黄芪-莪术-重楼配伍降低血管内皮通透性抑制结肠癌转移作用的研究

刘甜甜¹，卞勇^1,2，关汉卿¹，梁研¹，郭文晖¹，余倩慧¹，唐德才¹

(1.南京中医药大学中医学院·中西医结合学院，江苏 南京 210023；2.南京中医药大学实验动物中心，江苏 南京 210023)

基金项目：国家自然科学基金面上项目（81873021）；江苏省中医药科技发展专项（2020ZX01）；江苏省研究生科研与实践创新计划项目（KYCX21_1764）

通信作者：唐德才，男，教授，主要从事中药药性、配伍机制及应用研究，E-mail：[e-mail]

摘要

目的：观察黄芪-莪术-重楼配伍对人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)通透性与细胞紧密连接的影响及其抑制人结肠癌细胞系(HCT116)血行转移的作用机制。方法：制备空白对照血清和黄芪-莪术-重楼配伍含药血清。构建HUVEC-HCT116共培养体系，实验分为共培养模型组，黄芪-莪术-重楼配伍低、中、高剂量(2.1、4.2、8.4 g·kg^-1)组。另设HUVEC单培养对照组。CCK-8法检测细胞增殖;FITC-dextran法、Transwell法检测HUVEC通透性与HCT116跨内皮迁移数量;免疫荧光法检测ZO-1蛋白的分布;Western blot法检测RhoA、ROCK及ZO-1蛋白表达量。结果：黄芪-莪术-重楼配伍不同剂量含药血清处理48 h后，HUVEC增殖均显著减少(P<0.01)。与单培养对照组相比，共培养模型组FITC-dextran渗透量、跨越内皮迁移的HCT116细胞数量明显增加(P<0.01)，ZO-1蛋白表达下调(P<0.01)，RhoA、ROCK蛋白表达上调(P<0.01);与共培养模型组相比，黄芪-莪术-重楼配伍各剂量组FITC-Dextran渗透量、跨越内皮迁移的HCT116细胞数量均减少(P<0.05)，ZO-1蛋白表达上调(P<0.05)，RhoA、ROCK蛋白表达下调(P<0.05)，且呈现剂量依赖性。结论：黄芪-莪术-重楼配伍可能通过抑制RhoA/ROCK通路调控HUVEC紧密连接相关蛋白ZO-1的表达，降低血管内皮通透性，进而抑制结肠癌血行转移。

关键词：黄芪-莪术-重楼配伍;结肠癌;血管通透;共培养;紧密连接

引文格式

刘甜甜，卞勇，关汉卿，等. 黄芪-莪术-重楼配伍降低血管内皮通透性抑制结肠癌转移作用的研究[J]. 南京中医药大学学报，2022，38(2)：115-121.

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研究背景

转移是恶性肿瘤最显著的生物学特征，也是导致患者死亡的主要原因。血管内皮屏障的通透性与肿瘤转移密切相关，肿瘤细胞血行转移过程中需要两次跨越血管屏障(内渗、外渗)进出血液循环系统才能实现远端转移，血管内皮通透性的增加为肿瘤跨越血管内皮转移提供了有利条件。紧密连接是由跨膜蛋白[闭合蛋白(Claudin)、咬合蛋白(Occludin)、连接黏附分子(JAM)]、胞质附着蛋白(Zonula occluden，ZO)以及细胞骨架(微丝)等共同组成的复合体，是维持血管通透性和机械屏障的重要结构，也是阻碍肿瘤细胞跨血管内皮的重要屏障。研究表明，转移性肿瘤细胞能通过分泌外泌体、生长因子、基质金属蛋白酶等多种因子抑制血管内皮ZO-1、Occludin等紧密连接蛋白的表达，破坏血管内皮间紧密连接，增加血管通透性，进而实现远端转移。

黄芪、莪术、重楼分别是补气药、活血药、解毒药的代表，常用于肿瘤的治疗。含'黄芪-莪术-重楼'配伍的复方如芪术蚤复方、益气化瘀解毒方、健脾消癌方等均在临床被用于抗肿瘤转移，且能显著抑制肿瘤术后患者的复发转移率，提高生存率。课题组前期研究也表明，黄芪-莪术-重楼配伍可以抑制结肠癌原位移植瘤的生长与转移;黄芪-莪术药对配伍不仅可以抑制结肠癌细胞的黏附与迁移，还可抑制肿瘤血管新生，改善肿瘤血管结构，促进肿瘤血管正常化新生。因此，本研究拟观察黄芪-莪术-重楼配伍在人结肠癌细胞系HCT116跨血管内皮迁移过程中对血管间紧密连接以及血管通透性的影响，探究黄芪-莪术-重楼配伍抑制HCT116细胞血行转移的作用机制，为黄芪-莪术-重楼配伍抗肿瘤转移的临床应用提供依据。

作者简介

唐德才，教授，博士生导师，国家中医药管理局“十二五”重点学科带头人，中华中医药学会临床中药学分会副主任委员，国家执业中药师、执业中医师考试命审题专家，国家自然资金项目评审专家，《中华人民共和国药典》用药须知编写组专家组成员。长期从事中医内科临床工作，擅长治疗消化系统、呼吸系统疾病，对肿瘤、内分泌失调、糖尿病、痛风、关节炎、肾炎等疾病有较好疗效。主持国家自然科学基金课题4项，省局课题、项目多项。“十三五”中西医结合专业规划教材《中药学》和“十三五”规划教材中医专业《中药学》、中药专业《临床中药学》主编。主编《现代临床中药学》《英汉对照中药学》《补益药的合理应用》等8部学术专著，撰写发表中文核心学术论文80余篇，SCI论文6篇。