45昧中药乙醇提取物中对酪氨酸酶的激活作用

摘要：从中医治疗白癜风方剂中筛选出中药45味，观察这些中药50％乙醇提取物对蘑菇酪氨酸酶和无细胞

系统多巴色素自动氧化生成黑索量的影响。结果显示有21昧中药乙醇提取物在3个不同浓度对蘑菇酪氨酸酶

活性、黑素生成具有激活作用，其中女贞子、梅花和八角茴香对酪氨酸酶的激活作用较明显；同时分析了其中有

激活作用的中药的功用等分类情况，以探讨其用药规律。有必要进一步对这些中药有效成分进行分离纯化，找

出新的激活酪氨酸酶的有效单体成分，评估其应用价值。

选择出45种中药作为粗筛对象，这些中药包括：三七、何首乌、桔梗、川芎、柴胡、白芷、珍珠粉、梅花、丹参、白附子、通草、女贞子、玉竹、丹参、山楂、八角茴香、白茅根、白前、防风、乌蛇、天麻、当归、陈皮、紫苏子、自前、乌梅、白术、白蔹、王不留行、辛夷、羌活、白茯苓、灵芝、延胡索、猪苓、北沙参、白芨、天花粉、藁本、泽泻、北沙参、三棱、猪牙皂、白薇、合欢花，均购自无锡市山禾药业集团，并经河北医科大学中医学院教授确认。

L一多巴、蘑菇酪氨酸酶、8．甲氧补骨脂素(8-MOP)均为美国Sigma公司产品；紫外可见分光光度计为尤尼科(上海)仪器有限公司生产。

3．1 中药的50％乙醇提取物对酪氨酸酶的激活作用

在应试的45味中药中，仅有21味中药能够激活酪氨酸酶，不同中药的50％乙醇提取物对酪氨酸酶的激活作用有所不同(表1)。根据其对酪氨酸酶的作用，可以分为3类其中1)第一类主要有羌活、八角茴香、白术、女贞子、梅花、泽泻、三棱等几味中药，它们的提取物对酪氨酸酶的激活作用随提取物浓度的增高而显著加大(P<0．05)；2)第二类主要

有茯苓、白前、广藿香、藁本等几味中药，它们的提取物对酪氨酸酶的激活作用在10到50 mg／mL范围内提取物浓度的变化对激活作用影响不大，但在100 mg／mL时激活作用明显较高(P<0．01)；3)第三类主要有乌蛇、天麻、桔梗、柴胡、王不留行、通草、灵芝、猪苓、猪牙皂等几味中药，它们的提取物对酪氨酸酶的激活作用则随提取物浓度的增大而明显降低；但在所用浓度范围内三七对酪氨酸酶的激活作用不受提取物浓度的影响。3个浓度的8-MOP(50，250，500Ⅳ,nol／L)均对酶活性及黑素生成有直接刺激作用。

3．2几种激活酪氨酸酶的中药的药物功用

中药的药物功用指的是中药的主要功能，主要包括理气、祛风湿、补益、利水、止咳化痰、活血等。

从药物功用上来看，在50％乙醇提取物对酪氨酸酶有激活作用的中药中，解表药／祛风祛湿药／利水药／止咳化痰药最多，各占17。4％共16味，共占68．4％(表2)；说明不同功用的中药中，有一些都可刺激酪氨酸酶、促进酪氨酸氧化，并最终转化黑色素。

3．3几种激活酪氨酸酶中药的归经分析

中药归经是指药物对机体某部位的选择性作用，即一种药物可能主要对某一经或某几经发生明显作用，而对其它经的作用则相对较小，甚至没有作用。药物标明归某经或某几经，不等于其不能人别的经。它是以脏腑经络理论为基础，以其所治疗的具体病证为依据而总结出来的用药理论，是解释中药作用机制和指导临床用药的重要依据。在50％

乙醇提取物对酪氨酸酶有激活作用的中药中，可归入肝、肺、脾、肾的中药累计35味(表3)，共占总累计数的74．5％；可见能激活酪氨酸酶、刺激黑素产生的中药多对治疗肝、肺、脾、肾病症有一定疗效，或者说黑素产生缺陷性病症可能多与肝、肺、脾、肾等的功能异常有关。

3．4几种激活酪氨酸酶中药的四气分类

中药中的“气”出自于神农本草经。在《神农本草经》中说：“药又有寒、热、温、凉四气。”“疗寒以热药，疗热以寒药。”药之“四气”便由此而来。在50％乙醇提取物对酪氨酸酶有激活作用的中药中，温、平类中药共13味，占68．4％(表4)；可能机体过于寒凉是黑色素合成缺陷的主要原因。

【注释：冷-肤，热-黑】

3．5几种激活酪氨酸酶中药的归昧情况

五味，系指酸、苦、甘、辛、咸五种基本的味道。五味作为中药药性理论的主要内容之一，常用以概括药物的一些功能特点，解释药物的奏效原理，在指导临床正确用药中，具有积极作用，受到历代医家所重视。在50％乙醇提取物对酪氨酸酶有激活作用的中药中，苦、甘、辛类中药累计共3l味(表5)，占93．9％是激活酪氨酸酶、促进黑素合成的主要中药，而咸、酸类中药在此中的作用相对较小。

4讨论

中医对疾病的诊断以经络运行的变化、即阴阳万方数据

吴立峰等：45味中药乙醇提取物中对酪氨酸酶的激活作用 521

变化为基本依据，应用中药药性(归经、归味特点)或中医手法实施治疗。由于经络运行的基本原理失传和难于为现代仪器所检测、中药成分的复杂性等，中草药治病机理一直难于被西方理解和接受。从中医药在治疗白癜风中的作用来看，虽然在治疗白癜风已积累了丰富的经验，但其确切作用机制以及疗效肯定的药物成分至今仍不清楚。根据中

医病因机理，白癜风病因可归结为气血失和、气血瘀滞、气血两亏、风湿致病、肝肾不足、脾胃不足等原因。我们通过分析治疗白癜风有关药物对酪氨酸酶的激活和对黑素形成的作用发现：单昧中药中以补血补气类药物、活血类药物、辛温解表类药物、清热凉血药、归肝经的药物、以温平为主、以苦、甘、辛为主的中药使用频率最高，即药效与上述病因学说相对症，这与一些文章对药方统计研究结果基本一致。

酪氨酸酶作为黑素合成的关键酶，其活性的异常可能导致皮肤色素生成的异常。已知补骨脂素是酪氨酸酶的激活剂，长期用作治疗白癜风的化疗药。同时有文献报道十二烷基磺酸钠、苯甲醇和丝氨酸蛋白酶对酪氨酸酶也有激活作用H。在本研究中我们发现在常用于治疗白癜风的45种中药的50％乙醇提取物中，有21种对酪氨酸酶有一定的激活作用，其中女贞的作用最明显；此结果与其他研究中用90％乙醇提取物试验结果不尽相同，说明不同浓度乙醇提取物中有效成分有所不同；进一步工作有望在女贞等高激活率的提取物中分离纯化出新的对酪氨酸酶有激活作用的中药单体。