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1、材料与方法
1.1 对发病猪进行剖检
主要的病变发生在肺部，肺脏心叶发生对称性肉样变，肺脏水肿、充血、淤血，肺脏弥散性间质性肺炎的症状均有不同程度出现，喉头未见异常，怀疑存在支原体的继发感染（图1）。全身淋巴结肿大、出血（图2）。肾呈土黄色，表面凹凸不平（图3）。脾脏边缘发黑、梗死、不整（图4）。脑充血、胃底充血，其他脏器未见异常。
1.2 病料采集及猪场免疫情况
采取送检新鲜死亡的仔猪的扁桃体、肺脏、脑组织和淋巴结。该猪场进行过猪瘟免疫（21 d），猪伪狂犬病免疫（3 d，28d）。
1.3 酶和其他试剂
Taq DNA 聚合酶、dNTPs、DEPC水、DL2 000 Marker、总DNA 抽提试剂盒均购自上海生工生物有限公司，猪瘟RT-PCR 诊断试剂盒，猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR 诊断试剂盒、猪伪狂犬病PCR 诊断试剂盒购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司。猪瘟抗体检测试剂盒、猪蓝耳病检测试剂盒、猪伪狂犬病gB 抗体检测试剂盒购自美国IDEXX 生物试剂公司。
1.4 引物设计与合成
根据GenBank发表的PCV2 用Oligo6.0 软件设计引物。
1.5 病毒核酸检测
猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病病毒的扩增分别用猪瘟RT-PCR诊断试剂盒、猪蓝耳病RT-PCR 诊断试剂盒、猪伪狂犬病毒PCR 诊断试剂盒进行，PCR 产物经1.2％琼脂糖凝胶电泳鉴定。猪2 型圆环病毒扩增应用总DNA 抽提试剂盒提取模板，体外扩增反应条件95 ℃ 2 min ；（94 ℃ 30 s，50 ℃ 40 s，72 ℃ 40 min）×35 个循环，72 ℃延伸10 min，PCR 产物经1.2％琼脂糖凝胶电泳鉴定。
1.6 猪ELISA 抗体检测结果
将送检3 份血样离心分离血清，将稀释后的血清加入检测板，进行 ELISA实验，将检测板放入酶标仪内测各孔的OD 值。
2、试验结果
2.1 RT-PCR 扩增后结果
猪瘟检测结果进行RT-PCR 扩增后，PCR 产物用1.2％琼脂糖进行凝胶电泳后在凝胶成像系统中观察，可见到232 bp 左右的基因条带，大小与CSFV预期基因相符。
猪繁殖与呼吸综合征病毒检测结果进行RT-PCR 扩增后，PCR 产物用1.2％琼脂糖进行凝胶电泳后在凝胶成像系统中观察，可见到432 bp 左右的基因条带，大小与PRRSV 预期基因相符（见图5）。
2.2 猪伪狂犬病病毒、猪2 型圆环病毒
猪伪狂犬病病毒、猪2 型圆环病毒检测结果，将PCR 扩增产物用1.2％琼脂糖进行凝胶电泳，结果未见到目的基因。
2.3 抗体检测结果
将送检3 份血样离心分离血清，将稀释后的血清加入检测板，进行 ELISA实验，将检测板放入酶标仪内测各孔的OD 值，结果见表1。
3、结果分析及防控建议
3.1 猪瘟结果分析
该猪场哺乳仔猪猪瘟病原检测为强阳性，血清学检测结果显示，送检猪只猪瘟的抗体是合格的，说明哺乳仔猪发病主要是以窝为单位，发病的主要原因是母猪免疫不好或带毒造成的，建议对初生仔猪进行超免，对母猪群进行抗体检测，对不合格母猪进行猪瘟疫苗的补免，之后再进行检测，将抗体值是阴性的母猪淘汰。
3.2 猪蓝耳病结果分析
哺乳仔猪和保育猪蓝耳病抗原均为阳性，说明猪群正存在蓝耳病的暴发流行，是猪大批死亡的原因所在。从蓝耳病抗体检测结果分析，S/P 值在未免疫疫苗的情况下还是比较高的。建议措施：
1）对发病猪立即隔离。发病较重的仔猪进行淘汰，病死猪深埋。对猪舍和用具进行彻底消毒。
2）控制发病猪群的继发性细菌感染，即做好药物保健和预防，应用药物替米考星、支原净等对母猪进行净化。发病仔猪治疗以补充电解质和对症用药为主，控制继发感染。使用减毒活疫苗，对初生仔猪和母猪进行免疫。
3）进行疫苗免疫，建议使用弱毒苗，对空怀期母猪进行免疫，对新生仔猪7 d 免疫。
4、讨论
该场是我国北方中小型养猪场和散户的典型代表，这些猪场往往在管理上和疫病防控上存在诸多的漏洞，没有科学的管理和免疫程序，发生传染病往往没有科学的实验室诊断而延误病情，这些猪场诊断疾病主要是依靠基层有经验的兽医剖检进行诊断，但现在的疾病从眼观上病变都不是十分的明显、典型，而且混合感染、继发感染都比较严重，临床发病越来越严重，药物滥用而不见效果。有时猪场老板对兽医人员的疾病诊断产生质疑和不信任感，使得治疗执行力下降，延误最佳治疗时机。中小型养猪场和散户中猪病的流行和泛滥是以上诸多原因造成的。
该场仔猪的死亡主要是蓝耳病暴发的结果，就目前我国猪蓝耳病的发病情况来看，无论什么季节都会有猪蓝耳病发病的案例，但是发病最密集的季节为夏秋季，一般情况下猪蓝耳病发病时会呈现成片感染趋势，受感染猪群的发病率以及死亡率都非常高。对于蓝耳病的防控应做到掌握和了解本场感染和流行状况，主要应用血清学抗体检测技术。对于蓝耳病阴性猪场，不使用疫苗是最佳的手段，此外，应该做好生物安全措施，猪场进行闭群饲养，尽量避免引种，如确实需要引种，必须检测和检疫，绝对不能引入阳性猪。还需定期对猪场进行监测，保持蓝耳病阴性状态。对蓝耳病稳定而不活跃的猪场（母猪群阳性，但繁殖性能不受影响；生长猪群无感染），应做到以下几点：应尽量不用减毒活疫苗免疫，此外还应加强母猪的饲养管理，定期监测其感染状况；强化猪场的消毒与卫生，防止母猪排毒在猪场内传播；后备阴性母猪配种前与经产母猪混群饲养；监测生产猪群的血清学。对蓝耳病稳定而活跃的猪场（母猪群阳性，但繁殖性能不受影响；生长猪群有感染，临床发病，因继发感染有一定死亡率；病毒在猪场内传播），应强化猪场的消毒卫生，降低或杜绝病毒在猪场内传播；适当使用减毒活疫苗，依据实验室确诊的生长猪群的感染和发病阶段，提前3 ～ 4 周为生产猪群进行一次免疫，猪群稳定后应立即停止使用活疫苗；控制感染猪群的继发性细菌感染，即做好药物保健和预防。（资料来源：李树东 猪业科学,2015(9)P70-71）
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