Sleeping Beauty转座载体是什么？

　　我们的睡美人（Sleeping beauty）转座载体系统可以高效地将外源DNA插入宿主细胞基因组。该系统在技术上十分简洁，仅需要进行质粒转染（无需病毒转导）即可永久性地对宿主细胞基因组插入您的目的基因。

　　该载体的转座子系统来源于Tc1/mariner转座子超家族，一开始是从鱼类基因组分离出来，并且经过了大量的累积突变已失去转座子活性。睡美人转座子通过移除鲑鱼基因组的Tc1/mariner转座子上的这些失活突变，重新构筑出有活性的转座子。该方法合成的转座子提供了一种在脊椎动物中高效地进行基因转导和插入突变的手段。

　　睡美人转座载体系统包含两个载体，均为大肠杆菌质粒形式。第一个是辅助质粒，编码转座酶。另一个则是转座子质粒，包含由两个反向/正向重复序列（IR/DR）包围的转座子区域。需要被递送至宿主细胞的外源基因被克隆至该区域。

　　当辅助质粒和转座子质粒共转染至靶细胞时，辅助质粒表达的转座酶会识别IR/DR序列，然后将两个IR/DR序列之间的区域作为转座子插入宿主基因组上的TA二核苷酸位点。

　　睡美人转座子是II类转座子，这意味着其遵循剪切-复制的转座机制，从一个地方转移序列至另一个地方不会留下多余的序列拷贝（I类转座子则遵循复制-粘贴机制）。由于辅助质粒是瞬时转染的，会随着时间逐渐丢失。伴随辅助质粒的丢失，插入宿主基因组的转座子将变成永久性的。如果此时再次转染辅助质粒，转座子则可以从宿主基因组中剪切出来，且不会在基因组上留有痕迹。