反式脂肪酸的分析方法

不同来源反式脂肪酸的组成、结构和复杂程度有所差异，因此其具体测定方案也不同。

一、总量

反式脂肪酸总量测定较为简单，可用红外光谱法（IR）。其原理是非共轭反式双键在红外966 cm-1处有最大吸收峰，峰面积与浓度呈线性。IR法适用于测定5%以上反式脂肪酸的油样。共轭双键（最大吸收在950 -990 cm-1）、游离的羧基和甘油羟基（最大吸收在935 cm-1）会干扰测定。衰减全反射傅里叶变换红外光谱法（ATR-FTIR）及负二阶导数法能解决这些困难并测到含量<1%的反式脂肪酸。

气相色谱法（GC）也可满足测试需求。

二、人工反式脂肪酸含量

GC通过极性毛细管柱将顺、反式脂肪酸分离并测定，是我国国标和AOCS标准中使用较多的方法。

人工反式脂肪酸的组成相对简单，一般采用涂有高极性固定相的长100m的氰丙基硅氧烷柱，即CPS毛细管柱（SP 2560和CP Sil 88等），出峰顺序为饱和、单不饱和、多不饱和，反式异构体在顺式异构体前流出，图1为部分氢化植物的GC分离结果。

图1 部分氢化植物油的GC分离图

近几年发展起来的离子液体色谱柱进一步改进了分离效果，所选的离子液体柱为SLB-IL111、Supelco Inc等。与SP-2560柱相比，SLB-IL111的分离度提高，特别是对单不饱和脂肪酸和共轭亚油酸的顺反异构体。

三、天然反式脂肪酸含量

天然反式脂肪酸，尤其是乳脂的天然反式脂肪酸组成复杂，共轭反式脂肪酸成分较多，且不好分离。建议用Ag+-TLC或Ag+-HPLC预分离，再经GC离子液体色谱柱检测，以获得更全面的分离效果。

Ag+对双键的络合强度随双键数而增强，随链长而减弱，据此可分析脂肪酸的顺、反异构体。

Ag+-TLC将顺、反式脂肪酸分离成不同谱带，用溶剂萃取后再定量，但此法操作要求高，一般仅作为粗略的分析手段。

用Ag+-HPLC 替代Ag+-TLC直接用于顺、反式不饱和脂肪酸的分离是近几年发展起来的方法。图2是Ag+-HPLC将乳脂脂肪酸分离后再分别用200 m的SLB-IL111毛细管柱进行检测的效果，可以实现反式脂肪酸的完全分离。

图2  毛细管柱分离由Ag+-HPLC制备的乳脂脂肪酸部分图谱（保留时间28.5min-38.5min），从下到上依次为：未分馏乳脂、SFA、t-MUFA、c-MUFA、PUFA、脂肪酸甲酯标准品GLC-463

国内和国际权威机构制定了适用于不同来源反式脂肪酸的标准方法（表1）。

表1  适用于不同来源反式脂肪酸测定的国内外标准方法

参考文献

[1] Wolff R L. Content and distribution of trans-18:1 acids in ruminant milk and meat fats. Their importance in European diets and their effect on human milk [J]. Journal of the American Oil Chemists’ Society, 1995, 72(3):259-272.

[2] Precht D. Comparative studies on individual isomeric 18:1 acids in cow, goat, and ewe milk fats by low-temperature high-resolution capillary gas-liquid chromatography [J]. Lipids, 2001, 36(8):827-832.

 稿件来源：食用油营养与安全科技创新团队