Image J计算荧光Ratio并加伪彩~

在丁香园看到一个比较老的帖子：

然后有人不知道怎么做这样的图：

这个问题其实蛮简单的，正好顺手撸一篇教程。

 1、打开一张荧光图片，并拆分成三个通道图，具体见《利用Image J拆分和Merge荧光图片》。

对于位图应该有这样的认识：每一个8 Bit的通道图的像素其实都是由0~255的数值组成的一个矩阵，就像下图小红色方块里面的像素灰阶值矩阵；既然整个图片都是一个像素的灰阶值矩阵，那么矩阵和矩阵之间可以分别进行加减乘除等运算，其中的除法就可以用来计算荧光Ratio。

2、选择Process-Image Calculator。此外还有一个Calculator Plus，相当于Image Calculator的加强版，有兴趣的可以看看。

Image Calculator很简单，一看就会，找准自己需要计算的图片和方法（Divide），然后勾选下面两个选项就行；

3、结果会新生成一张计算之后的图片，该图片的伪彩默认是Image 1的颜色，可以使用LUT更换伪彩；

4、下面就是添加表示计算结果的热度条，很多人可能是被难在这一步了。选择Analyze-Tools-Calibration Bar，则会在图片上显示该热度条，进行一些简单设置包括位置、填色、标签字体颜色/大小/缩放之类的，即可获得最后的图片。