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尽管免疫学技术已取得很大的进展，但令人吃惊的是在人类疫苗中还主要依赖铝为基础的复合物作为主要的佐剂。疫苗佐剂(Adjuvant)是能够非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答、发挥辅助作用的一类物质。随着疫苗产业的迅速发展，除了传统的铝佐剂和最新在流感疫苗获批的MF59佐剂之外，越来越多的新佐剂受到关注。但其作用机制和安全、有效性评价较为复杂，对监管者、佐剂研发者和使用者均提出一系列挑战。小编结合自己的专业理解，在网上找到两个相关的技术指导原则和一本书籍，分享如下。
WHO：Guideline for Nonclinical Evaluation of Adjuvant Vaccines
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该指导原则的适用范围
该指导原则主要适用于为传染性疾病防治而研发的佐剂疫苗，包括预防性疫苗和治疗性疫苗，但不包括治疗非传染性疾病（如癌症和过敏）的治疗性疫苗。与会专家一致同意：由于抗原、佐剂和抗原/佐剂制剂的复杂性，佐剂本身不会得到授权，其必须作为某种含佐剂疫苗的组分去申请授权，而且每一种新的含佐剂疫苗都应当视为一种新的独立制品，需要进行适当的理化特性、非临床和临床评价才可获批。但从相似产品获得的已有数据可为非临床和临床研究提供重要指导信息。
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候选佐剂和含佐剂疫苗所需的生产和质控信息
为了确保抗原和佐剂具有合适的质量，生产控制（如质量、含量、纯度及效力等）及其控制范围在研究阶段和商业化生产阶段、以及不同临床实验阶段均不尽相同。在早期临床实验中，应开发合适的分析方法并予标准化。通常包括鉴定和定量检测一种复杂的含佐剂疫苗中的各种组分（包括抗原、佐剂、其他重要组分以及疫苗中的添加剂）、评价与佐剂活性相关的特性（如外观、颗粒大小和颗粒大小分布、聚集物的存在、抗原吸附的完全性以及pH）、评价抗原/佐剂兼容性和含佐剂疫苗各组分间物理相互作用等。当然，评价疫苗成品效力的QC实验也是必须的，但效力试验可反映也可不反映佐剂对于含佐剂疫苗效力的贡献大小，如果效力实验不反映佐剂的贡献，评价疫苗成品中或单独包装的佐剂中佐剂的含量就很重要。应该注意的是，在非临床研究中所使用的抗原、佐剂和含佐剂疫苗的批次在生产、理化性质、效力和稳定性方面应与临床用苗相当并具有很好的代表性。在后期临床研究中，生产者应特别关注成品生产过程有无任何微小的变化，并评价这些变化能否影响产品安全性。随着临床研究和产品研发的进行，生产者应当提供对关键步骤、中间产品以及初期接受标准进行控制的信息，以确保生产过程在各关键点可控。生产者应提供充分证据确保临床研究将产生可靠的可解读的数据。
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非临床评价应选择相关实验动物模型的考虑点
对影响佐剂和含佐剂疫苗的安全性和免疫原性研究，应选择合适的动物模型。选择时通常应考虑如下几点：
1）给药途径：毒理学评价所用的给药方式应当与临床实验一致，如临床试验使用特殊器械进行给药，动物实验也尽可能使用相同器械；
2）基线免疫状态：应明确界定与安全性评价最相关的基线免疫状态；
3）理想的动物模型应能重复出人体产生的免疫反应；
4）能够得到的历史性数据。在大多数情况下，对于新的佐剂和含佐剂疫苗，一种相关动物模型就足够了。
但何为相关模型，是个十分复杂的问题。理想状态下，选择的动物应当对疫苗所抵抗的细菌、病毒或寄生虫抗原具有易感性。关于灵长类动物的选择，专家认为，当有其他种类动物可供使用时，没有必要使用非人灵长类动物。另外应该注意，由于动物对抗原或佐剂的反应特异性，使用动物模型预测人类免疫反应具有局限性，而且动物研究可能无法检测到那些罕见的副反应。
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佐剂评价的主要内容点
1）评价体液免疫反应的强度（如抗体平均滴度或浓度）、质量（抗体亲和力）以及活性作用（即中和活性）；
2）评价细胞免疫，包括对某种特异的细胞免疫反应诱导的评价，如Th1和Th2型反应、可检测细胞因子和细胞毒性T细胞的诱导等；
3）评价合适动物模型中的保护作用；
4）阐明佐剂作用模式和免疫调节作用的机理。
上述研究结果将有助于解读非临床安全性研究，并确定将来临床研究中将被检测的潜在副反应。体外功能性实验可为了解佐剂的作用模式提供帮助，可提供有价值的补充性数据，如通过检测抗原递呈细胞表面受体表达量的改变以及细胞因子的分泌，可对佐剂的作用效果进行评价。
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药物非临床安全性评价动物实验
安全性评价动物实验对于确定合适的佐剂/抗原比例和安全剂量、免疫方法和给药途径，以及确定临床试验初期需检测的未知或潜在不良反应非常重要。由于抗原、佐剂和佐剂疫苗的最终制剂均有可能导致安全问题，佐剂疫苗的安全性评价应包括单独佐剂的毒性研究和佐剂疫苗的毒性作用。
1）单独佐剂的毒性研究；
2）佐剂疫苗最终制剂的毒性研究；
佐剂疫苗最终制剂的非临床毒性研究用于评价疫苗的局部反应原性和全身毒性，进而发现和确定疫苗潜在的不良反应，以推断疫苗安全性是否达到临床试验要求。其中，重复剂量毒性研究最为重要，通常应在一种适当物种（主要是敏感物种）中进行，必要时，可按照不同产品选择额外物种进行试验。佐剂疫苗最终制剂的重复剂量毒性研究应全面考虑，周密设计。
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临床评价早期考虑因素
除了与一般疫苗类似的早期临床试验考虑因素外，新型佐剂疫苗临床评价尚有其独特的问题需要考虑。
1）尽管一个佐剂疫苗的早期临床试验并不需要阴性对照组，但这类接种了无活性盐安慰剂的对照组有助于初始安全数据的解释。但从伦理角度，应尽量避免单独佐剂对照组，而首选安慰剂和单独抗原制剂组。2）制造商应该提供疫苗中使用佐剂的理由，包括有关添加佐剂好处的临床前研究信息（如概念验证研究、攻击模型数据）、有/无佐剂疫苗的早期临床安全性和免疫原性研究数据及其增强免疫反应和节约抗原的数据等。
3）由于佐剂本身可能诱发极强的固有免疫反应，以及佐剂对抗原的增强免疫反应均可导致不良事件，评价时应予充分关注。
4）由于新型佐剂可能诱导自体免疫或自身炎症疾病，建议在新型佐剂的临床试验中，对所有治疗组受试者迟发性自身免疫疾病相关的严重不良事件进行监测，检测时间建议扩展到疫苗接种后12个月，但临床研究报告的提交和后继临床研究的启动不需因随访而推迟。。
欧盟：Guideline on adjuvants in vaccines
该指导原则详细介绍了欧洲药品审评署(EMEA)关于人用疫苗佐剂的指导原则。该指导原则阐明了佐剂的定义、分类及其作用机制,并对佐剂的质量研究、非临床研究和临床研究提出了具体要求，目录如下：
CONTENTS
1. INTRODUCTION
2. SCOPE
2.1. Vaccines
2.2. Adjuvants
3. QUALITY
3.1. The adjuvant
3.1.1. Deion
3.1.2. Manufacture
3.1.3. Characterisation
3.1.4. Routine testing
3.1.5. Stability
3.2. Adjuvant/antigen combination
3.2.1. Development and manufacture of the combination
3.2.2. Characterisation
3.2.3. Routine testing
3.2.4. Stability
3.2.5. Multiple antigen/adjuvant combinations
3.3. Final product
4. NON-CLINICAL
4.1. Proof of Concept
4.2. Pharmacokinetics
4.3. Toxicity of adjuvant alone
4.3.1. Local tolerance
4.3.2. Induction of hypersensitivity and anaphylaxis
4.3.3. Pyrogenicity
4.3.4. Systemic toxicity
4.3.5. Reproduction toxicity
4.3.6. Genotoxicity
4.3.7. Carcinogenicity
4.3.8. Combination of adjuvants
4.4. Toxicity of adjuvant in combination with the proposed antigen
4.4.1. Local tolerance
4.4.2. Repeated dose toxicity studies
4.4.3. Characterization of the immune response
5. CLINICAL
5.1. Introduction
5.2. Preliminary studies
5.2.1. Effect of the adjuvant on the immunological response
5.2.2. Dose-finding studies
5.3. Confirmatory trials
5.3.1. General considerations
5.3.2. Possible scenarios
5.3.2.1. New vaccines with a new or established adjuvant
5.3.2.2. Changes to the adjuvant content of a licensed vaccine
5.3.3. Statistical considerations
佐剂书籍：Vaccine Adjuvants：Methods and Protocols
Edited by Gwyn Davies
St. George’s University of London, London, UK
书籍：疫苗佐剂的研究与质量控制
第五节：佐剂的安全性评价
一、佐剂的非临床研究
佐剂的临床研究除了关注其免疫增强作用外，还应十分关注其不良反应，应从以下几个方面进行考虑：
（一）佐剂对抗原免疫原性的作用
佐剂对抗原免疫原型是佐剂应用的基础，必须有充分的动物模型证据表明佐剂的使用真正能够诱发和加强机体产生长期、高效的特异性免疫反应，从而提高机体的保护力。免疫效果应包括体液免疫和细胞免疫两个方面、观察机体抗体的产生情况和持续时间。理想情况下，应该使用相关的动物模型证明其对病原物生物致死性攻击的防御效果，如果不存在这样的模型，应选择能诱导产生与人体免疫应答特性相似的动物模型。
（二）药代动力学
新的佐剂在与抗原进行混合使用以前应单独给药进行人体药代动力学研究，以取得科学的、令人信服的结果。佐剂与疫苗混合后，除了进行理化分析观察其结合、解离、相互作用的情况外，还应进行临床分析取得更直观的科学数据，以对佐剂效果做进一步分析。
（三）佐剂及佐剂/抗原结合物的毒性
应对佐剂及佐剂/抗原结合物分别进行试验，以检查佐剂及佐剂/抗原结合物的毒性。在临床前安全评价中多使用小鼠作为动物模型，但不同动物品系的小鼠，甚至一个种内的不同株，对同一佐剂都可能显示不同反应。建议使用至少两种以上小鼠（最好使用已经进行过佐剂活性研究的动物），载辅以家兔或豚鼠进行动物实验。疫苗和佐剂单独使用或二者混合使用时，其浓度应模拟或大于人体使用剂量。佐剂及佐剂/抗原结合物的毒理学分析主要考虑接种部位的病理反应、局部耐受性、致超敏作用、过敏反应、对组织和器官的全身毒性、免疫抑制作用、致癌性，遗传毒性、生殖毒性、基因毒性、组织吸收和器官排除、重复剂量毒性等。可参照疫苗不良反应的观察方法观察研究佐剂的不良反应。
二、佐剂的临床研究
临床研究要能证明疫苗中佐剂的使用可增强针对抗原的免疫应答，使免疫应答达到预期的效果，同时不会明显增加局部和全身不良反应，以提高疫苗的安全性。应保证佐剂的使用在增强免疫应答中取得的潜在利益要超过可能带来的风险。
（一）佐剂免疫作用研究
早期的临床研究主要在健康成人以及较少例数的特定目标人群中进行。如果疫苗计划在全部人群或主要在婴幼儿/儿童/老年人使用，则应该在健康成人研究后，尽可能在一定数量的目标人群中进行观察。确证性的临床试验则尽可能在目标人群中进行，如果年龄组跨度较大，应事先分层或进行一个以上临床试验。不论抗原是否已经批准上市，都应包含单独抗原与抗原加佐剂的对比研究，以证实加入佐剂的必要性。对于新佐剂和新抗原混合时，还应采用预防同样疾病的上市疫苗作为对照。免疫应答的特征应包括成品中抗原的单独使用以及抗原/佐剂结合物接种时的免疫应答的比较。应对佐剂本身可能存在的潜在影响进行综合评价。可能的话，还应对体液免疫和细胞免疫情况进行评价。
（二）佐剂剂量研究
寻找合适的佐剂剂量以及佐剂与抗原的合适比例，以期取得免疫应答和不良反应之间权衡的最佳效果。对于新佐剂和已上市的抗原结合物，抗原剂量的选择可以参考已上市同类产品的用量，重点考虑佐剂的使用剂量；而对于新佐剂和新抗原而言，既要考虑佐剂的剂量，同时应考虑抗原的剂量。
剂量研究应尽可能在疫苗的目标人群中进行。当剂量探索研究未能选择出合适的抗原/佐剂剂量时，就不得不用验证试验评价一种以上制品。
（三）观察指标及免疫测试方法的选择
由于尚不清楚新佐剂在机体中对抗原免疫应答的性质产生何种影响，因此应同时关注体液免疫和细胞免疫两个方面的作用。在体液免疫方面，除了用ELISA检测抗体外，如可能，还应检测中和抗体、杀噬菌体抗体或杀菌抗体，应对免疫球蛋白的亚类进行分析研究；在细胞免疫方面，应检测抗原特异性T细胞反应，包括Th1、Th2和T调节因子细胞和细胞因子；当然最精确最有说服力的实验是保护攻击实验。
上述指导原则及书籍均可在网上搜索获得，当然你也可以加小编微信：32850587，由小编拉您进入疫苗交流微信群而获得。
下期幻灯共享，敬请关注！
Nonclinical aspects of vaccine development
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