cck8实验步骤及注意事项

Cell Counting Kit简称CCK8试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

WST-8属于MTT的升级产品，工作原理为：在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在490mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。

cck8实验步骤(以下为药物处理实例)

1、在96孔板中配置100μL的密度为2×104个/ml的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（37℃，5% CO2）。

2、按一下浓度梯度和时间点，加药物处理;

3、将培养板在培养箱孵育一段时间（0-7天共8个时间点）。

4、向每孔加入10μL CCK8溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数。

5、将培养板在培养箱内孵育1小时。

6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

通常研究药物毒性时会涉及半抑制率，即IC50，,意思是抑制率50％的时候药物的浓度。把药品稀释成不同的浓度，然后计算各自的抑制率，以药品的浓度为横坐标，抑制率为纵坐标作图，然后得到50％抑制率时候的药品浓度，就是IC50。