一、什么是腺病毒包装系统
1. 腺病毒包装系统包括：
1)1个腺病毒载体：含有缺失了E1和E3基因的腺病毒基因组序列的质粒。
2)l株包装细胞株：表达El基因的293细胞。
野生型腺病毒基因组是一条约36 kb的线性双链DNA (dsDNA)分子。基因组的两个末端被称为Inverted Terminal Repeat (ITR)，末端之间含有腺病毒DNA复制所需基因。在病毒DNA复制周期早期表达的基因，称为早期基因，主要有4个，按表达先后顺序依次是E1、E2、E3、E4。在病毒DNA复制周期晚期表达的基因，称为晚期基因，主要有5个，按表达先后顺序依次为Ll、L2、L3、L4、L5。为了制备出自我失活的重组腺病毒，E1基因会被删除，使重组腺病毒成为一种安全的基因运输工具。为了增加包装能力，E3基因也同时被删除，因为E3基因产物会提高宿主的免疫反应，而且对病毒生产不重要。缺失了E1和E3基因的腺病毒基因组序列被克隆到质粒上构建成腺病毒载体。El基因片段被整合到293细胞基因组中，包装病毒颗粒时，Pacl消化的腺病毒载体转梁到表达E1基因的293细胞。El基因激活了其他早期基因和晚期基因的表达，这些基因表达产物和Pacl消化的质粒DNA组装成病毒颗粒。
二、什么是腺病毒过程
生产携带目的基因的重组腺病毒颗粒，过程如下图：
将环形腺病毒载体通过Pacl位点酶切后获得两末端是ITR序列的线性双链DNA，再转染线性化DNA到包装细胞。线性化双链DNA分饰两个角色，既是病毒基因组，又是病毒蛋白表达所参照的基因模板序列。基因组与病毒蛋白组装成病毒颗粒，病毒颗粒在细胞内成熟后，使得细胞破裂，从而使病毒颗粒释放到培养液中。然后收集细胞和培养液，反复冻融细胞和培养液的混合物，离心收集上清，获得粗病毒。此时的粗病毒量通常不会很高，一般会将粗病毒感染更多的包装细胞，以扩增病毒量。病毒扩增后，只收集细胞，再反复冻融细胞，离心收集上清，即可获得转导细胞级别的病毒颗粒。如果您想获得注射动物级别的病毒颗粒，可以利用CsC12超速离心进一步去除杂质，而获得纯度更高的病毒颗粒。
三、为什么腺病毒滴度单位有两种：VP/m和PFU/ml?
VP/mI是基于OD260读数计算出来，Viral particles (VP)代表样品中总的病毒颗粒数量（活的和死的）。PFU通过计算10倍稀释的病毒感染单层293细胞后形成的空斑个数而得来，Plaque Forming Unit (PFU)代表有感染性的病毒。病毒感染293细胞后，病毒会在细胞内扩增。当病毒量到达一定程度，它们会从感染的细胞中释放出来，细胞会破裂，死亡，然后飘起来，释放的病毒进一步感染附近的细胞。病毒感染和释放重复发生直到空斑形成。对大多数病毒制备来说，VP/PFU的比例范围是从5：1到100：1。
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