外植体的消毒
植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是
组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，
消毒一方面要求
把材料表面上的各种微生物杀灭，
同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影
响其生长。因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
（
1
）常用的消毒剂
常用的消毒剂如下表所示。理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲
洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低
廉。
常用消毒剂的使用方法及效果
①酒精
酒精是最常用的表面消毒剂，以
70%~75%
酒精杀菌效果最好，
95%
或无水
酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，
形成一层干燥膜，
阻止了酒精的继续渗
入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。同时它还具有较
强的湿润作用，
可排除材料上的空气，
利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材
料的杀伤作用也很大，
浸泡时间过长，
植物材料的生长将会受到影响，
甚至被酒
精杀死，使用时应严格控制时间。但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与
其他消毒剂配合使用。
②升汞
又称氯化汞，
Hg2+
可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死
菌体。
升汞的消毒效果极佳，
但易在植物材料上残留，
消毒后需用无菌水反复多
次冲洗。升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠
次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材
料也有一定的破坏作用。
④漂白粉
漂白粉的有效成分是次氯酸钙
[Ca(ClO)2]
，消毒效果很好，对环境无害。它
易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢
也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
⑥新洁尔灭
这是一种广普表面活性消毒剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果
好。
（
2
）消毒方法
①茎尖、茎段及叶片等的消毒
消毒前先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，然后用自来水冲洗。对
于一些表面不光滑或长有绒毛的材料，
可用洗涤剂清洗，
必要时用毛刷充分刷洗，
硬质材料可用刀刮。
消毒时在超净台上操作，先用
70%
酒精浸泡
10~30s
，
以无菌水冲洗
2~3
次，
然后按材料的老、嫩和枝条的坚实程度，分别采用
2%
次氯酸钠浸泡
10~15min
或用
0.1%
升汞浸
5~10min
。消毒时要不断搅动，使植物材料与消毒剂充分地接
触。
若材料有绒毛，
最好在消毒液中加入几滴
Tween-20
，
最后用无菌水冲洗
3~5
次。
②果实及种子的消毒
先用自来水冲洗
10~20min
，再用酒精迅速漂洗一下。果实用
2%
次氯酸钠浸
10min
，后用无菌水冲洗
2~3
次。种子则先用
10%
次氯酸钠浸泡
20~30min
，难
以消毒的可用
0.1%
升汞消毒
5~10min
。对于种皮太硬的种子，也可预先去掉种
皮，再用
4%
次氯酸钠浸泡
8~10min
。
③花药的消毒
用于组织培养的花药多未成熟，其外面有花萼、花瓣或颖片保护，处于无菌
状态。
消毒时将整个花蕾或幼穗用
70%
酒精浸泡数秒钟，
然后用无菌水冲洗
2~3
次，再在漂白粉中浸泡
10min
，最后用无菌水冲洗
2~3
次。
④根及底下部器官的消毒
由于这类材料生长于土壤中，表面带菌量大，消毒较为困难。可先用自来水
冲洗，
软毛刷刷洗，
用刀切去损伤及污染严重部位，
再用酒精漂洗后，
置于
0.1%
升汞中浸
5~10min
或
2%
次氯酸钠中浸
10~15min
，最后用无菌水冲洗
3
次。
在操作时要根据材料的大小、幼嫩、质地等差异做出判断后，再选择适宜的
消毒剂种类、
浓度和消毒时间，
切不可生搬硬套。
消毒的最佳效果应以最大限度
地杀死材料上的微生物，而又对材料的损伤最小为好
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