目前,国内罗汉果Siraitia grosvenorii的繁殖大部分采取传统的压蔓与种薯种植等方法,但这些方法存在产量低,毒素积累多,退化快等缺点[1-4]。国内对罗汉果组织培养的研究大部分是对罗汉果培养基的整体把握[2-5],深入研究罗汉果快繁生根培养基的较少。对罗汉果组织培养的结果表明,吲哚丁酸(IBA)与6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)配合使用对罗汉果不定芽的分化有明显的促进作用,IBA与6-BA等也是对罗汉果的茎段培养作用最大的植物生长调节剂[5]。对罗汉果生根培养的研究主要集中于各种不同激素浓度配比和培养基成分的影响。相关研究结果表明,植物生长调节剂中萘乙酸(NAA)的处理相对于IBA的处理,根系分化早,根粗,盘根多,活性炭对罗汉果试管苗的增殖分化无明显影响,但对试管苗的壮苗生长及缓解玻璃化有较大促进作用[6]。在研究青皮果系列罗汉果新品种 “永青1号”培养基和活性炭对组培苗生根壮苗的影响中,各因素影响程度从大到小依次为:培养基>活性炭>NAA>蔗糖[7]。然而,对于研究不同活性炭种类和浓度对罗汉果快繁生根的影响较少。因此,本试验探究罗汉果快繁生根的最佳培养基,以及不同类型和浓度的活性炭对罗汉果快繁生根的影响;对比罗汉果根的分化时间、平均根长、生根率等指标,确定最合理的罗汉果快繁生根的处理方法。
以罗汉果无根试管苗为培养材料,苗高均为2.5 cm左右,发育状况良好,均带一个节,叶色正常。培养基为青岛高科园海博生物技术有限公司所生产的B5培养基,北京康倍斯科技有限公司生产的MS培养基。
将罗汉果的幼茎先用流动的自来水冲洗30 min,将洗净的罗汉果幼茎拿到超净工作台上消毒接种。将幼茎放到大烧杯中,加入75%酒精消毒10 s并不断搅动,将酒精倒掉,再加入0.1%升汞溶液消毒10 min且不断搅动,然后用无菌水冲洗3次后将幼茎取出。在接种盘上将其剪切成仅带一个节,约2.5 cm长的茎段,接种入 MS+IBA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L的培养基上,每个培养瓶接幼茎段3个,培养3周左右,可获得长有5~6片真叶的罗汉果无菌苗,以新长出的幼茎作为供试材料[8]。
诱导生根基础培养基为 MS、1/2MS、B5、1/2B5,分别添加IBA 0.5 mg/L,6-BA 1.0 mg/L,NAA 1.0 mg/L,蔗糖30 g/L,琼脂5 g/L,直径为2.0 mm左右的粗颗粒或粉末状活性炭,活性炭浓度设置为0、0.5、1.0和1.5 g/L,p H 值为5.8~6.0,分装在培养瓶中,每个培养瓶培养基50 m L高压蒸汽灭菌,将预处理的幼茎分别接入不同的培养基中,每瓶接2个茎段,不同变量重复5次,即每个变量的植株共10株。温度27℃,光照强度2 500 Lx,光照时间12 h/d条件下培养30 d[6]。
每天观察不同处理罗汉果无菌苗生根情况,以眼可辨认的根为准,并且记录最早生根时间、生根数量。30 d后,测定根长,并且计算生根率和根长,生根率(%)=生根植株数/总植株数×100,平均根长=(所有根长度和/生根数)[9]。数据利用DPS数据统计软件进行LSD差异性分析。
秦明月啊一声,心想罗伽在搞什么名堂?口中忙解释说:“没有啊,我真不知道这事,卢局你看,现在事情这么多,我哪有什么心情去搞什么聚会啊。”
不添加活性炭的情况下,培养30 d后,MS、1/2MS、B5、1/2B5等培养基的罗汉果茎段生根情况见表1。最早生根的为1/2MS培养基,接种后5 d就开始生根,但生根率不高,培养30 d生根率为50%;B5培养基中生根率最高,达到60%,且生根数量也最多,平均根长最长(p<0.05)。因此,基础培养基中,对罗汉果茎段生根最有利的为B5培养基。
第三、加快推进社会体育改革,构建社区体育发展机制。经过十几年体育改革发展,我国体育社会化进度在加快,体育体制开始分化,社会普及程度较高的足球、篮球、排球等项目实现职业化发展。计划经济体制下的“单位体育”逐渐向社区体育转变,体育社团、体育协会、体育俱乐部等体育社会组织的发展,推动社区体育发展,社区体育成为全民健身运动发展基本载体。
表1 无活性炭不同培养基罗汉果生根比较
注:表中同列数据后不同小写字母表示差异显著(p<0.05)。表2和表3同。
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试验结果看出,添加粗活性炭0.5 g/L,不同培养基中罗汉果生根率均有提高;其中生根率最高的为B5培养基,生根率为90%,且生根率和生根数量与无活性炭处理差异极显著(p<0.01)。培养基中添加粗活性炭1.0 g/L,生根率最高的为B5培养基,最终生根率为100%,生根数量为24条,显著(p<0.05)高于其他培养基。添加粗活性炭1.5 g/L,4种培养基中生根率都出现了下降趋势,可能高浓度的活性炭限制了植株对营养物质的吸收,但B5培养基中生根率显著(p<0.05)高于其他培养基,除了 MS培养基,生根数量和平均根长与其他培养基差异不明显(p>0.05)(见表2)。与其他的处理比较而言,在B5培养基中添加粗活性炭1.0 g/L适宜作为罗汉果茎段生根培养基。
试验结果看出,添加细活性炭0.5 g/L后,供试4种培养基中生根率都有提高,与不添加活性炭处理有显著差异(p<0.05);最高的为B5培养基,30 d以后最终生根率为90%,生根数量为29条,平均根长为12 mm。添加细活性炭1.0 g/L后,4种培养基相对于添加0.5 g/L细活性炭生根率变化不明显(p>0.05),但平均根长增加明显;生根率最高的仍为B5培养基,最终生根率为100%,生根数为26条,平均根长为20 mm。添加细活性炭1.5 g/L后,生根率最高的为MS培养基,最终生根率为80%,生根数为23条,平均根长为23 mm;生根数和平均根长与1/2 MS培养基和B5培养基无显著性差异(p>0.05)(见表3)。综合比较来看,培养基中添加1.0 g/L细活性炭后,B5培养基适宜作为罗汉果茎段生根培养基。
2.3 远期疗效 术后6个月,观察组患者治疗总有效率为93.8%远高于对照组的72.9%(P<0.05)。见表3。
表2 不同培养基添加不同浓度粗活性炭对罗汉果生根的影响
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表3 不同培养基添加不同浓度细活性炭对罗汉果生根的影响
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试验结果表明,粗、细活性炭对罗汉果生根均有促进作用,但添加粗活性炭的培养基较添加细活性炭诱导的根更粗,添加细活性炭的培养基诱导的根较粗活性炭处理更长,根盘更大。生根率最高的培养基为细活性炭1.0 g/L+B5培养基和粗活性炭1.0 g/L+B5培养基,其最终生根率均为100%;生根数量最多的为细活性炭0.5 g/L+B5培养基,最终生根数为29条,细活性炭1.0 g/L+B5培养基,最终生根数为26条,两者差异不明显(p>0.05);最终平均根长最长的为细活性炭1.5 g/L+MS培养基和细活性炭1.0 g/L+1/2MS培养基,均为23 mm,细活性炭1.5 g/L+B5培养基的根长次之,为22 mm,三者差异不显著(p>0.05)。综合来看,适宜的生根培养基为IBA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L+细活性炭1.0 g/L+B5培养基。
国内植物组织培养技术方面的研究已较为全面,从原材料的选择到各种培养基配方均有较为详细的研究[1-2],对罗汉果组织培养的研究大部分是对培养基的整体把握,深入研究罗汉果快繁生根培养基的较少。本试验比较不同培养基与不同活性炭浓度配比对罗汉果生根的影响,找出适宜的培养基条件,为罗汉果的生根培养基配方更合理更科学提供了一定的参考。
参 考 文 献
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