HAT培养基也就是指含有这三种物质的细胞培养基。对￡具有合成DNA原料的核苷酸的形成上，在细胞内具有起始合成途径(denovopathway)和中间合成途径(salvagepa-th■way)。中间合成途径包括:通过HGPRT的催化作用把次黄嘌呤转化成次黄嘌呤核苷-磷酸(IMP)，通过TK的催化把胸腺嘧啶核苷转化成脱氧胸腺嘧啶核苷-磷酸(dTMP)，再进一步合成核酸。由于氨基蝶呤可阻碍起始合成途径，所以培养基中含有它时，细胞便只有中间合成途径，所以必须供给核苷酸。至于缺失中间合成途径的细胞，可失去增殖能力臻于死亡。根据这一点，不仅把混存于细胞群中的正常细胞，通过试管内培养进行选择，例如嘌呤的中间合成途径缺失株和嘧啶的中间合成途径缺失株，由于可以互补，所以两者的杂种细胞，即使在氨基蝶呤的存在条件下也可以增殖。在这种情况下，利用HAT培养基可对杂种细胞进行选择。次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷可作为中间合成途径的原料而进行添加。