（一）基本原理
虽然制作一个观察玻片是非常容易的，但是对于初学者来说想要在该玻片中找到目标菌还是有一定难度的。这主要是因为细菌常常完全无色或透明，一般又非常地小，所以对于初学者来说除非对光圈等进行很精细地调节，否则很难观察到目标菌。所以对于第一次观察细菌的人来说，进行负染色或者叫背景染色就十分重要。负染色是观察细菌的最简单的染色方法之一，该方法还常用于原生动物和水藻的观察。该方法就是将微生物与苯胺黑或者息india墨水混合，再将混合物覆盖于载玻片表面，需要指出的是苯胺黑的染色效果远远好于india墨水。由于这两种天然黑色染料不能渗入微生物，所以使得透明的微生物个体在黑色的背景下很容易观察。
虽然该方法很有局限性，但是该方法对于细菌形态学和细菌大小的观察很有用。由于该方法不需加热不会导致细菌缩水，所以相比较其他方法该方法对细菌大小的测定更加精确。
(二)染色方法
负染色可以有三种不同的操作方法：
(1)在一个载玻片上将微生物与一滴苯胺黑混合，用另外的载玻片将混合物均匀的覆盖于原来的载玻片上(见图5-3)。这是三种方法中最常用的。该方法的目的是使混合物在载玻片上一边厚一边薄，在厚与薄中间的区域就是最佳的观察区域。
a)取培养物与黑色染色液混合
b)取另一载玻片将混合物推至载玻片一边
c)用载玻片将混合物推匀
d)推成一边厚一边薄
(2)第二种方法是用一接种环苯胺黑与微生物混合，用接种针在载玻片的中央将混合物延伸很小的区域(见图5-4)。
(3)第三种方法又称Woeste -Demchick法，该方法要用黑色油毡记号笔涂抹常规的载玻片，使用该方法时一定要事先准备好涂抹好的载玻片。该方法并不常用。
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