多肽保存使用小常识

1.多肽保存

多肽一般长期保存需要避光并应在 -20℃ 以下，-80℃ 效果更好，短期可以保存在 4℃。可以短时间以室温运输。多肽在 -20℃ 或更低温度下很稳定，特别是冷冻干燥并保存在干燥器中。

在打开包装和称重前，请先将多肽在干燥器中平衡至室温，未经平衡到室温的多肽在打开盖子后易有水份凝结，会降低多肽产品的稳定性。

含有 Cys, Met or Trp 的多肽容易氧化，脱氧缓冲剂对其溶解必不可少，因为这种多肽容易空气氧化， 在封瓶前，氮气或氩气保护会降低氧化作用。含 Gln 或 Asn 的多肽比较容易降解，所有这些肽与不含这些有问题的简单肽相比，保存期要短。

对 N 端第一个氨基酸是 Gln 的多肽非常不稳定，几天内会发生降解，建议在设计序列时，不让 Gln 在 N 端出现。

2.多肽溶解

溶解多肽是非常复杂的事情，一般很难一下子确定合适的溶剂。通常是先取一点试验，在没有确定合适的溶剂前千万不要全部溶解。
下列方法有助于您选择合适的溶剂：

(1) 判定多肽的电荷特定，设定酸性氨基酸 Asp(D),Glu(E) 和 C 端 COOH 为 -1 ;碱性氨基酸 Lys(K) ,Arg(R) ,His(H) 及 N 端 NH₂ 为 +1 ,其它氨基酸的电荷为 0。计算出将电荷数。

(2) 如果净电荷数>0，多肽为碱性，用水溶解：如果不溶解或溶解性不大，加入醋酸 (10% 以上);如果多肽还不能溶解，加入少量 TFA(25ul) 溶解，然后加入 500 ul 水稀释。

(3) 如果净电荷数<0，多肽为酸性，用水溶解;如果不溶解或溶解性不大，加入氨水 (25 ul) 溶解，然后加入 500 ul 水稀释。

(4) 如果净电荷数=0，多肽为中性，含有大量不带电荷的极性氨基酸残基或疏水性氨基酸的疏水性多肽和中性多肽可先溶解于少量有机溶剂中，如 DMSO、DMF、醋酸、乙腈、甲醇、丙醇或异丙醇，然后加水（蒸馏水）稀释。含有甲硫氨酸或半胱氨酸的多肽不能用 DMSO 溶解，因为 DMSO 可能造成侧链氧化。还有人建议需要尿素来溶解。对于含有自由半胱氨酸的肽，需使用 DMF 而不是 DMSO。对于疏水性很大的多肽，可添加 6M 盐酸胍或 8M 尿素，然后进行必要的稀释。

为了防止或尽量减少多肽降解，请将多肽以冻干粉形式保存在 -20°C 或更低温度下。如果需要保存溶液肽，最好分成小样存放，以避免反复冻融。一份样品融冻后未用完，应扔掉。细菌降解有时会成为溶液肽的麻烦，所以请将肽溶于无菌水或肽溶液过滤除菌。

碱性氨基酸: Lys (K), Arg (R),His (H) ,Orn
酸性氨基酸: Asp (D), Glu(E)

3.一个肽段是否可溶能预测吗？

我们无法通过研究多肽的结构来预测其在水中的溶解度，不能保证最终产品在水中或者其他溶剂中的溶解性。
然而，赖氨酸的 ε-氨基和精氨酸的胍通常有助于预测溶解度，尤其是短肽。与此相反，含有天门冬氨酸和谷氨酸的酸性肽往往是不易溶于水的，但易溶于稀氨水或碱性缓冲液。
 
4. 多肽的纯度（HPLC）及多肽含量（Peptide Content）

多肽的纯度（HPLC）及多肽含量（Peptide Content）意义不同，订购多肽之前需要明确。
案例：1g 多肽  HPLC 98% 纯度， 80% 多肽含量，水含量 10%，TFA 含量 10%
称重：1g
多肽部分：800mg  【其中 784mg 是目的多肽（多肽部分的 98%），16mg 是其他肽杂质 （多肽部分的 2%）】
水部分：100mg
盐部分： TFA 100mg
一般订购多肽指标，指的是 HPLC 纯度。
 
具体解释：
多肽的纯度是指 HPLC 方法在 220nm 处检测到的目标多肽的含量 ( 220nm 是肽链的吸收波长)，紫外分光光度计检测不到水和残留的盐不。可发现其他的杂质包括：缺失序列（缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列），截断序列（加帽过程中产生的序列）脱保护不完全序列（产生于整个合成过程或最后的裂解过程）。
多肽纯化不涉及水和盐。HPLC 纯化会产生少量的 TFA （三氟乙酸），如：游离的氨基末端和其他侧链如 Arg、Lys、His 都可生成少量 TFA 杂质。通常交付的多肽多含有微量 TFA 和残留水。即使处于冻干状态，水也会因共价结合的能力不同而不同程度地存在着。

纯化前的多肽中包含的杂质包括多肽和非多肽物质, 纯化后的多肽中包含的杂质除了 TFA 盐，大多数为序列被修改的多肽。

(1). 缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列
(2). 为避免缺失序列的产生而进行的加帽操作，截断序列即产生于加帽过程中
(3). 产生于整个合成过程或最后的裂解过程
(4). 保护基重新附着在多肽的其他位置  

如果对盐有特殊要求，请在询价时，明确一下（脱盐，转成醋酸盐 等）。如果不注明，做成的多肽都是 TFA（三氟乙酸）盐形式。

注意，吉尔生化使用的 HPLC 测试体系如下：
Solvent  A: 0.1% Trifluoroacetic in 100% Acetonirile
Solvent  B: 0.1% Trifluoroacetic in 100% Water
Flow rate:1.0ml/min
Wavelength:220nm
色谱柱：C18 反相柱
如果您有特殊的分析条件（色谱条件），请在订购前告知，我们将和您商讨。如果您没有特殊要求，我们的测试条件就是上述常用的体系。

多肽含量（Peptide Content）是指与非肽物质（主要为抗衡离子和水）相比的多肽量。可通过氨基酸分析来确定肽净含量。如果您需要这项服务请在订单上明确。

5. 吉尔如何对合成的多肽进行质检？

产品将附完整的检测报告，包括: HPLC 图谱；质谱；合成报告 ( COA )。（如有特殊需要，可提供核磁，红外，紫外，元素分析，水分含量测定以及氨基酸分析服务）

6. 吉尔对合成的多肽提供分装服务吗？

根据要求，本公司每个样品可以在 10 管以内免费分装，如果需要分装更多管数，超过 10 管部分，每管加收 10 元。由于少量分装可以避免多次反复冻融，减少容器的开盖和闭合的次数，减少处理不当或细菌污染的机会，让您的多肽更加稳定。
 
7.定制多肽的活性能保证吗？

定制多肽的活性受多个因素的影响。吉尔能保证的是产品的序列正确 ( Mass 结果保证)，纯度达标 ( HPLC 结果保证)。 对于活性，由于没有专门的测试方法，所以不能保证。
有几个因素可能对确保活性有所帮助：

A 一般完工的定制多肽为 TFA 盐形式，如果客户需要研究多肽的电荷等情况，需要要求将多肽脱盐。
B 一般完工的定制多肽为 TFA 盐形式，有的客户会要求将其转为醋酸盐。
   
8. 如何将多肽溶解在 DMSO 中？

二甲基亚砜 ( DMSO ) 是一种含硫有机化合物，分子式为 ( CH₃ )₂SO，常温下为无色无臭的透明液体。DMSO 作为冷冻保护剂经常应用于细胞库。在细胞冷冻过程中，DMSO 可防止胞内/胞外晶体的形成，其工作浓度为 10%。DMSO 通常可与盐或血清白蛋白结合。

疏水性多肽可以很容易地溶解在 DMSO 中。但 DMSO 可增加细胞的通透性，若多肽溶解于 DMSO 中则会对细胞产生毒性作用。高浓度的 DMSO 绝不可应用于细胞培养中。浓度为 5% 的 DMSO 即可让细胞膜溶解。大多数细胞株可以容忍 0.5% DMSO，少许可以容忍 1% 的浓度，而不表现出严重的细胞毒性。然而原代细胞培养对其更敏感。所以如果是用原代细胞做剂量/反应曲线(可行性)，其浓度应低于 0.1%。

对于某些疏水性非常高的多肽，可先尝试将其溶解在少量的 DMSO ( 30-50ul,100% ) 中，然后慢慢 (一滴一滴地)将其添加到不断搅拌的水溶液如PBS或其他想要的缓冲液中，直至理想浓度。如果滴加过程中，肽溶液开始变浑浊，说明已经达到了溶解极限。另外，超声波有助于多肽溶解。

经验：

·  对几乎所有的细胞来说，浓度为 0.1% DMSO 是安全的。
·  广泛被用于细胞培养的 DMSO 终浓度为 0.5%，不会引起细胞毒性。
·  虽然对部份细胞来说，1% DMSO 也不会产生细胞毒性，但我们推荐 0.5%。
·  也有 5% DMSO 成功地应用于某些细胞的案例。
·  始终保持终浓度在 0.5%，但储存时可 200 倍高浓度溶于 100% 的 DMSO 中。