本文从微柱凝胶实验的基础理论、操作步骤、结果判读、结果分析、注意事项、临床测评、疑难血型的原因分析和解决方法等方面做了讲解，希望能让各位老师有所收获，也欢迎老师与我们进行交流沟通。
第一部份 基础理论
血型鉴定常用方法
*玻片法-优点：操作简单，适用于大批量标本 缺点：反应时间长，如果血清抗体效价低，则不容易引起红细胞凝集，所以不适用于反定型检测。
*试管法-由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且借助离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适用于急诊检查。
*微板法-通过标准化加样、孵育、离心、悬浮、静止以及反应前后吸光度值增加数值的计算,从而达到对血型进行定型与反定型的目的。
*柱凝集法-是红细胞抗原与相应的抗体在微柱凝胶介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后观察结果。此法操作标准化，加样定量，可以保证结果的准确性。
不同介质配血法
1、盐水介质配血法
优点：操作简单，反应快速，如有血型不合，可立即显示出来。
缺点：a.该法只能发现完全抗体，不能检查不完全抗体。b.只适用于初次受血患者的交叉配血，对有异体输血史、妊娠史和器官移植史的 患者不宜采用本法。
2、凝聚胺介质配血法
优点：反应快速（整个实验只需2min)，灵敏度高，可检测几乎所有规则和不规则抗体，适于各类输血患者的配血。
缺点：操作要求相对盐水法较高。
3、酶介质配血法（木瓜酶或波萝蛋白酶）
优点：对Rh、Kidd血型系统的检出效果最好，操作较为简便，试剂容易购得，灵敏度高
缺点：费时，准确性和稳定性相对较差，对M、N、S、s、Fya、Fyb等抗原的破坏较为显著。
4、抗人球蛋白法
优点：可靠的不完全抗体检测方法，灵敏度高，准确性好。
缺点：费时，整个实验需要30min-1小时。
5、柱凝集法
优点：简便、不需洗涤、准确、敏感、结果保存时间长、标本用量少、标准化（定量加样操作、孵育离心时间、判读）、安全、 可自动化，可批量检测，结果可以直接传输
缺点：受纤维蛋白的干扰较大。
微柱凝胶卡的优势:
不需要洗涤细胞，简单，省时
标准定量加样操作
标准化的孵育时间
标准化的离心时间
标准化的判读
结果可反复判读，可长久保留
自动化，可批量检测，结果可以直接传输
为什么微柱凝胶法不用洗涤红细胞？阴性结果不需做阴性确认。
由于凝胶管中的抗人球蛋白与反应腔中的血清处于两相中，又加之互不扩散，因而互不接触，不存在血清球蛋白中和消耗抗人球蛋白的问题。当离心时，RBC的沉降速率远大于球蛋白，故RBC首先和凝胶中的抗人球蛋白反应，而不受血清中的球蛋白干扰，从而可免除洗涤这一步骤。
红细胞沉降所需离心力一般不足100g,
而血清蛋白分子沉降的离心力至少需要3000g。
第二部份:操作步骤、结果判读、结果分析、处理方法
1.假阳性反应
①未完全去除纤维蛋白原的血清标本在凝胶中形成纤维蛋白,阻碍红细胞沉降而悬浮于凝胶中或凝胶表面,造成假阳性;
处理办法：血样经重新离心及红细胞洗涤后重新试验。LISS悬浮红细胞。
②抗凝剂不足或不含抗凝剂的血浆标本常常易出现假阳性;
处理办法：重取抗凝好的新鲜血标本重新试验。
③标本被细菌污染致使红细胞浮于胶中或胶表面;
处理办法：取新鲜血标本重新试验。
④实验室温度较低时,因凝胶颗粒活动减少,单个红细胞穿过时困难,易出现假阳性结果。
处理办法：将微柱凝胶卡经适当时间复温后重新试验或将试验置37℃进行。
⑤某些疾病、使用某些药物、输注某些高渗或高蛋白溶液引起假凝集，自身凝集。
处理办法：红细胞用生理盐水洗涤后重新试验，
自身凝集多为冷自身抗体引起，通过加温处理或在37℃进行试验可以避免干扰。也可用DTT或2-ME将红细胞处理（破坏引起自身凝集的IgM抗体）后重新试验。
2. 假阴性反应
①抗原或抗体过少、过弱;
处理办法：受检者血清抗体太少太弱，或红细胞抗原太少太弱。原因可能是血标本放置时间过久，或存放不当，或受检者抗原抗体本身就很弱（遗传原因，如亚型；疾病原因，如某些白血病患者）。取新鲜血标本重新试验，至于受检者本身抗体抗原很弱的病例，根据具体情况，可采用正反定型、亚型鉴定、吸收释放试验、血型物质测定及家庭情况调查等方法加以鉴别。
②抗原或抗体比例不当;
处理办法：抗体抗原比例不当，抗体过剩或抗原过剩导致前带现象或后带现象的发生。严格按规程要求操作可杜绝此类现象发生。
③离心力过大时,容易使弱阳性成为阴性格局;
处理办法：严格按照厂家设计好的离心力和离心时间离心。
④未加入抗体等人为试验错误，加入反应物后孵育时间太短或根本未经孵育。
处理办法：操作要认真，核对要仔细，严格按操作程序进行操作。
3.溶血反应
(1)试验操作错误或标本本身存在问题
①反应液是低渗透压溶液；
②温度过低或过高；
③红细胞或抗体被细菌等污染；
④其他可能使红细胞破坏的理化因素。
处理办法：操作要认真，核对要仔细，严格按操作程序进行操作。
(2) 红细胞抗原抗体反应
①红细胞抗原与特异性抗体结合,激活补体,作用于红细胞膜使之破裂溶血:
②红细胞抗原与特异性抗体结合,未激活补体,但受到血清中其他因子作用而溶血。
处理办法：EDTA抗凝管采血，避免体外补体致敏。
第三部份-注意事项
原因分析:
1.技术错误或试剂仪器问题
（1）标本或试剂加错、未加试剂、器材不洁、溶血现象未能识别、结果记录或判断错误。
（2）红细胞悬液过浓或过淡 、细胞与血清比例不适、离心过度或不足。
（3）试剂运输、储存不当、污染或失效。
（4）仪器故障。
2.正定型---红细胞自身相关问题
（1）.红细胞血型抗原“增多”（额外的反应）
* 红细胞多凝集现象（细菌或病毒感染）
* 红细胞发生自凝现象（高效价自身冷凝集素）
*混合视野凝集
嵌合体血型 （异型输血、异型移植、双胞胎嵌合体）
亚型、胎儿和母体出血、疾病
纤维蛋白干扰
* 获得性类B (结肠、直肠癌、肠梗阻、革兰氏阴性败血病）
* 红细胞粘附大量蛋白（红细胞未洗涤）
* 红细胞致敏，直接抗人球蛋白试验阳性（AIHI）
（2）.红细胞血型抗原减弱
* 基因突变（ABO亚型等）
* Cis-AB型（顺式AB型）
* 疾病因素（白血型、何杰金病、海洋性贫血等）
* 年龄因素（新生儿、婴儿、老年人）
* 可溶性血型物质增多（常见于胃或胰腺恶性肿瘤患者）
3.反定型---血清自身相关问题
（1）.血型抗体“增多”（额外的反应）
* 亚型（抗A1）
* 自身冷抗体（抗I、抗IH）
* 同种抗体（抗P1、抗M、抗N、抗Lea、抗Leb等）
* 纤维蛋白原的影响
* 缗钱状假凝集
异常的血浆蛋白（多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、严重的肝病、何杰金淋巴瘤等）
其它疾病（MDS、干燥综合征、类风湿性关节炎、红斑狼疮等）
高分子聚合物（血浆增容剂：葡聚糖、PVP等）
* 血清中存在针对试剂红细胞保存液成分的抗体
（2）.血型抗体减弱
* 血浆置换治疗后
* 低丙种球蛋白血症（白血病、淋巴瘤及使用免疫抑制剂、 先天丙种球蛋白缺乏、免疫缺陷）
* 年龄因素（新生儿、婴儿、老年人）
* 骨髓移植术后
* 前带现象
* 原因不明（原发性）
处理步骤
1. 查找原因、询问、查阅病史
* 查找正反定型不一致的原因。
* 患者的年齡、病史、近期输血史、近期用药史、以前的血型。
* 是否进行了骨髓移植、是否进行过血浆置换术。
2. 分析目前已有的实验结果
* 已有的实验结果提示了什么？
* 所用的实验方法达成了什么实验目的？
* 初步的结论是什么？
3.选择合适的方法进行补充实验
* 试管法(是否要增强？是否更换抗体？）
* 微柱凝胶法
* 中和抑制实验
* 吸收放散实验
* 唾液血型物质检测
* 分子生物学方法（PCR-SSP/Sequencing）
解决方法
1.技术错误或试剂仪器问题
*重新采集标本，以避免采集、标记、污染等错误
* 彻底洗涤标本或试剂红细胞
* 排除试剂或仪器问题
2.ABO亚型
* 正定型：抗-A、抗-B、抗-AB、抗-A1、抗-H
*反定型：A1c、A2c、Bc、Oc、自身对照
*正反定型在不同温度下反应并比较凝集强度的变化
*吸收放散试验
* 唾液血型物质检测
* 有条件者可作家系调查或PCR检测血型基因
3. A、B抗原减弱
* 延长孵育时间、4℃孵育、 洗涤红细胞
* 酶处理红细胞
* 吸收放散试验 （确定是否是亚型）
* 唾液血型物质检测
* 既往血型调查 、确定年龄及临床诊断
4.抗体减弱
*延长孵育时间、4℃孵育
* 酶处理试剂红细胞
* 免疫球蛋白水平测定
* 既往血型调查 、确定年龄及临床诊断
5.自身冷抗体
* 将血清和红细胞分别在37℃孵育后再混合
* 用37℃温盐水洗涤红细胞、45℃热放散3分钟
* 正定型用巯基试剂(DTT)处理红细胞后定型
* 反定型血浆用自身红细胞吸收后定型
* 唾液血型物质检测
6.同种抗体
* 用谱细胞做抗体鉴定
* 选择没有相应抗原的A、B细胞做反定型
7.获得性B
* 询问病史
* 酸化抗-B血清（pH6.0)
* 唾液血型物质检测
* 家系调查证明没有遗传基础
8.混合视野凝集
* ABO亚型：A3、A3B、B3亚型等
* 近期ABO不同型输血（非O型人近期输入O型血)
询问近期输血史、毛细管离心分离自身红细胞等
* ABO不同型骨髓移植术后
* 胎儿和母体出血 询问近期是否怀孕
* 嵌合体血型（异卵双胞胎或双受精卵产生的嵌合体）
分离细胞（毛细管离心或单克隆抗体分离），分别做不同实验
* 疾病导致（白血病、MDS） 确定临床诊断
9. 已致敏红细胞造成的非特异性凝集
洗涤后的压积红细胞于56℃水浴放散10分钟，直至直抗试验阳性结果明显减弱或消失，再次洗涤放散后的细胞用于正定型试验。
10. 缗钱状凝集：洗涤红细胞、盐水替代试验。
11. 前带现象：稀释血清后再做试验。
12.自身免疫性溶血性贫血患者和药物性溶血性贫血
正定型用放散后的红细胞、反定型用吸收后的血浆定型。
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