·论著·
成争艳1 雷龙春1 杨旭峰1 陈星2
(四川省人民医院城东病区 1.病理科；2. 胸外科，四川 成都 610101)
【摘要】目的 研究促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)和整合素β1(Intβ1)在食管鳞状细胞癌中的表达水平及差异，探讨其临床意义。方法 采用免疫组织化学法检测40例食管癌患者食管癌组织，癌旁组织和正常组织中PRL-3 和Intβ1 蛋白的表达水平，利用Image Pro6.0图像分析系统计算平均光密度值(MOD)，分析其表达的差异。结果 PRL-3和Intβ1的表达，癌组织中均高于癌旁组织，正常组织中表达最低(P<0.05)。结论 prl-3="">
【关键词】食管鳞状细胞癌；免疫组化；促肝细胞再生磷酸酶3；整合素β1
食管癌发病率在世界范围内居第8位[1]，死亡率居第6位[2]。我国是食管癌高发地区, 其发病率和死亡率均明显高于世界平均水平, 且无性别差异[3-4]。在集中高发区，食管癌标准化死亡率在10.34/10 万～78.32/10万,占高发县全部恶性肿瘤死亡的11.69%～42.61%, 居城市和农村恶性肿瘤死亡率的第4位[5]。但是其发病的分子机制仍不清楚[6]。促肝细胞再生磷酸酶-3(phosphatase of regenerating liver-3, PRL-3)是一种蛋白酪氨酸磷酸酶，具有促进细胞的生长、浸润与迁移的作用[7]，Saha等[8]发现PRL-3与癌转移密切相关。整合素β1(integrinβ1, Intβ1) 在肿瘤组织的浸润转移中因为可使细胞间的黏附能力下降而发挥作用[9]。目前PRL-3及Intβ1与食管癌的关系研究较少。本实验通过检测PRL-3和Intβ1在食管癌的表达，探讨其关系，为临床提供判断食管癌浸润和转移的客观有效指标。
1.1 临床资料 收集四川省人民医院城东病区2012年1月至2014年12月因食管鳞状细胞癌手术切除治疗的病理标本共40例。取癌组织及相应的癌旁组织(距肿瘤边缘1.0 cm)、正常组织(距肿瘤边缘5.0 cm)作为对照，所有标本均由病理诊断医师HE切片，明确病理诊断。所有患者术前均未行放疗或化疗。
1.2 主要试剂 PRL-3单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)； Intβ1单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)。
1.3 实验方法 所有标本均经10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，4 μm切片，按照免疫组化二步法检测试剂盒说明进行操作，测定PRL-3和 Intβ1的表达。用0.01 mol/L PBS(pH7.4)代替一抗作为阴性对照。
1.4 结果判定 PRL-3 及Intβ1以胞质中出现棕黄色信号为阳性细胞。每张切片高倍镜下随机选取5～6个视野拍照，采用Image Pro6.0图像分析系统分析测量平均光密度值(mean optical density，MOD)，进行各组比较。
1.5 统计学方法 采用SPSS 17.0统计软件对数据进行分析，多组间均数比较采用单因素方差分析(ANOVA)，用Pearson分析相关性，P<>
2.1 PRL-3的蛋白表达情况和MOD比较 免疫组化检测40例人食管癌组织、癌旁组织及正常组织中PRL-3表达情况结果显示，食管癌组织中PRL-3有27例(67.5% )阳性(图1A),而相应的40例癌旁组织有15例(37.5%)阳性表达，且阳性细胞均集中在不典型增生区域的细胞质中(图1B)；正常组织中PRL-3有13例(32.5%)散在阳性(图1C)。MOD结果显示，PRL-3表达总趋势为癌组织>癌旁组织>正常组织，差异有统计学意义(P<>
图1 不同组织中PRL-3蛋白表达情况(×400)
Figure 1 Expression of PRL-3 in cancer tissues
注：A：癌组织；B：癌旁组织；C：正常组织
表1 不同组织中PRL-3蛋白MOD比较
Table 1 The protein expressions of PRL-3
分组nPRL-3癌组织 400.185±0.004②癌旁组织400.179±0.006①正常组织400.173±0.004
注：与正常组比较，①P<0.05，>P<>
2.2 Intβ1的蛋白表达情况和MOD比较 食管癌组织中Intβ1有29例(72.5%)阳性(图2A)，而相应的40例癌旁组织有16例(40%)阳性表达(图2B)，正常组织中有15例(37.5%)散在阳性表达(图3C)。MOD结果显示，Intβ1表达总趋势为癌组织>癌旁组织>正常组织，差异有统计学意义(P<>
2.3 PRL-3和Intβ1表达的相关性 癌组织和癌旁组织中PRL-3 和Intβ1表达呈正相关关系(r=0.412，P=0.024；r=0.446，P=0.049)；在正常组织中PRL-3和Intβ1表达无相关性(r=-0.137，P=0.563)。
图2 不同组织中Intβ1蛋白表达情况(×400)
Figure 2 Expression of intβ1 in cancer tissues
注：A：癌组织；B：癌旁组织；C：正常组织
表2 不同组织中Intβ1蛋白MOD比较
Table 2 The protein expressions of
分组nIntβ1癌组织 400.187±0.003②癌旁组织400.180±0.004①正常组织400.179±0.004
注：与正常组比较,①P<>P<>
肝再生磷酸酶家族包含3个亚型，即PRL-1、PRL-2、 PRL-3，编码基因分别位于染色体6q12、1p35、8q24.3上。其是一类独特的核蛋白酪氨酸磷酸酶，含有完全相同的蛋白质酪氨酸磷酸酶催化位点序列。研究表明PRLs，特别是PRL-3在多种肿瘤的发生、增殖及侵袭中起作用[10-11]。目前已发现PRL-3在乳腺癌、卵巢癌、结直肠癌及胃癌等恶性肿瘤中表达升高，同时发现表达水平越高，肿瘤恶性程度越高，淋巴结及其它转移灶的表达水平明显高于原发灶及正常组织[12-14]。Guo等[15] 将PRL-3高表达的CHO细胞注入小鼠体内，全部诱导出形成肺转移瘤，并且有20%的小鼠合并出现肝转移瘤，而注入PRL-3突变失活的对照组小鼠则无转移性肿瘤形成。本实验通过免疫组化检测了食管鳞状细胞癌及癌旁组织，正常食管黏膜组织中PRL-3的表达情况，结果表明在食管鳞状细胞癌中PRL-3 蛋白的表达明显高于癌旁组织及正常组织，说明高表达的PRL-3 可能在食管鳞状细胞癌发生中起作用。
整合素作为粘附分子五大家族成员之一，它可以调节细胞之间及细胞与胞外基质(extracellular matarix, ECM)的粘附而发挥作用[16]。Intβ1是介导ECM信号的主要细胞表面受体，其与配体结合后有促进细胞黏附、增殖和迁移等作用。研究表明, Intβ1表达升高除了影响肿瘤细胞与基质的粘附，从而使肿瘤细胞更具有侵袭性，Intβ1还可以影响肿瘤细胞ERK,AKT等基因的表达，从而与肿瘤细胞的增殖、基因转导、凋亡等生物学行为有密切关系[17-19]。本实验根据蛋白水平检测Intβ1的表达，结果表明，在食管鳞状细胞癌中Intβ1 蛋白在原发灶中的表达明显高于癌旁组织及正常组织，证明Intβ1的高表达可能与食管鳞状细胞癌黏附，侵袭增强有关。
PRL-3和Intβ1将各种细胞外信号传递至细胞内主要依靠MAPK信号通路 [14]；有研究显示，PRL-3通过Intβ1-ERK1/2-MMP-2信号传导通路促进Intβ1的表达[20]。因此，其共同作用下促使肿瘤组织的侵袭性、活动性和转移能力增强。本实验结果显示，在蛋白表达水平癌组织和癌旁组织中PRL-3 和Intβ1表达均呈正相关，说明其机制PRL-3可能通过活化通路提高Intβ1表达，从而增强细胞间质侵袭和转移的能力。
在食管鳞状细胞癌中PRL-3和Intβ1的高表达，联合检测可能作为肿瘤标志物来判断食管鳞状细胞癌的发生发展、浸润和转移，也有望成为治疗肿瘤的靶点。
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CHENG Zhengyan1,LEI Longchun1,YANG Xufeng1,et al
(1. Department of Pathology,Easten District,Sichuan Academy of Medical Sciences&Sichuan Provincial>People′s Hospital, Chengdu 610101, China;2. Department of Thoracic Surgery, Easten District, Sichuan Academy of Medical Sciences&Sichuan ProvincialPeople′s Hospital, Chengdu 610101,China)
【Abstract】Objective To study expression levels and differences of phosphatase of regenerating liver-3 and integrinβ1 protein in esophageal squamous cell carcinoma, and explore its clinical significance. Methods PRL-3 and Intβ1 expression level of esophageal cancer tissue, tissue adjacent to carcinoma and normal tissues were detected by analysis of the differences in expression. Results The protein expressions of PRL-3 and Intβ1 in esophageal squamous cell carcinoma were higher than that in the adjacent non-tumor tissues. The protein expressions of PRL-3 and Intβ1 were lowest in normal esophageal tissues. Conclusion PRL-3 and Intβ1 may be used as tumor markers in progression, invasion and metastasis of esophageal squamous cell carcinoma.
【Key words】Esophageal squamous cell carcinoma; Immunohistochemistry; Phosphatase of regenerating liver-3; Integrin β1
【中图分类号】R 365；R 735.1
【文献标志码】A
doi：10.3969/j.issn.1672-3511.2016.11.005
(收稿日期：2016-04-06；编辑： 张文秀)
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