发酵配料配方
发酵配料方法:构树叶打浆或切碎取300公斤、加入玉米粉或其他能量饲料粉80公斤左右,加入一包粗饲料降解剂,粗饲料降解剂事先与玉米粉混合后加入。混合均匀,含水量检测,可以手用力捏一把,有水从手指间印出来为度,用力压实压紧密封好进行发酵,发酵时间,3-8天(冬长夏短)。
为改善构树叶中含有大量单宁造成的涩味,可以在发酵前加入糖精进行调节,如每100公斤发酵料中加入6-10克糖精,成本仅为0.5元以内。糖精事先加入到少量水(如几公斤水中)溶解后再加入大料中混合均匀。
经上配方中玉米粉的作用是:
① 一是吸收新鲜构树叶中多余的水份,新鲜的构树叶中含水量在75%,如果直接发酵,会不可避免地发生腐烂变质现象,也可以产生大量亚硝酸盐,所以,必须加入其他干物质原料进行吸收多余的水分,加入80公斤玉米粉后,可以吸附掉新鲜构树叶中多余的水份,使发酵料的含水量控制在50-60%左右。
② 第二个作用是补充发酵能量,以使发酵快速启动,发酵充分,增加发菌点,发酵后这些能量总体上并没有损失,反而有所增加.
2、 其他注意事项
以上发酵配料中的玉米粉也可以使用麦麸米糠、薯干粉、麦粉、高粱粉、次粉、稻谷粉或米粉等来代替,使用更为廉价的原料,更为有利和降低成本。同时,为了提高由于树叶中单宁过高造成的适口性问题,可以考虑在发酵前添加糖精进行调节,每100公斤发酵料添加糖精6克-10克。
发酵后可以长期保存,只要不动它,可以长期保存,一旦开封,则建议尽快用完,如在一周左右用完等,每次取用后,要立即及时密封好,尽量排尽里面的空气再次密封好保存。
3、 发酵后的喂养方法
这样发酵后的构树叶饲料大约蛋白含量为18%左右,能量大约为2.7兆卡/千克,另外,整体上还缺少预混料(即缺少微量元素、钙磷等),
从以上的营养成分分析可知,构树叶的营养中,主要还是缺少能量,以及微量元素,而钙磷方面,则钙含量充足,而磷略有不足,所以,补充营养要以搭配补充能量、微量元素为主;
可以这样喂猪等:发酵构树叶浆湿料80%、麦麸或米糠8%、玉米粉或麦粉或薯干粉或米粉等8%、预混料4%即可。也可以不用4%型的预混料,只用复合微量元素添加剂+ 磷酸氢钙1%(或骨粉2%)就可以,因为构树叶中的维生素含量非常丰富,不必另外添加维生素。
用这种方法养猪,具体效果如何,从营养上估计,从15公斤到90公斤应该在110天左右,注意供给充足饮水和原料。
《节粮高效养猪法》
摘 要 试验是从不同时期的发酵构树叶中分离乳酸菌,并筛选出4株生长良好的菌株,菌株编号分别为A1、A2、A3、A4。从菌落特征、形态特征及生理生化特性对其进行鉴定,判定结果分属于乳酸杆菌和球菌,为乳酸饲料添加剂的制备提供前提条件。
关键词 乳酸菌;发酵构树叶;分离鉴定
中图分类号 Q939.11+7
乳酸菌是健康畜禽肠道中的有益菌群,其主要作用是抑制病原微生物的生长,产生有利于宿主代谢的酶和维生素,改善宿主的免疫反应、提高抗体水平、增强巨噬细胞的活性等。由于乳酸菌对畜禽的多种有益作用而受到各国科学家的重视。其在饲料中的应用是近年来发展起来的一个新兴科学领域。在美国、加拿大、德国、英国等发达国家,都在广泛研究和使用各种细菌制剂。在我国,市售的接种剂多为均一发酵型乳酸菌,细菌接种剂采用人工加入乳酸菌菌种的方法,有利于乳酸菌尽快达到足够的数量,加快发酵过程,迅速产生大量的乳酸。因此,筛选并培养最适合需要的乳酸菌菌株作为菌类添加剂是十分必要的。陶兴无等已通过试验证实,青贮构树叶经过合理发酵后,其品质和饲喂效果有明显改善。
本试验从品质优良的发酵构树叶中分离提纯乳酸菌,并进行了鉴定。为构树叶青贮饲料菌类添加剂的制备提供前提条件。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 发酵构树叶样品
将新采集的构树叶剔除烂叶和败叶,用清水洗净后控水、晾干,再切成约2 cm 的细条,装入泡菜坛中,分层压实后盖上外盖,盐封,在室温条件下青贮发酵。
1.1.2 培养基
① MRS培养基(g/l):蛋白胨10.00 g、肉膏10.00 g、酵母提取物5.00 g、K2HPO4 2.00 g、柠檬酸二铵2.00 g、乙酸钠5.00 g、葡萄糖20.00 g、吐温-80 1 ml、MgSO4·7H2O 0.58 g、MnSO4·4H2O 0.25 g,pH值6.2~6.4。
② 硝酸盐还原培养基(g/l):蛋白胨10.00 g、NaCl 5.00 g、KNO3(分析纯)1.50 g,pH值7.4。
③ 蛋白胨水培养基:1%胰蛋白胨水溶液,pH值7.2~7.6。
④ 明胶基础培养基(g/l):蛋白胨1.00 g、酵母提取物1.00 g、葡萄糖0.10 g、盐溶液4.0 ml(无水CaCl2 0.20 g、MgSO4·7H2O 0.48 g、K2HPO4 1.00 g、KH2PO4 1.00 g、NaHCO3 10.00 g、NaCl 2.00 g、蒸馏水1 000 ml)、蒸馏水100 ml,pH值7.0。
⑤ H2S产生实验培养基(g/l):胰胨Tryptone(Oxoid)10.00 g、肉浸膏3.00、酵母提取物(Oxoid)5.00 g、NaCl 5.00 g、半胱氨酸0.40 g、葡萄糖2.00 g,pH值7.2~7.4。
⑥ PY基础培养基(g/l):蛋白胨0.50 g、胰酶解酪朊0.50 g、酵母提取物1.00 g、盐溶液4.00 ml(成分和明胶基础培养基中盐溶液一样)、蒸馏水100 ml。
⑦ PYG培养基:在PY基础培养液内加入1.00葡萄糖即成为PYG培养基。
1.1.3 仪器设备
双目生物显微镜,Leica(德国生产);pHS-3C精密酸度计(杭州东星仪器设备厂生产);电热恒温培养箱(上海福玛实验设备有限公司生产);手体式压力蒸汽灭菌器(上海医用核子仪器厂生产);超净工作台(苏州净化设备有限公司生产);扫描电子显微镜(SEM,Hitachi S-3000N)。
1.2 方法
1.2.1 乳酸菌的分离与纯化
在无菌条件下称取发酵构树叶5 g,置于装有10 ml灭菌生理盐水的大试管中浸泡2 h,然后用生理盐水适当稀释,选3个稀释度,每个稀释度取100 μl涂布MRS平板,在32 ℃下培养24~48 h。挑取可产生溶钙圈并能使培养基中溴甲酚紫变红或变黄的典型菌落进行划线分离纯化,获得纯种单菌落。
1.2.2 分离菌种的SEM观察
将分离的纯菌种接种在MRS液体培养基中,30 ℃培养48 h。摇匀培养物,无菌条件下吸取100 μl培养液均匀涂布在盖玻片上,自然风干。离子溅射仪(Eiko IB-5)镀金膜后,SEM 观察拍照,加速电压15 kV。
1.2.3 石蕊牛奶试验
称取10 g脱脂奶粉溶于100 ml水中,向其中加入4 ml浓度为25 g/l的石蕊试液。分装试管,牛奶高度为4~5 cm。113 ℃高压蒸汽灭菌15~20 min。冷却至适温后,接入PY基础培养基上的乳酸菌株,在32 ℃培养3 d后观察试验结果。
1.2.4 其它生理生化鉴定
将分离得到的纯菌落进行以下生理生化鉴定:
① 接触酶反应:按乳酸菌分类鉴定及试验方法(凌代文,1999)进行,使用PYG琼脂培养基。
② H2S产生试验:按乳酸菌分类鉴定及试验方法(凌代文,1999)进行,使用H2S产生试验培养基。
③ 明胶液化试验:按乳酸菌分类鉴定及试验方法(凌代文,1999)进行,使用明胶基础培养基。
④ 吲哚试验:按微生物学试验(赵斌,2002)介绍的方法进行,使用蛋白胨水培养基。
⑤ pH值4.5生长试验:将菌株接种到pH值为4.5的MRS液体培养基中,测定OD600 nm值后置32 ℃下培养,每6 h取样测定其OD600 nm值,比较培养前后的菌数,判断其生长情况。
1.2.5 碳水化合物发酵产酸试验
按陶兴无(2006)介绍的方法进行,使用PY基础培养基。
2 结果与分析
2.1 乳酸菌的分离纯化结果
从发酵构树叶中不断地分离、纯化,获得菌落光滑,溶钙圈明显,能使溴甲酚紫变红(变黄)的典型菌落4种。分别编号为A1、A2、A3、A4。保存,并做进一步鉴定。2.2 分离菌种的SEM观察结果
上述4种菌革兰氏染色均为阳性,SEM观察见图1。
2.3 石蕊牛奶试验的结果(见表1)
牛奶中主要含有乳糖和酪蛋白,加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。乳酸细菌发酵乳糖产酸,石蕊变红,当酸度很高时,可使牛奶凝固。本试验未见胨化结果,这与杨洁彬(1996)、凌代文(1999)报道的结果相符。
2.4 接触酶反应和H2S产生等试验结果
接触酶能将过氧化氢分解成水和氧,这项测定对于乳酸菌的鉴定是一个重要特性,绝大多数乳酸细菌的接触酶反应是阴性的,H2S产生试验、明胶液化试验、吲哚试验及pH值4.5生长试验是乳酸菌属鉴定的重要试验。4株菌株的接触酶反应、H2S产生等试验结果见表2。
2.5 碳水化合物的发酵产酸试验
进一步试验鉴定4株菌株对不同碳水化合物的利用情况,结果见表3。
根据以上鉴定结果,对照《伯杰氏鉴定细菌学手册》可以判断:A1、A2为植物乳杆菌(L.plantarum),A3为棒状乳杆菌棒状亚种(L.coryniformis subsp.coryniformis),A4为乳酸乳球菌乳酸亚种(L.lactis subsp.lactis)。
3 小结
本试验从发酵构树叶中分离出了4株生长良好的菌株,经镜检、革兰氏染色、生理生化特性检测,鉴定4株菌株分别为乳杆菌和乳球菌。产酸性能良好,可用来制作构树叶饲料细菌添加剂,为制备品质优良的环保型绿色饲料提供参考。
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