PMSF蛋白酶抑制剂(100 mmol/L)
0.0174 g溶解于1 mL异丙醇中。
PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。
PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时,20μl mmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min,这表明将PMSF溶液调节为碱性(pH>8.6)并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。
RIPA蛋白裂解液(100 mL )
Triton X-100 1 mL
Tris.ClpH6.8 0.5 mol/L 10 mL
EDTA 29.225mg (或EDTA.2Na 37.224 mg)
SDS 0.1g
脱氧胆酸钠 1 g
NaCl 0.876 g
使用之前,每1 mL上述溶液中,加PMSF 5μL, cocktail 10μL。
考马斯亮蓝染色液(100 mL)
在甲醇:水:冰乙酸体积比为45:45:10,共100ml中加入0.25g的考马斯亮蓝R-250。
脱色液(30%甲醇100mL)
30 mL 甲醇 + 10 mL 冰乙酸+ 60 mL H2O。
Trypsin(胰酶)(0.25%)
0.625g胰酶溶于250 mL 1×PBS中,溶解2~3h。
EGF
储液2ng/μL:10μLEGF (200 μg/mL)加入1mL 含0.1% BSA的10mmol/L乙酸中;
工作液10ng/mL: 10μL储液加入到2mL培养液中。
BSA(蛋白标准)
1%BSA=10mg/mL=0.145 mmol/L 0.1%BSA=1mg/ml
TBS
10×TBS:
Tris.Base 24.23 g
NaCl 80.06g
定容到800 mL,用浓HCl调到pH7.6,再定容到1 L。
1×TBST:用10×TBS稀释10倍,并加入0.1%(v/v)Tween 2.0。
结晶紫(1%)
0.1 g结晶紫溶于10 mL甲醇。
10×TAE
Tris 48.4 g
冰乙酸 11.42mL
EDTA 0.5 mol/L 20 mL (或称取2.9225 g)
加水至1 L, 调pH8.0。
双抗培养液
青霉素:100 U/mL
链霉素:100 U/mL。
10×SDS-PAGE电泳缓冲液(1L)
Tris 30g
甘氨酸 144g
SDS 10g
0.5M Tris-HCl(pH6.8,250ml,4℃保存)
Tris15.125g,HCl调节pH至6.8.
1.5M Tris-HCl(pH8.8,250ml。4℃保存)
Tris 45.5g,HCl调节pH至8.8.
甘氨酸缓冲液(250ml)
甘氨酸 0.938g
NaCl 2.194g
HCl调节pH至2.5,室温保存
4×Tris-Cl/SDS(pH6.8,100ml)
Tris 6.05g
HCl调节pH至6.8,过滤后家0.4g SDS,4℃保存
2×蛋白上样缓冲液(loadingbuffer,100ml)
4×Tris-Cl/SDS,pH6.8 25ml
甘油 20ml
SDS 4g
溴酚蓝 0.2g
DTT 3.1g
1ml分装,-70℃保存
转膜缓冲液(1 L)
Tris 3.07 g
甘氨酸 14.4 g
甲醇 100 mL
先用去离子水将固体溶解后,临用前加甲醇并定容至1L。
SDS (10%)
SDS 10 g
去离子水 100 ml
Stripper Buffer(pH2.0,1L)
甘氨酸 1.876g
SDS 10-20g
使用时,15min×3次
10%福尔马林(4%甲醛)
甲醛与水体积比1: 9。
DMEM双抗培养基
DMEM培养基粉末一袋 加去离子水至1L
青霉素 100U/ml
链霉素 100μg/ml
调节pH至7.6,过滤灭菌,4℃保存。临用前,加入10%新生牛血清(NBS)。
磷酸缓冲液(PBS)
NaCl 8.0g
KCl 0.2g
Na2HPO4.12H2O 3.58g
KH2PO4 0.27g
加去离子水至1000ml,高压灭菌,4℃保存。
Tris-Cl(1.5 mol/L pH 8.8)
Tris 182 g
去离子水 800ml
用浓盐酸调pH至8.8,加水至1000ml。
Tris-Cl (0.5mol/L pH 6.8)
Tris 60.5 g
去离子水 800ml
用浓盐酸调pH至6.8,加水至1000ml。
4×Tris-HCl /SDS(pH6.8)
Tris 6.05g
去离子水 80ml
用HCl调节pH至6.8,加去离子水至100ml,过滤后加0.4gSDS,4℃保存。
6×电泳加样缓冲液
4×Tris-HCl/SDS(pH6.8) 7ml
DTT 0.93 g
SDS 1 g
溴酚蓝 1.2mg
甘油 3ml
加去离子水至10 ml,分装,-70℃保存。
封闭液(5%)
脱脂奶粉 5 g
TBST缓冲液 100 ml
细菌裂解液(100ml)
50 mM Tris pH 8.0
20% 蔗糖
10% 甘油
2mM DTT
4℃贮存,临用前加入蛋白酶抑制剂。
MagneGST™ Binding/Wash Buffer
Na2HPO4 4.2mM
KH2PO4 2mM
NaCl 280mM
KCl 10mM
冲洗液(Rinse buffer,100ml)
50 mM Tris pH 7.5
1% NP-40
10% 甘油
100mM NaCl
2mM MgCl2
4℃贮存,临用前加入蛋白酶抑制剂。
LB液体培养基
胰化蛋白胨 10g
酵母提取物 5g
NaCl 10g
完全溶解后,用5mol/L NaOH调节pH至7.0,去离子水定容至1000ml,高压灭菌。
若需LB固体培养基,则在1000ml液体培养基中加入15g琼脂粉,高压灭菌,冷却至50-60℃,倒入平板,待冷却凝固,4℃保存。
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