灵芝液体菌种不同培养基配方的研究

 

吕翠光 郭秀良 吴淼玲
（龙泉市科达农副产品有限公司，浙江龙泉 323700）
《食用菌》2013.3　欢迎订阅食用菌杂志

　　摘要 研究初步探明灵芝菌丝在不同配料中生长动态，初步明确葡萄糖和蔗糖作为碳源无明显差别，面粉优为玉米粉，加牛肉浸膏无明显作用，黄豆饼粉1%在三号配方中添加可能有更好的效果。
　　关键词 摇瓶 液体 配方 灵芝

　　灵芝（Ganoderma lucidum）是中国医药宝库中的一种珍贵的药用真菌，具有促进新陈代谢、延缓衰老、强化人体免疫系统、提高对疾病抵抗力等诸功能，颇为人们重视。近年来不少人从事灵芝的液体发酵研究，但各自的目的不同。笔者开展摇瓶配方研究，旨在获得利于灵芝菌丝体茁壮生长，保持菌龄较为一致，菌丝量高的价廉有效的配方，为代料栽培灵芝和强化段木栽培，培育优质灵芝液体菌种，提供科学依据。
　　1 材料与方法
　　1.1 供试材料 ①主要仪器：恒温回转式摇床、超净工作台、灭菌设备、显微镜、照相机及有关玻璃器皿。②灵芝菌株：选用菌种为韩芝203。
　　1.2 供试配方 试验配方详见表1。

　　表1 供试摇瓶配方成分（g/L）
　　

　　1.3 培养方法 摇瓶培养试验期为5d，观察记录120h，主要观察pH值、菌球、菌丝等项目。菌种培养8d，直接接入摇瓶（50mL/200mL）。摇床培养温度27℃±2℃，摇床频率120～130r/min
　　1.4 观察记录项目
　　1.4.1 菌球动态 接种以后每24h观察一次，接种块分离以后，菌球开始形成，到最多用“++++”表示。
　　1.4.2 发酵液清混度观察 从菌球形成过程观察，发酵液混清度用“+”来表示，共分五级，“0”为混“+”到“++++”为逐渐变清。
　　1.4.3 菌丝体观察 主要用次甲基兰或刚果红染色法，观察菌丝体中原生质浓度和菌丝长度的变化，分为初期（接种块开始分散，菌丝在培养液中分散生长，镜检时，在培养液中有分散的菌丝体）、中期（分散的菌丝形成值小的白点小球，并逐渐增大，形成明显的白色菌球，镜检菌丝细长，染色均匀）、晚期（菌球不现增大，并有淡黄色出现，镜检菌丝短，染色不均匀）及自溶。
　　1.4.4 菌丝量观察 摇瓶培养120h，将各处理取50mL培养液，进行菌液分离过滤，过滤后称湿重而得。
　　1.4.5 pH测定 pH用精密试纸测定。
　　2 结果与分析
　　2.1 各配方菌丝生长情况 详见表2。

　　表2 摇瓶培养120h各配方菌丝生长情况
　　

　　2.2 菌球形成观察结果 接种块接入摇瓶以后48h，配方④、⑥，取瓶观察，菌丝体已开始分散在培养液内。6个配方在摇瓶环境下，96h已形成0.5～2.5mm大小的菌球，在培养液仍有许多分散的菌丝体。120h取样，配方③菌球数量最多，培养液的粘稠度最大（图1）。
　　从120h取样镜检观察，各处理的菌丝染色均匀，菌丝体长，菌龄仍在中期（图2）。
　　2.3 pH变化 从试验中明显地看到各配方随摇瓶时间的增长，pH逐渐下降。各配方的起始pH均在5.1～5.4，培养120h后pH3.1～4.5。其中配方③pH下降缓慢。
　　灵芝菌丝在液体摇瓶生长过程，是一个逐步酸化过程，如何延长酸化过程，获得更高菌丝体数量，防止菌丝老化。除配方研究以外，调节配方pH是否有效，很值得研究。
　　在摇瓶过程中，随灵芝菌丝体逐渐的增加，培养液的澄清度增加，出现粘稠现象。

 

　　①菌球数量较少，一般直径在0.2～0.3cm，液清。②菌球多大小不一，大的在0.5cm，液清。③菌球特多，直径在0.5cm左右，液粘稠。④菌球大小差别大，大的直径达0.8cm，液清。⑤菌球数多，一般直径在0.2～0.3cm，液清。⑥菌球数多，菌球小，一般直径在0.2cm以下，液特别清。

图1 6种配方摇瓶培养120h的菌液形态照片

a.在菌球中心的菌丝体 b.在菌球外围的菌丝体 c.分散在培养液中菌丝体菌球是否随发酵时间延长，菌球分解，粘稠度增加；菌丝体老化变短，进入晚期或出现自溶有待进一步试验观察。
图2 摇瓶120h灵芝菌丝体形态（配方③）

　　3 小结
　　试验结果表明碳源中葡萄糖和蔗糖无明显差别，面粉优于玉米粉，牛肉浸膏1%无明显效应。在无机盐中氯化钠作用也不明显。
　　配方⑥在摇瓶培养过程，各瓶生长比较一致，菌丝量也较好，在过滤时比较顺畅。
　　试验初步确定配方③为最佳，可以在配方③的基础加入黄豆饼粉1%，进一步开展菌丝生长和pH动态试验。
　　建议配方：黄豆饼粉1.0%，面粉3.0%，葡萄糖2%，磷酸二氢钾0.2%，硫酸镁0.1%，水1000mL。pH可设置为自然pH，pH6.5和pH7.5。
　　注：本试验在吕书缨研究员协助下完成，特此致谢。
　　参考文献
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