一种确定端粒长度的简便方法[创新技巧]

【字体： 大 中 小 】 www.ebiotrade.com 时间：2011年05月17日 来源：生物通

摘要：

　　DNA每复制一次，端粒就缩短一点。一旦端粒消耗殆尽，染色体则易于突变而导致某些疾病如癌症。因此，对于研究人员来说，准确而可重复地测量端粒长度很重要。为此，QIAGEN的研究人员开发出一种简便且自动化的qPCR方法，利用市售的标准化试剂来测量端粒长度。实验证实，这种方法对于外周血细胞是高度重复而准确的。

免费索取：

PerkinElmer第三代NGS样品制备工作站全新面世！免费获取技术资料

分享到：

　　

端粒是真核生物染色体线性DNA分子末端的结构。形态学上，染色体DNA末端膨大成粒状，像两顶帽子那样盖在染色体两端，因而得名。端粒的主要功能是保护染色体末端不被降解，避免染色体融合，从而维持染色体的稳定性。

DNA每复制一次，端粒就缩短一点。一旦端粒消耗殆尽，染色体则易于突变而导致某些疾病如癌症。因此，对于研究人员来说，准确而可重复地测量端粒长度很重要。

对于端粒长度的测定，目前主要有三种方法：Southern blot，这被认为是金标准方法，但是耗时耗力，且需要大量的DNA；flow-FISH，它综合了流式细胞仪和荧光原位杂交，但技术复杂，且需要完整的细胞才能分析；定量PCR，这种方法简便快速，且灵敏度高，但缺乏标准化。

为此，QIAGEN的研究人员开发出一种简便且自动化的qPCR方法，利用市售的标准化试剂来测量端粒长度。实验证实，这种方法对于外周血细胞是高度重复而准确的。

分析利用了Rotor-Gene SYBR Green Kit，在Rotor-Gene Q实时定量PCR仪上开展。他们用单个参考基因来标准化端粒分析的Ct值。每个样品的端粒长度是基于端粒与单拷贝基因的比值（T/S比值）。端粒长度表示为相对的T/S比值。

这种qPCR方法使用简单，且对于人类外周血细胞重复性高。qPCR分析的结果与金标准Southern blot方法所获得结果的相关性良好，不过，qPCR方法所需的DNA少，只需要1 ng基因组DNA，且分析100个端粒目标只需要90分钟，而Southern blot需要至少2天。

研究人员评估了299名不同年龄（0-99岁）健康个体的端粒。结果表明端粒长度和年龄成负相关。他们还利用Southern blot和qPCR方法对13名个体的端粒长度进行了测定，发现这两种方法的结果之间呈相当高的相关性。

在Rotor-Gene Q循环仪上开展的实时定量PCR为分析端粒长度提供了一种快速而灵敏的方法。它为研究基因组不稳定性、心脏病和中风、癌症发展与治疗提供了一种强大的工具，并将协助研究人员肿瘤发展过程中端粒缩短的程度和重要性。

Rotor-Gene Q以其独特的离心转子式设计成为现今最精确的多功能定量PCR仪之一。每个管子在反应仓中匀速旋转，所有样本在快速热循环过程中都处于均一的温度下。检测过程保持同样的均一性。当管子对准检测光路是，样品就被激发，通过一束短光路快速采集荧光信号。温度和光学的均一性确保灵敏、精确和快速的实时定量PCR分析，同时也减少了样品间差异和边缘效应。点击索取Rotor-Gene Q的更多资料