科学院博士手把手教你做免疫组化定量分析

 

做个生物实验也是够苦逼的啊，不止结果要好看光鲜，还要做定量……也是醉了。明明 western blot 结果做的那么漂亮，一眼就看出来差异了，还需要定量？！思量起来，这个也还算简单，忍了吧。。。

but…辛辛苦苦做的免疫组化（或荧光）也需要定量——你当搬砖就可以随便使唤了吗？花花绿绿，斑斑驳驳，肿么分析 ？

还好，我有这本秘籍，一定要看完哦。

进入正题

准备工作

首先，你需要下载 imageJ，然后下载 IHC-Toolbox 插件，并放入 imageJ 的安装目录下的 plugins 文件夹下；

送链接：https://imagej.nih.gov/ij/plugins/ihc-toolbox/index.html

开始分析

1. 在菜单栏里选择文件打开，打开实验数据图片（此处所使用图片来自互联网，大家可用自己的数据实战）；然后在 plugins 菜单下 → 选择 IHC Toolbox，打开如下：

2. 选中感兴趣的区域（ROI），然后点击 Training；（这里选择的区域一定要有代表性，范围不可太大，也不能太小）

3. 上步完成后会弹出 Color Chooser 窗口，滑动滑块儿以使感兴趣的区域全部被选中；

4. 调整图片格式，改成 8 bit 灰度图片，彩色的好看但是不支持哦；（你也可以改成 16 bit 的哈，忘了修改软件会蹦出提示的）

调整完后，大概就是酱纸。

5. Image → Adjust → Threshold… 打开调整阈值窗口；

6. 滑动滑块儿使红色覆盖所选区域，其实就是告诉软件你要分析哪些区域，有点像 ps 中的魔棒？… 反正赶脚很傻瓜；

7. 然后就到了黎明前的最后一哆~嗦~了，告诉软件你要分析面积还是灰度值，此处我们以面积为例（一定记得要选中 limited to Threshold 哦，切记！切记！）不蓝，分析的是整个图的面积，就是整个图片的像素长宽之积：1392 x 1040

 

8. 最后一步就是出数据来 Analyze → Measure，也可以用快捷键 Ctrl + M，然后保存数据就好了，是不是既简单又实用呢？ 

第一次写教程，心里还有点忐忑呢，没有说清楚的地方希望大家留言交流。你的支持就是我最大的动力。

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作者：wangnan235