中华肝脏病杂志,2020.28(12):1055-1058
作者:许艺凡 雷学忠
DOI:10.3760/cma.j.cn501113-20190308-00074
正文
据估计,全球有 2.57 亿乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者,每年因乙型肝炎相关的肝硬化和肝细胞癌导致约 88.7 万人死亡 [1] 。而目前我国仍大约有 7 400 万慢性 HBV 携带者,约占全球感染人数的 1/3,从 2015 年到 2030 年预计约有 1 000 万人将死于乙型肝炎相关肝硬化和肝癌 [2] 。在乙型肝炎监测、管理、消除的道路上我国任重而道远。近年来对 HBV RNA 的研究发现其与 HBV 感染的自然史、HBV 病情进展等方面关系密切,对临床的指导意义亦日益受到重视。本文分析了近年对 HBV RNA 的临床研究,以期更好的指导临床中乙型肝炎的管理。
HBV RNA 与慢性乙型肝炎的监测评估
1. HBV RNA 与乙型肝炎感染自然史:
早期有研究表明 HBV RNA 具有区分不同感染阶段的潜力。近期 Liu 等的研究纳入了 291 例初治慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者,结果显示在慢性 HBV 感染的过程中,各阶段血清 HBV RNA 水平不同 :HBeAg 阳性组患者血清 HBV RNA 明显高于 HBeAg 阴性组,而在 HBeAg 阴性的患者中,非活动性的CHB 组血清 HBV RNA 水平最低 [3] 。此研究证实了 HBV RNA 预测 CHB 进展的潜力。然而鉴于 CHB 监测过程中疾病的进展及医疗干预,纵向的研究较为困难。2017 年欧洲肝病协会指南以 HBeAg 阳性和阴性将 CHB 感染史分为不同时期 [4] 。随着 HBV RNA 在感染自然史中的作用被揭示,可能为我国修改及制定 HBV 感染分期标准提供新参考。
2. HBV RNA 与其他血清学标志物:
临床上,我们观察到长期抗病毒治疗的患者 HBV DNA 的水平显著下降,但共价闭合环状 DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)可持续存在,患者难以获得持久的免疫学控制。理论上,HBV RNA 只由 cccDNA 产生,其相关性应高于其他指标 [5] 。蒋贝等发现经恩替卡韦治疗后血清 HBV DNA 已降至低于检测下限的慢性乙型肝炎患者中仍有部分患者可检出 HBV RNA,而血清 HBV RNA 仅来源于 cccDNA 的直接转录,故比 HBV DNA 和 HBsAg 更 能 反 映 cccDNA 水平或者活性 [6] 。Giersch 等 [7] 通过小鼠模型证明未经治的小鼠血清 HBV pgRNA 与肝内 cccDNA 具有良好相关性( r = 0.89, P < 0.000 1)。Huang 等 [8] 的研究发现初治 CHB 患者血清中 HBV DNA 联合 RNA 可反应肝内 cccDNA 的活性,但近来有不少研究发现 HBcrAg(乙型肝炎核心相关抗原)与 cccDNA 具有良好的相关性且可能优于 HBV RNA [9 - 10] 。血清中 HBV RNA 与 HBV DNA、HBsAg 的相关性目前存在分歧,回顾既往的研究可发现,对于初治的 CHB 患者,尽管在 HBeAg 阳性与 HBeAg 阴性的患者中存在差异,但总体上,血清中 HBV RNA 与 HBV DNA、HBsAg 具有较好的相关性(表 1)[3,8,10 - 13] 。而对于治疗后的 CHB 患者,各研究结果具有较大的差异 :Mu 等 [14] 发现 HBeAg 阳性的患者,经干扰素治疗后肝内 HBV RNA 与 HBV DNA 具有较好的相关性( r = 0.739, P = 0.001);而 Luo 等 [15] 经多变量因素分析得出血清 HBV RNA 与血清 HBV DNA 无相关性、与 HBsAg 相关性较弱(表 2);Liao 等 [16] 的研究发现经 NAs 治疗的患者HBV RNA水平与HBcrAg显著相关( r = 0.629,P < 0.001)。造成上述差异的原因可能是治疗方法、血清学转换、早期病毒学应答等因素的影响,同时由于研究本身的异质性,如研究对象、地区、种族差异以及检测方法的差异,因此各研究得出的结论不同。值得考虑的是,将血清 HBV RNA 联合其他指标共同评估 CHB 患者在临床工作中是可行的,其临床意义有待更多纵向研究去评估。
HBV RNA 与抗病毒治疗
1. HBV RNA 与抗病毒治疗方案:
目前应用于临床抗病毒治疗 :核苷 ( 酸 ) 类药物 [nucleot(s)ide anologues, NAs] 以及干扰素。Wang 的研究中 11 例 CHB 患者,NAs 治疗后 HBV RNA 下降 [17] 。Luo 等同样发现经恩替卡韦治疗后,病毒学应答的患者血清 HBV RNA 是降低的 [15] ,可能的原因是 NAs 药物耗竭了 HBV RNA 的模板 - cccDNA。Jansen 等研究表明,与单药相比,基于干扰素的治疗更显著地降低 HBV RNA 水平 [18] 。Jia 等的研究表明对于初治 HBeAg 阳性的患者基线时 HBV RNA > 200 000 拷贝 /ml,干扰素治疗 12 周后 HBV RNA > 3 000 拷贝 /ml,在治疗 24 周时很难实现血清学转换,以此来评估干扰素治疗获益,从而优化抗 HBV 治疗,这也为抗病毒治疗的个体化提供了新的评估手段 [12] 。
2. HBV RNA 预测病毒学应答及血清学转换:
越来越多的研究表明,患者血清 HBV RNA 水平可以预测病毒学应答及血清学转换 [11,19 - 21] ,早前 Huang 等发现 NAs 治疗第 12 周时,血清 HBV RNA 水平可作为独立因素预测慢性 HBV 患者初始病毒学应答 [19] 。van Bommel 等与 Huang 结论相同,同时发现其预测能力优于 HBV DNA、HBsAg [20] 。Luo 等及 JiaW 等的研究分别阐述了经恩替卡韦(ETV)、干扰素或者干扰素联合 NAs 方案治疗后,HBV RNA 水平在病毒学应答(Viral Response)组更低 [12,23] ,进一步证明了其预测病毒学应答的能力。
此外,上述研究均显示发生 HBeAg 血清学转换的患者 HBV RNA 水平显著降低。近期 Wu 等也得出同样的结论,并发现 NAs 药物初治患者 HBV RNA 低于 4.12 拷贝 /ml 更容易发生血清学转换,而是否发生血清学转换受基因型、年龄、性别、治疗前后的 HBV DNA 水平及丙氨酸转氨酶(ALT)水平等多种因素影响,HBV RNA 可作为评价血清学转换的独立因素 [21] 。除了探究接受 NAs 药物治疗患者 HBV RNA 对于血清学转换的影响,Van Bommel 及 Jia 等的研究均证实了在接受聚乙二醇干扰素(Peg - IFN)治疗期间,HBV RNA 可作为评价 HBeAg 血清学转换的新指标 [11 - 12] 。
迄今为止,尚未确定 HBeAg 血清学转换特异性的预测因子。但值得肯定的是,HBV RNA 能够预测经治患者病毒学初始应答,目前大多数证据表明 HBV RNA 可作为一个独立因素协同判断 HBeAg 阳性患者的血清学转换,优化乙型肝炎患者的监测及管理。
3. HBV RNA 与新型抗病毒药物:
HBV RNA 对新型抗病毒药物的研发也有指导意义。其中一类主要针对核心蛋白的装配,称作核心蛋白质变构调节剂( core protein assembly modulators,CpAM),其作用于病毒 pgRNA 的壳体化和病毒复制过程中起重要作用的位点。与 NAs 药物相较,NAs 仅抑制 HBV DNA 复制,但不阻断 pgRNA 衣壳化或 HBV RNA 病毒样颗粒产生,而 CpAM 抑制 pgRNA 装配入壳 [22] 。但无论是 CpAM 还是 NAs 均不能阻止感染的肝细胞中 cccDNA 转录或 HBsAg 产生。另一类可能作为研究新靶点的是 HBV 核糖核酸酶 H(RNaseH),目前 Gotchev 等 [23] 研究已显示RNaseH 抑制剂(AB - 452)可降低小鼠的血清 HBsAg 和肝内 HBV RNA 水平。
HBV RNA 与安全停止抗病毒治疗
何时停止抗病毒治疗是目前具有争议性的话题。有研究回顾分析了 12 个研究中心 126 例停止抗病毒治疗的 HBeAg 阴性的 CHB 患者,认为血清 HBV DNA 低于 3.0 log 拷贝/ml(≈ 2×10² IU/ml)、HBeAg 的血清学转换、接受长期治疗是成功停止 NAs 药物的必要条件,同时该研究发现治疗结束时 HBsAg 和 HBcrAg 滴度是安全停止治疗的预测因素 [23 - 24] 。而实际上,目前长期治疗的患者均符合上述条件,然而停药后病毒学反弹及乙型肝炎复发率仍很高。一项纳入 36 例 CHB 患者的研究表明血清 HBV DNA 水平联合 HBV RNA 水平可预测停药后病毒学反弹水平 [25] 。北大鲁凤民教授团队建议将传统的基于病毒 DNA 检测的病毒学应答重新定义为血清 HBV DNA 和 RNA 的共同持续消失(低于检测下限) [26] ,并提出了从“部分治愈”、“准临床治愈”、再到“临床治愈”( 或“功能性治愈”) 的阶梯性提升模式,以 cccDNA 消失或静默为基础、以 HBV DNA 和 HBV RNA 持续阴性为依据的“部分治愈”预测 NAs 停药后复发或病毒学反弹风险。但鉴于停止抗病毒治疗后 HBV DNA 的反弹及疾病复发率,目前缺少大规模、多中心、前瞻性的研究的研究。值得关注的是,将 HBV RNA 联合 HBcrAg、HBsAg 及其他血清学标志物建立预测停药复发的试验模型有望进一步研究。
展望
目前,随着 HBV 感染复制过程、机制的详细阐述,HBV RNA 在病毒复制过程中的作用也逐渐被阐明。在整个复制过程中,cccDNA 作为模板转录成 HBV mRNA。其中,pgRNA 作为逆转录、逆转录酶蛋白及其他蛋白合成的模板进一步完成病毒学复制 [27] 。此外,越来越多的检测方法可用来检测血清 HBV RNA,比较常用的方法有基于 RACE 的 PCR 法(cDNA 末端快速克隆,rapid - amplfication of cDNA ends) [28] 以及实时荧光定量 PCR(针对 HBV 基因组的 X,C 或 S 区设计特定引物,RT - qPCR) [29],目前也有研究采用 QuantiGene assay [30] 、微滴数字化 PCR 法(droplet digital PCR,dd - PCR)测定血清 HBV RNA [31] 。
关于 HBV RNA 仍有许多问题暂未解决 :(1)血清中HBV RNA 的分子学特征仍未完全揭示,有研究表明除了全长的 pgRNA,外周血清中可能还存在截短的 pgRNA,此类 RNA 可能使衣壳化的 RNA 不具有感染性 [32] ;(2)在 HBV 复制过程中,未经逆转录或者只经部分转录的 pgRNA 也可经过包膜蛋白装配,形成 HBV RNA 病毒样颗粒 [33] ,Wang 等 [17] 人发现具有缺陷的 HBV pgRNA 病毒样颗粒不具有感染性,血清中 HBV RNA 病毒样颗粒来源及在整个复制过程中的作用、是否具有感染性仍未完全阐明 ;(3)尚无研究比较分析各检测方法的差异,HBV RNA 检测方法的准确性、标准化仍值得进一步探究。在临床方面 :(1)对于初治的 CHB 患者,HBV RNA 可以预测 HBeAg 阳性患者的血清学转换,为监测及个体化抗病毒治疗提供指导;(2)而长期接受抗病毒治疗后,HBV RNA 的价值需要考虑多种因素,如目前的感染状态、是否早期实现病毒学应答及是否发生血清学转换等来综合分析,其临床意义有待更深入的研究 ;(3)其对于长期治疗的患者安全停药的预测需进一步验证 ;(4)目前仅有少量针对孕产妇的研究 [34] ,缺少针对特殊人群 :如肝癌患者、儿童等的研究,这也增加了其研究潜力。
总的来说,HBV RNA 作为一个新的血清学标志物,可与 HBV DNA、HBsAg、cccDNA、HbcrAg 等协同对乙型肝炎患者进行综合评估,优化目前对于乙型肝炎患者的监测及管理,其临床价值仍需要大规模、多中心、前瞻性的临床研究来进一步证实。
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