01
样品读取
利用单染对照进行补偿
应当收集多少事件?
02
分析
文件格式-FCS文件
文件注释
流式细胞术实验最低信息标准(MIFIowCyt)概括了数据注释的最佳做法,是ISAC公认的标准3。
注释包括样品名称、标志物/染料名称、处理方法等。
右表源于MIFIowCyt文献,列出了一份更详尽的清单。根据最佳做法,实验变量的详细信息应与数据文件相关联。
数据分辨率和呈现
数据转换——数据转换是另一种工具,用于显示具有高动态范围的数据。在流式细胞术中,数据转换有助于观察因背景扣除和扩散误差而落在零附近的数据点。这些数据点被分配到第一个对数通道,导致事件在轴上堆积4,5。双指数(Biexponential)和hyperlog是数据转换时常用算法(图4)。数据转换压缩了低于零和高于零的数据,以便更准确地观察这个较小范围内的数据。
数据清除
间设门——记录样品的持续时间是每个FCS文件中包含的参数。这可以与散点图中的其他任意参数作图,以寻找流体系统的不稳定性。例如,在出现堵塞或气泡的情况下,用户可对异常值以外的持续时间进行设门,以确保测量的荧光没有错误(右图)。
在某些情况下,一旦问题得到解决,可能需要从分析中删除样品信息或重新记录数据。在釆集过程中也可以监控此时间图,以便及时发现和解决问题。
其他设门策略
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