卡斯蒂利亚女王伊萨贝拉一世和阿拉贡国王费尔南多二世，共有四个女儿和一个儿子，其中公主玛丽娅，还有一个孪生妹妹，据说出生以后，就夭折了。在最开始的时候，他们根据卡斯蒂利亚王室的继承制度，授予王子胡安为“阿斯图里亚斯亲王”的封号，也就是王位继承人。王子胡安1478年7月30日，出生于塞维利亚。在他很小的时候，应该受到很不错的文化教育，因为国王费尔南多二世，指定了一些有影响的人物，担任王子的老师。作为继承人和其他的王子、公主所受到的教育，其中的差别不是特别大，这一点在他的妹妹胡安娜公主和卡特琳娜公主身上更为明显。胡安王子深得双王的喜爱，并被视为他们的希望。据说，胡安王子非常富有美德，同时很有学问，也是位很有耐心的基督教徒，在他很早的时候，就做出了很多善行。当时的人对这位王子的评价是充满着赞许和肯定。
阿拉贡国王费尔南多二世的画像，作于1520年
胡安王子19岁以后，与奥地利的玛格丽特公主结婚，时间是在1497年4月，地点在布尔戈斯大教堂内。王子胡安和玛格丽特的婚礼可以说是很隆重的。尽管他们的婚姻很不错，不久有了一个女儿，不过很快就夭折了。但是王子胡安的身体很不好，在结婚不到一年，就去世了，还不到二十岁。胡安王子去世以后，就选择他的姐姐伊莎贝拉公主来作王位继承人，那时候她已经与葡萄牙国王曼努埃尔一世结婚了。伊萨贝拉公主，出生于1470年10月2日，是双王最大的孩子，她是在伯父恩里克四世在位的时期出生的，那时候她的母亲伊莎贝拉公主已经秘密嫁给了阿拉贡王子费尔南多。由于伊莎贝拉女王常年忙于战争，只好把小伊莎贝拉（年龄七岁）安置在塞戈维亚，那里也是非常混乱的。当时双王把小女儿交给总督夫妇来照顾，后来，当地的人们对总督的统治甚为不满，发动了战争，控制了这个城市。这个小伊莎贝拉只好躲进了一座塔楼里面，据说有了一段时间，这才不被人发现。直到双王赶来，城市的局势才被稳定下来了。
伊萨贝拉公主的画像
小伊莎贝拉已经慢慢长大了，她与葡萄牙国王阿方索五世的孙子阿方索订婚。这位阿方索王子比她小五岁，后来他们就结婚了。根据签订条约的内容，伊莎贝拉公主应该居住在葡萄牙，并且嫁妆费用由双王来共同担负。据说，伊莎贝拉公主，还和王子，生活在葡萄牙王宫，这一过，就是三年。在1490年春季，伊莎贝拉公主与王子阿方索在塞尔维亚，举行了盛大的订婚礼。那一年11月，公主抵达巴达霍斯，她受到了王子叔父曼努埃尔的热情欢迎。此后曼努埃尔对伊莎贝拉公主留下了深刻的印象。然后，在11月22日那一天，伊莎贝拉公主与阿方索王子团聚。伊莎贝拉公主和王子阿方索，可以说是感情很深厚，婚姻还是很幸福的。不幸的是，1491年，阿方索王子却意外身亡，伊莎贝拉公主感到非常悲痛。不久以后，伊莎贝拉公主回到了自己的国家，但是她的内心并不平静，她曾说过，她不想再嫁了。双王听后，感到女儿的话很有趣味。
天主教女王伊莎贝拉一世的画像。
这个时候，刚继位的葡萄牙国王曼努埃尔一世，想与伊莎贝拉公主结婚，双王知道女儿的心愿，就把其他的公主介绍给曼努埃尔，如三公主玛丽娅。但是曼努埃尔却拒绝了，只愿意与伊莎贝拉公主结婚。不过，最后，伊莎贝拉公主还是答应了他的求婚，俩人在1497年9月结婚了。不久以后，伊莎贝拉公主成为王位继承人了。但是，要继承阿拉贡王位就没那样容易，因为根据制度，一般是由男性来继承王位，如果女性继承，除非她生下了一个男孩，这样才有可能性。1498年，伊莎贝拉公主，身怀有孕了，但是因为长途劳累，感到疲乏，在生下一个男孩以后，就去世了，时年27岁。
葡萄牙国王曼努埃尔一世的画像
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