所需设备和容器
所需设备和容器
首先当然是我们操作的地方啦,细胞房中这个小小的工作台我们称它为超净台,可以保护样品在操作时避免污染。但也有的像病毒啊之类对人有威胁成分的更高级,可以保护人员为主,兼顾样品和环境,我们称它为生物安全柜。
▲超净台
▼生物安全柜
接下来就是细胞的“家”啦!各种size的细胞瓶、细胞皿,还有细胞培养板了。大家注意(细胞皿底部是要经过处理的哟,不然细胞无法贴壁,这你可要哭了哦 o(╥﹏╥)o)......
相关知识
1.细胞株
2.原代细胞
1.贴壁生长
2.悬浮生长
PS:
每代贴附生长细胞的生长过程分为:
1)游离期:细胞接种后在培养液中呈悬浮状态,也称悬浮期 。
2)贴壁期:细胞贴附于(胶原、玻璃、塑料、其他细胞等)。
3)潜伏期:细胞有省长活动而无细胞分裂。
4)对数生长期:细胞数随时间变化成倍增长,活力最佳,最适合进行实验研究。
▲细胞贴壁期示意图
1.细胞的营养需要
2.细胞的生存环境
温度:37℃
O2:95%
CO2:5%
PH:7.2-7.4
一定的渗透压3. 无污染
4.无毒
基础培养基:80-95%
血清:5-20%
碳酸氢钠:2.0g/L
青、链霉素:各200卑位/毫升细胞传代
细胞在培养器皿中生长一定时间后,被分开接种到新的培养器皿即为细胞传代。
简单说就是“孩子”长大了,要“分家”!
细胞株在培养过程中数量会不断增多,但是培养细胞的细胞瓶/皿的空间有限,就会导致细胞之间接触过于紧密,会使得细胞增殖收到抑制,所以我们必须把其中一部分细胞转移到别的细胞瓶/皿,让细胞有足够的生长空间。观察培养基是否正常,细胞状态如何,细胞密度如何,决定是否传代。如培养基变黄,细胞长成致密单层等情况。
1.悬浮生长细胞传代
1)离心法传代:离心1000转/分去上清,沉淀物加新培养液后再混匀传代。
2)直接传代法:悬浮细胞沉淀在瓶壁上,将上清培养液去除1/2~2/3,然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。
2.半悬浮生长细胞传代
此类细胞部分呈现贴壁生长现象,但是贴壁不牢,可用直接吹打使细胞从瓶壁上脱落下来,进行传代。
3.贴壁生长细胞传代
采用胰酶消化法传代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。
学姐的经验之谈
EXPERIENCE-1
靠技术“驯化”细胞
1) 严格无菌操作,多喷喷酒精,要是对灭菌的东西不放心,自己包自己送自己烘干。
2) 不要和别人共用试剂耗材,自己准备一套。
3) 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。
4) 水浴锅很脏,生化培养箱要是得手动加湿的话,盘里的水也会很脏,勤换 (灭菌水加进去)。
5) 晚上离开的时候最好给细胞房照紫外,超净台是用完就开紫外(记得照30min后关掉)。
6) 最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。
EXPERIENCE-2
靠内心'感动'细胞
1) 自己的细胞自己养,血的教训。
2) 在生物安全柜 (或者超净台),枪头,血清管,血清,培养基,瓶子都足够好,并且细胞房有良好的卫生措施 (比如隔离服,手套,口罩,清洁,HEPA 等等) 且不违反操作原则的情况下,你其实很难污染。
3) 上述条件不完备的情况下,就要多注意无菌操作了:比如要用的东西提前拿到台子里照啊 (不过这个其实也不大好,因为会挡住紫外线),使用前 SDS+酒精擦台子,进出超净台一定要酒精擦手。
4) 少对细胞说话,多靠内心来感动它们 (是的! 心不诚是不可以的!)
养细胞就像打仗,知彼知己,百战不殆!只有了解你养的对象,才能把它养好!
君君祝愿你们都可以把自己的细胞养得好好的哦!
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