当谈到“亲子鉴定”,我们会联想到什么?第一时间浮现于脑海中的恐怕是与亲子鉴定密切相关的影视剧情节。貌似离日常生活很远的亲子鉴定已经不知不觉渗入了我们的生活。每一份亲子鉴定的背后都有一个故事。而这背后的故事,往往比影视作品的情节来得跌宕起伏。剔除亲子鉴定的道德和社会意义,它就只是一种技术手段。39健康网带您深入广东省第二人民医院实验中心,全程揭秘个人亲子鉴定的操作流程。
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2/32. 填写个人亲子鉴定知情同意书
接受个人亲子鉴定业务的第一步:委托人填写知情同意书,确定自己所做项目的目的、注意事项和收取检查结果报告的方式等相关信息。接受个人亲子鉴定业务的第一步:委托人填写知情同意书,确定自己所做项目的目的、注意事项和收取检查结果报告的方式等相关信息。
3/32. 用于采集血样的血样采集卡
血样采集卡是一种以植物纤维为载体用于存储DNA的介质,专为室温下对各种生物体液(如血液、精液、唾液)、微生物和病毒等样品进行收集、运输和存储而设计。鉴定人可将少量手指血置于血样采集卡上。在没有血样采集卡的情况下,也可选用干净纸巾或干净医用纱布作为代替物采集血样。
4/32. 委托人进行手指采血
实验中心的医护人员为委托人进行手指采血。在头发、唾液和血液几种介质当中,血样的DNA提取量稳定,可以保证检测结果,亲子鉴定中心强烈建议委托人最好留取血样。
5/32. 取一至两滴血于血样采集卡上
用碘消毒采血部位后,用采血针扎破手指挤压取末梢血一两滴,滴至血样采集卡或医用纱布上。
6/32. 采完血样的采血卡和所用的一次性针头
采集完血样的血样采集卡(纸巾或纱布)需要等自然晾干后用白纸包好,并做好标记,装入信封中。
7/32. 扩增反应管编号
PCR的中文名为聚合酶链式反应,简单的说,PCR扩增这一步就是把我们所需要的片段通过酶促反应,放大到通过某些专用仪器可以看到的程度。在对样本扩增反应前,工作人员为放置样本的扩增反应管进行了编号。
8/32. 在反应管中加入扩增反应液
工作人员在放置样本的扩增反应管加入扩增反应液,逐步做好检测样本扩增反应的准备。
9/32. 用微量卡片打孔针在干燥后的采集卡上取样
10/32. 将样本加入反应管中
工作人员小心翼翼地将提取的样本放置进标好编号的反应管当中。
11/32. 加完样的反应管
加完样本的扩增反应管准备放置进PCR扩增仪。如今,PCR技术已经成为生命科学研究实验室中不可缺少的一部分。
12/32. 将反应管放入PCR扩增仪中
PCR反应在热循环设备中进行。PCR仪可以将反应管加热或冷却到每步反应所需的精确的温度。
13/32. PCR扩增反应
PCR技术是一种快速体外基因扩增技术,它可将极微量的检材或陈旧性斑痕的DNA在体外进行扩增,从而使其DNA量达到较高水平,满足对DNA多态性的分析鉴定的需要。PCR这项技术被广泛应用于亲子鉴定。
14/32. 2小时后反应完毕
理论上PCR可以按2n倍数扩增DNA十亿倍以上,实际应用已证实可以将极微量的靶DNA成百万倍以上地扩增到足够检测分析量的DNA。PCR仪一般在2小时内约可完成30次以上的循环扩增。
15/32. 取出反应管
PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。扩增反应完毕,将反应管从仪器中取出。
16/32. 扩增后的反应管
PCR扩增DNA片段只是一个重要手段。由于DNA微不可见,所以必须进行PCR扩增,复制出上亿倍的“同类”,起到放大作用使产生的DNA片段能被仪器检测出来。
17/32. 准备3500XL电泳样本
复制放大后的DNA样本(即PCR产物)将会送入电泳室,运用特殊仪器测序后,形成样本的峰形图。
18/32. 准备3500XL电泳样本
19/32. 准备3500XL电泳样本
20/32. 盖上橡胶盖
为放置样本的实验盒盖上橡胶盖密封,下一个步骤是对DNA样本进行热变性。
21/32. 样本上PCR机热变性
将DNA溶液加热到70~100℃几分钟后,双螺旋结构即发生破坏,氢键断裂,两条链彼此分开,形成无规则线团状,此过程为DNA的热变性。
22/32. 将热变性后的样本放入套板
实验室工作人员将热变性后的样本安置进套板当中。
23/32. 装好套板
套板安置完毕,确保其安置稳固之后就可准备放进ABI 3500XL遗传分析仪。
24/32. ABI 3500XL遗传分析仪
ABI 3500XL遗传分析仪不仅具有DNA测序、PCR片段大小分析和定量分析功能,而且实现了全部操作自动化,包括自动灌胶、自动进样、自动数据收集分析。
25/32. 将装好样本的套板放入ABI 3500XL 遗传分析仪
每次测序之前,只需把样品放到自动进样品的样品盘中,设置电泳参数、数据收集和分析参数即可。
26/32. 分析仪运行
PCR产物运用ABI 3500XL遗传分析仪测序后,形成样本的峰形图。
27/32. 温度控制
实验室对温度有着严格的要求,实验工作人员随时会检测实验室的温度,确保温度不会让检测结果发生偏差。
28/32. 产物分析区
广东省第二人民医院实验中心的产物分析区。DNA的毛细管测序仪检测便在此进行。
29/32. 实验结束,电脑软件分析数据
检测人员将所得结果进行分析汇总、计算,然后出鉴定结论和报告。
30/32. 软件分析数据界面
ABI 3500XL遗传分析仪显示出的表格和波峰图肯定让普通人云里雾里摸不着头脑。而工作人员则可以据图表进行专业比对,进而生成检测报告。
31/32. 原始结果报告
在所有流程走完之后,委托人将拿到最关心的亲子鉴定报告。目前进行亲子鉴定采用的聚合酶链反应——短串联重复基因座DNA分型技术,其结果判断准确率大于99.9%。
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