质形成细胞迁移的影响
（来源：Kim, DS, et al. 2021）
接下来，他们深入研究了KLK受到的影响。KLK是一种激肽释放酶，与死皮细胞的脱落密切相关。结果表明，NKEL CM处理组中KLK表达的增加促进了细胞迁移，并导致细胞粘附的细胞连接蛋白如E-钙粘蛋白的减少。
NKEL CM对HaCaT角质形成细胞KLK5和KLK7表达的影响
（来源：Kim, DS, et al. 2021）
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