徐 红1，王德录1，杜文杰2
（1.铜陵市妇幼保健院检验科 安徽 铜陵 244000；2. 铜陵市妇幼保健院病理科，安徽 铜陵 244000）
摘要：目的 研究高危型人乳头瘤病毒（HPV）在宫颈疾病筛查中的临床意义。方法 采用聚合酶链反应（PCR）检测23种HPV亚型，并运用新柏氏液基细胞学试验（TCT）检测其病理类型。将受检妇女按年龄划分为6个阶段，根据检测结果计算检出率。结果 在1 144名受检妇女中共检出HPV感染患者698例，感染率为61.0%。23种亚型均被检出，感染率最高的亚型是高危52型（16.5%），其次是16型（14.5%）和58型（7.1%）。单一亚型感染率为36.5%，多重感染为24.5%。≤25岁、26～35岁、36～45岁、46～55岁、＞55岁年龄段HPV检出率分别为56.4%、61.8%、59.9%、63.3%、57.4%。结论 铜陵市女性HPV感染以单一感染和高危感染为主，感染率最高的亚型为高危52型。不同年龄段妇女的感染率略有不同。
关键词：人乳头瘤病毒； 亚型； 宫颈疾病
宫颈病变是女性的常见疾病之一，包括宫颈炎、宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）及宫颈癌。宫颈癌是全球女性常见的生殖系统恶性肿瘤之一，每年大约有47.1万例新发病例，其中21.5万例为死亡病例。每年在新发病例中有80%在发展中国家，我国每年约有13万例新发病例［1］。有研究证明，人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染是宫颈癌及癌前病变的主要危险因素［2］。根据致病性，HPV亚型可分为低危型和高危型，低危型包括HPV 6、11、42、43和81型，高危型包括HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82和83型，这23种型别在肿瘤和病变的组织中均可检测到。本研究分析了1 144名受检妇女HPV感染情况、亚型分布及其与病理改变的相关性。
一、一般资料
选择铜陵市妇幼保健院2014年5月至2015年10月门诊或住院行HPV DNA妇科检查者共1 144名，年龄为19～75岁。
二、标本采集
医师使用扩阴器暴露宫颈，将宫颈刷放于宫颈口轻轻转动宫颈刷，顺时针旋转5圈后取出，置于装有细胞保存液的取样管中，盖上瓶盖立即送检。不能及时检测的标本于4 ℃冰箱冷藏保存，长期保存标本置-20 ℃冰箱中冷冻。
三、主要试剂与仪器
HPV DNA检测试剂盒（深圳亚能生物工程有限公司）。GeneLight全自动医用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）分析仪（厦门安普利生物工程有限公司）。YN-H16恒温杂交仪（深圳亚能生物有限公司）。
四、HPV亚型检测
1.DNA提取 提取含宫颈脱落细胞的混悬液0.5 mL，12 281×g离心10 min去上清后，按试剂说明书提取DNA。
2.PCR扩增 取出反应管，低速离心数秒，做好标记，分别加入已提取的待测DNA标本5 μL，阴、阳性质控品同步处理，加样量均为5 μL，反应总量为25 μL，低速离心数秒。PCR扩增条件为：50 ℃ 15 min；95 ℃变性10 min；94 ℃ 30 s，42 ℃ 90 s，72 ℃ 30 s，循环40次；72 ℃延伸5 min。
3.杂交及结果判读 采用中国亚能生物技术有限公司的 HPV分型检测试剂盒，按照说明书进行操作。膜上出现清晰可见的蓝紫色圆点者为阳性，不同位点代表不同亚型。其中低危型有6、11、42、43和81型，高危型有16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82和83型，另设阴、阳性对照。
4.新柏氏液基细胞学试验（thinprep cytologic test，TCT）检测 采集宫颈脱落上皮细胞标本后，根据ThinPrep液基细胞学检测仪（美国新柏氏公司）的操作规范，TCT制片染色后，由2名细胞病理学医师分别阅片，结果无法确定者再请上级医生阅片确定结果。采用2001年国际癌症协会伯塞斯达系统报告染色观察结果，即正常范围（within normal limits，WNL）、无明确意义的改变（atypical squamous cells of undertermined significance，ASC-US）、鳞状上皮内低度病变（low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL）、鳞状上皮内高度病变（high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL）、鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）、腺上皮不正常为意义不明的不典型腺细胞（atypical glandular cell，AGC）和腺癌［3］。根据子宫颈细胞学Bethesda报告系统（the Bethesda system for reporting cervical cytology，TBS）标准LSIL即CINⅠ，HSIL包括CINⅡ和CINⅢ。细胞学LSIL以上病变诊断为阳性。
病理诊断标准：TCT结果为ASC-US及以上级别者，行阴道镜检查，采集宫颈可疑病变标本活检。根据组织学的标准，宫颈病变的病理结果报告分为：正常、炎性反应，CINⅠ、CINⅡ和CINⅢ，宫颈浸润癌和其他。CINⅡ级及以上病变程度为宫颈高度病变标准。
五、统计学方法
采用 SPSS 18.0软件进行数据的统计，所有数据均采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
一、 HPV感染率
1 144名受检妇女中，HPV阳性698例，感染率为61.0%，其中单一高危型感染366例（32.0%），单一低危型感染51例（4.5%），高危-高危型混合感染188例（16.4%），高危-低危型混合感染93例（8.1%）。单一亚型感染率为36.5%（417/1 144），多重感染率为24.5%（281/1 144）。23种HPV型别均被检出。HPV感染率最高的为52型，其次是16和58型，感染率分别为16.5%（189/1 144）、14.5%（166/1 144）和7.1%（81/1 144），较少见的型别为73、82和83型，阳性率均不到1%。在281例多重感染者中，二重感染为192例，二重以上感染89例，且主要为HPV52型合并其他亚型感染（15.8%）。
二、HPV感染患者的年龄分布
1 144名受检女性6个年龄段的HPV感染率见表1。筛查人群主要在26～55岁，≤25岁者HPV感染率最低（56.4%），46～55岁者HPV感染率最高（63.3%）。各年龄段HPV感染率差异无统计学意义（P＞0.05 ）。
表 1 HPV感染患者年龄分布
年龄（岁）例数HPV阳性例数感染率（%）≤25392256.4 26～3525115561.8 36～4548128859.9 46～5531920263.3＞55543157.4
三、HPV感染与宫颈病变程度的相关性
对698例 HPV阳性者中的499例进行TCT检测，其中正常或炎症者301例（单一亚型感染188例，多重感染113例。感染的型别以52和16型为主），ASC-US134例，LSIL58例，HSIL6例。TCT筛查结果LSIL以上病变诊断为阳性，则TCT结果阳性64例，HPV阳性与TCT阳性的符合率为12.8%。对698例 HPV阳性者中的251例进行阴道镜检测，其中正常或炎症109例，CINⅠ53例、CINⅡ45例和CINⅢ40例，宫颈浸润癌4例，HPV阳性与病理阳性的符合率为56.6%。698例 HPV阳性者有167例同时进行了TCT和阴道镜检测，感染的型别也以52和16型为主。
宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，在全球妇女恶性肿瘤中位居第2位［4-5］。近年来，宫颈癌的发病率呈上升趋势，有数据显示宫颈癌占所有女性恶性肿瘤的25%［6］。HPV是1种DNA病毒，对人体的皮肤和黏膜具有高度的亲和力［7］。目前的研究认为，HPV感染是宫颈疾病的主要诱因。HPV检测可作为宫颈疾病的筛查手段，其敏感性优于细胞学涂片，且为直接针对病因的检测，有助于对女性进行不同危险类别的分层。
本研究分析了安徽省铜陵市妇女中6个年龄段的HPV感染情况及不同等级的宫颈病变情况。结果显示，1 144名受检妇女HPV阳性698例（感染率61.0%），明显高于全国平均水平（14.20%）［8］，其高危型明显高于低危型。HPV阳性感染率高的原因可能是铜陵市为中小城市，HPV检测费用偏高，有些患者意识不到检查的必要性，只有病情相对较重的患者才会听取医生意见作进一步检测。铜陵市妇女感染HPV阳性率居前3位的型别分别为52、16和58型，与国内报道的大部分区域基本相同［9］。对于年龄与HPV感染的关系，有研究称在年轻和年长女性中会出现2个峰值［10］，本研究结果中，HPV感染率在46～55岁年龄段最高（63.3%），≤25岁女性HPV感染率降低至56.4%，但各年龄段感染率差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究中，单一感染患者所占比例为36.5%（417/1 144），而多重感染患者所占比例为24.5%（281/1 144），在多重感染者中，以二重感染最为常见且主要为HPV52型合并其他类型感染。病变程度是否与多重感染具有相关性，仍有待进一步研究。
宫颈癌病理发展过程可简要概括为HPV感染—持续感染—宫颈细胞分化—宫颈细胞高度病变—宫颈癌。宫颈癌发生的必要条件是持续的HPV感染［11-12］。本研究中698例HPV阳性者有499例进行TCT检测，TCT结果阳性64例，二者的符合率为12.8%。698例HPV阳性者有251例进行阴道镜检测，HPV阳性与病理阳性二者符合率为56.6%。目前用TCT方法能采集到宫颈癌细胞，制作时去除了宫颈黏液和炎性细胞，其清晰度与检出率均明显高于常规的宫颈细胞涂片，但同时也发现TCT对HPV诊断有一定的漏诊率［13］。HPV检测的敏感性高于TCT检测，而特异性低于TCT，所以HPV可以筛查出高危人群，减少漏诊率，同时对持续HPV感染的患者行TCT检测，对判断宫颈病变趋势，积极处理癌前病变有重要作用。目前市场上已有HPV疫苗，但仅针对几个型别，且费用昂贵，限制了其推广应用。
HPV感染是导致患者发生宫颈癌和宫颈癌前病变的重要原因，在诊断宫颈炎、宫颈癌及宫颈癌前病变时，可将HPV作为常规检测指标［14］。流行病学调查结果显示，女性人群中HPV感染发生率可＞20%［15］，早期行HPV DNA检测对发现宫颈癌前病变、判断预后、早期选择治疗方案、减少疾病发生率和死亡率等均有十分重要的意义。但HPV型别在不同国家和地区宫颈癌妇女的表达存在显著差异［16］。
综上所述，HPV和TCT为有效的宫颈癌筛查手段，组织病理学检测可进一步区分宫颈病变程度，应根据患者的实际情况选择有针对性的筛查方案，配合阴道镜检查行宫颈活组织病理检查，有利于宫颈病变的早诊断、早治疗，对宫颈病变的筛查具有重要的临床意义。
参考文献
［1］朱滔，朱笕青，高永良. 宫颈癌诊治现状与进展［J］.中国肿瘤，2013，22（12）：970-974.
［2］SONG SH，LEE JK，SEOK OS，et a1. The relationship between cytokines and HPV-16，HPV-16 E6，E7，and high-risk HPV viral load in the uterine cervix［J］. Gynecol Oncol，2007，104（3）：732-738.
［3］谢幸，苟文丽. 妇产科学［M］. 8版. 北京：人民卫生出版社，2013：409.
［4］ 宋丽君，陈春丽，罗淑桂.HPV基因分型检测与宫颈病变的相关性研究［J］. 检验医学，2012，27（3）：163-166.
［5］王妍，黄钦贤，林章礼，等. 汕头地区女性 HPV的感染状况回顾［J］. 现代检验医学杂志，2015，30（4）：122-124.
［6］程娇影，卞美璐，李敏，等. 不同子宫颈癌筛查方案应用价值评价［J］. 中国妇产科临床杂志，2012，13（2）：115-118.
［7］SCHERPENISSE M，MOLLERS M，SCHEPP RM，et al. Detection of systemic and mucosal HPV-specific IgG and IgA antibodies in adolescent girls one and two years after HPV vaccination［J］. Hum Vaccin Immunother，2013，9（2）：314-321.
［8］赵戴君，龚向真，胡争光，等. 上海市社区子宫颈人乳头瘤病毒感染现况及危险因素研究［J］. 现代预防医学，2010，37（10）：1867-1870.
［9］胡兴文. 武汉地区妇女宫颈感染人乳头瘤病毒基因型分析［J］. 实用医技杂志，2007，14（14）：1830-1832.
［10］CASTLE PE，SCHIFFMAN M，HERRERO RE，et al. A prospective study of age trends in cervical human papillomavirus acquisition and persistence in Guanacaste，Costa Rica［J］. J Infect Dis，2005，191（11）：1808-1816.
［11］乌兰娜，吴瑞芳，周艳秋，等. 人乳头瘤病毒基因亚型与宫颈病变的关系［J］. 中国妇产科临床杂志，2005，6（5）：346-350 .
［12］徐大红，方雅琴，高蜀君. TCT联合HR-HPV检测在宫颈病变筛查中的价值［J］. 浙江临床医学，2015，17（5）：723-724.
［13］PATIL JB，KIM J，JAYAPRAKASHA GK. Berberine induces apoptosis in breast cancer cells（MCF-7） through mitochondrial-dependent pathway［J］. Eur J Pharmacol，2010，645（1-3）：70-78.
［14］王桂兴. HPV在宫颈炎、宫颈癌前病变、宫颈癌中的分布情况及其临床意义研究［J］. 中国现代药物应用，2015，9（13）：60-62.
［15］张丽娜，周蓓蓓，陈昕华，等.区域性人乳头状瘤病毒基因型别检测临床研究［J］. 中国妇幼保健，2010，25（16）：2216-2218.
Analysis on the results of human papilloma virus determination
XU Hong1，WANG Delu1，DU Wenjie2.
（1. Department of Clinical Laboratory，Tongling Maternity and Child Healthcare Hospital，Tongling 244000，Anhui，China；2. Department of Pathology，Tongling Maternity and Child Healthcare Hospital，Tongling 244000，Anhui，China）
Abstract：Objective To investigate high-risk human papilloma virus（HPV） in screening of cervical diseases. Methods By polymerase chain reaction（PCR），23 kinds of HPV subtypes were determined，and pathological analysis was performed by thinprep cytologic test（TCT）. Subjects were classified into 6 groups according to ages. The determination rates were calculated. Results A total of 1 144 specimens were collected. There were 698 cases with HPV infections，and the infection rate was 61.0%. The 23 subtypes had been determined. The subtype with the highest infection rate was high-risk type 52（16.5%），followed by type 16（14.5%） and type 58（7.1%）. Single subtype infection rate was 36.5%，and multiple infection rate was 24.5%. The determination rates of ≤25，26-35，36-45，46-55 and ＞55 years old groups were 56.4%，61.8%，59.9%，63.3% and 57.4%，respectively. Conclusions HPV infections in Tongling are mainly single infection and high-risk infection，and the subtype with the highest infection rate is high-risk type 52. The infection rates with different ages are slightly different.
Key words：Human papilloma virus；Subtypes；Cervical diseases
文章编号：1673-8640（2016）09-0770-04
中图分类号：R446. 1
文献标志码：A DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2016.09.008
（收稿日期：2016-04-20）
（本文编辑：范基农）
作者简介：徐 红，女，1980年生，学士，主管技师，主要从事临床检验工作。
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