卢沟桥事变后，东北地区抗日游击战争的战略地位发生重要变化，成为全国抗战的重要组成部分。东北抗日联军的战略任务已由单独对日作战，转变为打击东北日军，牵制其军事力量，配合关内正面抗战。 日军为把东北地区变成扩大侵略战争稳固的后方基地，加紧对抗日武装围歼，东北抗联斗争进入十分艰苦的时期。
在全民族抗战的新形势下，东北各地中共党组织、抗联各军积极领导东北抗日军民对敌斗争，策应全国抗战，掀起东北抗日斗争的新高潮。1937年7月25日，中共南满省委领导下的抗联第一路军总司令部发表《为响应中日大战告东北同胞书》。8月25日，中共吉东省委以东北抗日救国总会名义发布《关于抗日救国宣战运动的紧急通知》。9月18日，北满抗联总司令部也发出紧急通知，号召东北人民联合起来，配合全国抗战，以全部的人力物力财力打倒日本帝国主义，推翻伪满洲国，争取抗战的最后胜利。东南满、吉东、北满抗日游击区的广大人民群众热烈响应东北各地方党组织和抗日联军的救国号召，秘密组织各种抗日救国团体，通过宣传动员筹措给养、征收救国捐税、运送物资、护理伤员、侦察敌情等形式支援抗联。北满汤原、依兰、桦川、富锦四县组织的抗日救国会和分会就达103个，一些地方还组织了游击连、农民抗日自卫队、青年救国军等群众抗日武装。依兰、佳木斯、富锦各地许多青年知识分子和学生参加了抗联。广大爱国群众还以暴动的形式直接支援抗联斗争，1937年9月17日至18日汤原县格区、龙区、鹤区、汤区千余名群众在中共汤原县委领导和抗联第六军第三师配合下，手持大刀长矛、土枪洋枪，举行反满抗日大暴动，掀起松花江下游地区抗日斗争的高潮。东北地区许多地方具有民族意识的伪军在抗联的推动下，纷纷反正哗变，投入抗联。宁安县三道河子伪森林警察大队150人在抗联第五军第一师参谋长张镇华等人策动下，由大队长李文彬率领于1937年7月12日倒戈抗日，击毙日本指导官津村昌、教官加藤直秋等八人，焚烧森林警察队防所等设施，携带各种枪160支(挺)、子弹3万发和全部辎重投向抗联第五军，被整编为警卫旅。8月21日，驻依兰伪军第三十八团机枪连118名士兵举行起义，携带各种枪炮百余支(门)投向抗联第六军，被整编为第一师第六团。9月10日驻牡丹江东小河沿附近伪军第二十九团六百余人反正，投入抗联第八军，等等。人民群众的支持和伪军反正使抗联队伍迅速壮大。
为适应抗日游击战争发展新形势的需要，抗联根据中共满洲省委被破坏后相继成立的中共南满、吉东、北满省委的实际情况，从1936年6月至1939年5月整编为第一、第二、第三路军，分属各省委领导，划分活动区域，互相配合，协同作战，钳制日军入关。
1936年6月，中共南满和东满省委及抗联第一、第二军主要领导人在吉林省金川县(今辉南县样子哨镇)河里召开了联席会议，东满、南满省委合并为中共东南满省委，魏拯民任书记;抗联第一、第二军合编为抗联第一路军，杨靖宇任总指挥兼政委，王德泰任副总指挥，下辖第一军，杨靖宇任军长兼政委，第二军由王德泰任军长，魏拯民任政委，活动于西起辽沈，北至长图路，东抵鸭绿江三十余县。卢沟桥事变后，第一路军沿南满铁路两侧，展开猛烈攻势，到处袭击日伪据点，炸毁列车，焚烧军火库，把南满地区的抗日斗争推向新阶段。7月中旬，杨靖宇率一百五十余人从桓仁西进，在兴京县(今新宾县)黄土岗与日军松原部队发生遭遇战，激战六小时，击溃日军。之后，杨靖宇率部继续在兴京、桓仁、宽甸、本溪等地坚持游击战。10月31日，杨靖宇率军部直属部队和第一师袭击宽甸双山子和四平街守敌，击毙日军水出佐吉大队长以下三十余人、伪军十余人，12月4日在本溪南营房附近击毙日伪三十余人。第三师在师长王仁斋、政委周建华率领下转战于清原、开原、东丰、西丰、抚顺、沈阳东郊等地，在开原松木岭、清原七道河子袭击日军，击毙冈田中佐以下三十余人，在沈阳郊区智擒伪奉天省土木厅高级官员村上博。第二军在政委魏拯民指挥下，在额穆、辉南、濛江(今靖宇)、抚松、桦甸等地多次重创敌军。8月至9月，先后进行了老黑顶子、榆树川、柳河、穆棱二站、西岗等战斗，歼敌八十余人。10月26日，魏拯民率二百五十余人攻占濛江和朝阳镇之间日伪的重要军事补给基地辉南县城，缴获大量粮食、布匹、棉花、药品等军需物资。12月，在濛江突袭敌军一处宿营地，歼敌近三百人，缴获大量枪支弹药。在半年多的时间里，抗联第一路军与日伪进行大小战斗数十次，歼灭大批日伪军，在磐石、柳河、临江、长白山等县广大农村建立了抗日游击根据地，把东南满地区变成日伪统治者的“心腹之患”。
中共吉东省委领导的抗联第四、第五、第七、第八、第十军在西起哈长线东侧，北达松花江右岸，东抵乌苏里江畔的地区对敌展开进攻。7月中旬，第五军军长周保中率警卫旅由牡丹江岸向依兰东部发展;第五军第二师主力组成“下江远征队”，由师长王光宇率领从依兰东进宝清与第三、第四、第六、第七军取得联系，几支部队互相配合，活动于依兰东部、富锦、宝清、虎林、饶河一带，打击日伪，袭扰敌人后方。7月14日，第五军第一师在穆棱盘道岭，攻击日伪军列，毙其一百三十余人，伤其无数。8月13日，第二、第四、第五、第八军各一部二百五十余人在第五军副军长柴世荣指挥下，袭击三道通日军，歼其四十余人。8月14日，周保中指挥警卫旅在十大户毙敌二十余人。8月21日，周保中指挥第五军警卫旅、第八军第三师及独立师四百余人，在五道岗伏击日军黑石骑兵部队六百余人，毙其三百余人，伤其五十余人，打死战马二百余匹，缴获各种枪支二百三十余支(挺)及其他战利品无数。之后，周保中返回牡丹江四道河子军部，警卫旅由王光宇指挥转移至宝清与第二师会合，协同第三军第四师、第六军第一师及第四军在该地区作战，攻击日伪防所，夺取武器弹药及军需品。
抗联第四军成立后，在代军长李延平率领下，转战于宝清、密山、饶河、虎林、勃利一带，在斗争中不断壮大，至1937年1月已从原来的二个师发展到四个师十个团两千余人。8月，李延平指挥第四、第五军各一部在二道河子伏击日军，歼敌百余人，缴获枪支百余支(挺)。第七军在代军长崔石泉率领下，在饶河、虎林、同江、富锦等地发动群众，开展游击活动，主动打击日伪，争取伪军哗变，破坏敌人的“集团部落”，扩大抗日统一战线。第八军是由民众救国军于1936年9月改编而成，谢文东任军长，至1937年6月已由原来的四个团发展到六个师又一个教导队千余人，活动于依兰、方正、延寿、勃利、桦川、富锦等县，配合第三、第四、第五、第九各军作战。第十军由活动于五常县的“反满抗日救国义勇军”改编而成，汪雅臣任军长，主要以五常东南山区为活动地区，后来扩展到舒兰县一带，采取灵活机动的游击战术配合第三军作战。
1937年9月29日，中共吉东省委由周保中主持召开了常委会议，决定组建抗联第二路军。10月10日，抗联第二路军筹委会成立并发表通告，周保中任总指挥。抗联第二路军以第四、第五、第七军为骨干，包括第八、第十军及东北义勇军姚振山救世军王荫武部。四道河子会议后， 日伪集中两千余兵力大举进犯三道通、四道河子第五军根据地，周保中决定同第四军军长李延平前往宝清、饶河等地，对第四、第五、第七军进行整顿，由新任第五军军长柴世荣率领第一师进出林口，突入五河林开展活动。11月，周保中到达宝清第五军第二师和警卫旅前方指挥部，召开会议，传达了省委精神，决定将警卫旅改编为第五军第三师，并对第五军干部进行了调整，以柴世荣为军长，宋一夫为政治部主任，下辖三个师，第一师师长关书范、政委严志，第二师师长宋一夫(兼)、副师长张镇华、政治部主任季青，第三师师长李文彬、政治部主任王效明。同月，周保中同王光宇奔赴第四军军部，会同第四军代军长李延平对第四军进行整顿，将第四军由原四个师缩编为两个师，以李延平任军长、王光宇任副军长、黄玉清任政治部主任，第一师师长张相武、政治部主任黄玉清(兼)，第二师师长张显庭、政治部主任曲成山。第四、第五军经过整顿后，战斗力增强，在冬季反“讨伐”斗争中先后取得宝清、桦川聚宝山、七星河镇等重大胜利，歼灭日伪数百人，缴获各种枪支近四百支(挺)及众多军用物资，争取了部分伪警反正。
活动于饶河的第七军于11月在小来河围歼日伪二百余人，粉碎了敌人的冬季“大讨伐”，队伍得到新的发展，迄年底全军达到一千五百余人。但第七军领导内部存在一些不团结的现象，妨碍了部队的进一步发展，12月31日至1938年1月5日，周保中以吉东省委代表身份，领导召开了中共下江特委会议，改组了下江特委，以张文清任主席;整顿第七军，以崔石泉为第七军党委书记，李学福为军长;调整了各师团干部。这次会议使下江党的组织和第七军走上了巩固和统一的道路，为新的更艰苦的斗争做好了组织上和思想上的准备。
中共北满临时省委在卢沟桥事变前夕在汤原帽儿山召开了执委扩大会议，决定各军互相支援，配合行动，开辟新的游击区，打破敌人新的进攻与“讨伐”。会后，第三、第六、第九军及独立师分别在松花江下游两岸、小兴安岭西麓，广泛开展游击战争。游击区的人民群众与抗联队伍密切配合，积极开展扒铁路、毁桥梁、割电线、袭击敌人兵站、破坏交通枢纽等斗争，严重威胁着日伪在北满的统治，被日军称为“北满国防线上的心腹之患”。①
抗联第三军在军长赵尚志领导下，迄全国抗战发生不久即发展到十个师，其中第一、第二、第三、第八师活动于松花江以南的宾县、珠河(今尚志)、延寿、方正、苇河、五常、双城等县，第四、第十师活动于依兰、桦川、富锦、勃利、萝北、宝清等县，第五、第六、第七、第九师活动于松花江以北的汤原、通河、巴彦、木兰、东兴、铁力、庆城、海伦、通北、龙门、奇克(今逊克)等县的一些地区。7月10日，赵尚志率部队袭击通北县王通使屯，烧毁该地警察分驻所，活捉所长以下五人，缴获所有枪支和马匹。第四师在师长陈希田指挥下，在勃利策动二十余名伪军反正，将四十余名伪警缴械。10月至11月间，第四师部分骑兵和第六军第一师共250人组成模范师挺进饶河、抚远境内开展活动，会同第七军在乌苏里江岸袭击敌人，牵制日军一个骑兵旅团和数团伪军对宝清一带的进攻。第五师在师长景永安率领下，在依兰萧家屯附近与四合山重创日伪，在小门傅屯歼灭日军二十余人。第六师一部在师长张光迪率领下，一度攻占敌人海伦县据点侯家大屯，焚烧伪警署。第九师在师长李振远率领下，从7月至10月在汤原西部地区多次与日伪进行战斗，缴获各种枪支百余支(挺)，子弹万余发，击毙日伪七八十人，俘虏伪军数百人。
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