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(二)Lac和Tac表达系统

(二)Lac和Tac表达系统

(2010-03-24 13:59:26)
标签:

教育

分类: learning
Lac和Tac表达系统
这是最早建立并得到广泛应用的表达系统,它是以大肠杆菌lac操纵子调控机理为基础设计、构建的表达系统。Lac操纵子具有多顺反子的结构。在无诱导物的情况下,负调节因子lacI基因产物与启动子下游的操作基因紧密结合,组织转录的起始。在诱导剂IPTG存在的情况下,与阻遏蛋白结合后,导致与操纵基因的结合能力降低而解离出来,lac操纵子的转录因此被激活。用tac启动子构建的表达系统称为Tac表达系统。为了能使Lac和Tac表达系统具有严谨调控,一种能产生过量的lacI阻遏蛋白的lacI基因的突变体lacIq被应用于表达系统(Das 1990)。但在使用高拷贝复制子构建表达载体时,仍能观察到较高水平的本底转录,还需在表达载体中插入lacIq基因以保证有较多的lacI阻遏蛋白产生。目前不少商品化的表达载体都是在Lac和Tac表达系统基础上加以改进和发展的。Lac和Tac表达系统用IPTG诱导转录,但由于IPTG本身具有一定的毒性,从安全角度而言对表达和制备用于医疗目的的重组蛋白并不适合,一些国家也规定在生产人用的重组蛋白的生产工艺中不能使用IPTG,于是人们想到用阻遏蛋白lacI的温度敏感突变株lacI(ts)应用于Lac和Tac表达系统(Hasan and Szybalski 1995,Yabuta等,1995)。这些突变体基因插入表达载体或整合到染色体后,均能使lac,tac启动子的转录受到温度严谨调控,在较低温度(30℃)时抑制,在较高温度(42℃)时开放。还有用乳糖替代IPTG诱导物(Hartsock等,1995;Hsih等,1997)。但其效率受到多种因素的影响和制约,因此乳糖诱导的有效剂量大大高于IPTG。乳糖本身作为一种碳源可以被大肠杆菌代谢利用,较多的乳糖存在也会导致菌体生理及生长特性变化。乳糖代替IPTG作为诱导剂的研究要与发酵工艺结合起来,才能显示其良好的前景。
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