想要搞好科研，发SCI高分文章，寻找信号通路，研究错综复杂的分子机制必不可少！根据文献报道不难发现，Western Blot是目前研究分子机制最简单且最权威的实验方法之一，但想要做出一张漂亮的Western Blot图可不简单，整个操作流程的各个环节都决定着结果是否能入导师的法眼。
如果你能憋出这么一张图，应该整个人生都能升华了···
先不要着急，我们慢慢来。人家这也是长时间累积的结果。
首先你做完一次western blot实验，如果结果是这样的：
恭喜你，你的人品太好了！
如果是这样，也还是不错的，值得拥有：
如果是这样，还是有救的，请重复一次，把杂带切掉：
如果是这样，请拨打投诉电话，这简直不忍直视啊，刀王看了都要哭了：
想要做好WB，选择一个好用的抗体是非常关键的，如果不懂得如何选择抗体，那还怎么愉快的搞科研了……
抗体在实验中的重要性越来越举足轻重。面临着纷呈复杂的抗体试剂市场，如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要。
一、关于特异性的选择
特异性的选择主要需要考虑四个方面：蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。
1、蛋白特异性
针对需要检测的蛋白查找抗体，几个细节要区分，重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测，对抗体的要求是不一样的，注意查看抗体说明书的检测说明。如果重组蛋白不是全长表达，则需要注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。内源性蛋白最好能清楚其剪切与修饰的方式，特殊表型的蛋白需要进行序列比对，并结合抗体免疫原序列，查看交叉反应的情况。 磷酸化蛋白检测需要确定具体位点，不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在，不宜一概而论。
2、种属特异性
同种蛋白不同物种，有着或大或小的差异。目前大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板重组蛋白或设计多肽抗原的，根据蛋白的同源性情况与其他种属发生交叉反应。需要 参照说明书注明的可反应种属信息。一些稀有种属很难找到抗体，可以通过蛋白的序列比对，选择同源序列免疫的抗体，不过一般这种情况生产商不会受理其关于质量的申诉，如果可以申请到免费的抗体样品，则利于抗体选择。
3、实验方法特异性
目前使用抗体的实验方法有很多，不同的使用方法过程中，因为对蛋白样品的处理方式不一样，蛋白的含量有差异，对抗体的识别表位和效价要求都是不一样的。具体的根据说明书注明的产品应用方法进行选择。但是生产商一般不会将每个抗体都进行各种实验的检测，目前检测比较多的只是 WB、IHC、IF 等，如果针对具体的实验方法没有找到合适的抗体的，可以结合蛋白序列分析和抗体的抗原信息，选择尽可能有效果的抗体。同样，申请到免费的抗体样品是个很好的途径。
4、标记物的特异性
一般基于实验操作的实验方法不会使用带有标记的一抗，比如 WB、IHC 等，都是通过二抗类的试剂标记达到结果呈现的目的。但是基于仪器分析的一些实验，可能就会使用到直接标记的一抗，比如流式实验。那么需要了解到自己将要使用的仪器能检测到的荧光范围，针对不通的参数要求选择对应的标记物。在免疫荧光双标实验中，需要选配不同的荧光标记物。
二、性价比的选择
抗体的品质高低最终还是需要通过实验结果来呈现的，但是在选择抗体之前我们并无法准确判断抗体的效果如何。无论什么品牌的，无论进口还是国产的，都会有用得不错的产品，也都会有做不出来的产品。抗体属于异质化产品，不同品牌之间，甚至同一品牌的不同产品之间，抗体品质差异都较为明显，而且没有统一的衡量标准。这是抗体选择中最难的一个问题。很多人习惯于根据实验室传统意识或参考文献上使用的产品进行选择，但是因为不同批次间的抗体效果也是有差异的，所以并不能完全确保正确选择。在这种情况下，抗体的售后就尤为重要，遇到抗体品质障碍时，能够确保有效地解决问题，不至于影响实验的进展。现在有部分品牌可以提供免费的抗体小样的，无疑对这个问题是一个很好的解决方案。先确定抗体是否适合自己的实验，可以避免因为抗体质量投诉耽误实验安排。
在价格方面，需要谨记，最贵的不一定就是最好的，最适合你的实验的才是最好的。花很多钱买到很贵的抗体，再花上很长的时间去投诉的情况并不少见。只买对的，不买贵的。 在选择价格的时候还要注意规格大小、抗体浓度、效价范围等，要综合考虑。在规格方面，根据最终可以稀释成的工作液的量的来衡量更为准确。很多老品牌提供的抗体产品基本都是以大包装为主，就单个课题的实验而言，过大的包装有时会造成很大的浪费。目前 Proteintech、Bioworld、Cell Signal 等品牌都相继推出小包装的抗体，这在一定程度上给选择者更大的选择自由度，可以根据试用产品的效价，计算出自己实际需要的抗体量，做到精确定量采购。
具体如何选择抗体，主要有以下三个办法，各有讲究：
1、 直接参考文献中使用的抗体：这个是最安全可靠的办法，但需要特别注意3点：一是文章的可靠性，要参考影响因子高于5分的文章；二是实验必须是同一类实验，别人做IHC的抗体用做WB是没有意义的；三是检测的是内源蛋白还是外源蛋白，一般只有内源蛋白的Western blot才有参考意义，但如果同时做了过表达和敲减，也是可以的。
2、 抗体搜索网站查询：这个方法必须对常见的抗体资源网站有所了解，这里就向大家推荐几个小编常用的：Biocompare、Antibodyresource、Labome、Antibodypeida，当然大家还可以问问google。无论是用哪一个网站搜索都要注意抗体名称，不要把其它无关的抗体当成了自己需要的，因为这些网站都有模糊搜索功能；二是很多抗体名称不是唯一的，搜索出来的抗体名称可能不一定是你输入的名称，但确实是你需要的抗体，因为大部分基因都是有别名的，需要看仔细了。
3、 直接上知名公司网站查询：这个方法对于初接触抗体的人来说是一件相当复杂的事情，抗体种类繁多，品牌众多，价格和质量又相差甚大。但无论什么品牌，进口还是国产，都会有用得不错的产品，也会有做不出来的产品。需要谨记，最贵的不一定就是最好的，最适合你实验的才是最好的。在这里，根据小编多年的使用心得和大家分享一些可靠而且口碑好的抗体公司，希望对大家有所帮助。
优先推荐的是生产商且拥有国际品牌的中外合资跨国公司，主要优势有：
国内订货到货周期短（国外公司一般3-4周，国内公司最多1周）；
售前售后服务方便到位（这一点非常重要，国外抗体咨询投诉周期一般都非常长，国内公司一般1周就可以解决，还可以免费索取一些抗体小样）；
性价比高，价格是国外的1/3左右，而且有小包装规格，近年来这些品牌也被国内外学术界认可，所以你懂的。
Proteintec Group： 总部在美国，有10000多种多抗和400多种单抗，90%以上的抗体是用重组蛋白作为抗原生产，产品数据齐全，甚至还公开了抗原序列，其品牌被国内外学术界广泛认可。
Epitomics：以兔单抗为主，是全球最早生产兔单抗的公司，产品质量过硬，数据齐全，品牌口碑很好，现已被Abcam收购。
Bioworld：有7000多种单抗与多抗，所有抗体都经过严格质检，单抗制备获得国家发明专利，引用的文献几千篇，品牌已经被全球认可，大小规格都有。
Abnova：一家台湾公司，抗体种类很多，涵盖物种也广，单抗种类多。
还有一些其他不错的国内公司博士德、SAB、Genetex等。
接着推荐一些国外知名公司，主要有2类，一类是销售型公司，自己不生产产品或者只生产一小部份产品，大部份产品来自于其他公司，如Abcam、Sigma Aldrich、Thermo Fisher、ACRIS、Merck Millipore, Novus Biologicals 等，另一类是生产型公司，下面简单介绍些：
Cell Signaling Technology (CST) 的抗体在信号通路相关的领域具有很大的优势，其抗体几乎包涵了所有的信号通路，被文献引用频率高，深受用户好评。
BioLegend 抗体主要是面向免疫系统相关的分子以及细胞因子等，而且几乎所有抗体都可以用于流式分析。
eBioscience 抗体主要面向于免疫系统和癌症相关的分子，类似BioLegend，大部份抗体都可以用于流式分析，而且也有多种不同类型的标记的抗体。
Dako 抗体产品种类较少，但每一个都是精华，尤其是在病理诊断市场上，更是行业的金标准，免疫组化首选。
Bethyl Laboratories 是一个相当古老的公司，抗体种类不是很多，其特色在于大部份抗体都有IP实验结果，质量相当不错。
R&D Systems 成立比较早，其产品尤其在细胞因子相关分子上占有极大的优势，同时拥有配套的高质量ELISA kit，为需要进行定量研究的用户提供了极为有力的工具。
BD Biosciences 公司抗体在CD分子上做得极为全面，而且几乎所有的抗体都不同种类的标记，大部份抗体都可以用于流式分析，质量相当好。
文章中涉及到的抗体搜索网站的使用方法：
Biocompare: http://www.biocompare.com/ 打开网页后在Search Product下的文本框内输入你需要的抗体的抗原名称，in后面的下拉菜单中选择'Antibodies'，再search就行了。如果出来很多结果，可以用application进行限定过滤，如果出来的结果不是很多，那就可以一一查看，推荐直接访问每一条的Supplier Page，即可访问供货商的产品页面获得更多信息。
Antibodyresource：http://www.antibodyresource.com 打开网页后直接在顶端的search box里输入你需要的抗体的抗原名称，回车后即可返回搜索结果，也可以用application以及其它选项对结果进行过滤。如果配有实验结果数据的，会出现相关的图标（但此处图标不是缩略图）。
Labome： http://www.labome.com 打开网页后直接在顶端的search box里输入你需要的抗体的抗原名称，回车后返回系统生成的一系列关键词，选有antibody的那一个关键词即可返回抗体搜索结果.
Antibodypeida: http://www.antibodypedia.com 打开网页后直接在顶端的search box里输入你需要的抗体的抗原名称，回车后下方即返回搜索结果，界面清晰明了，但是收录的抗体公司相对较少。
常用的抗体公司网站：
中外合资：
Proteintech：http://www.ptgcn.com/
Bioworld：http://www.bioworlde.com/
SAB：http://www.sabbiotech.com/
国外：
Abcam：http://www.abcam.com/
Sigma：http://www.sigmaaldrich.com/
Cell Signaling：http://www.cellsignal.com/
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