HIV抗体ELISA检测试剂比较

作者：怀化市第二人民医院  张廷华

HIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛与复检）和确证试验。常见的筛查方法有：1、酶免法（ELISA）；2、化学发光与免疫荧光法；3、快速检测法（多为金标法）。常见的确证方法包括免疫印迹法（WB）、条带免疫法、放射免疫沉淀法（RIPA）及免疫荧光法（IFA）等。

目前，国内HIV抗体检测筛查试验以酶免法（ELISA）最为常用，检测的标本可使用血液、唾液、尿液等。在国内，先后出现了四代ELISA检测试剂，现就四代ELISA检测试剂比较如下：

第一、二代ELISA检测试剂

ELISA第一、二代检测试剂基本相似，仅仅以出现的时间顺序分为第一代与第二代，现归为一类，这两代检测试剂出现时间早，原理使用的都是间接法，窗口期长。间接法为检测抗体最常用的方法，属非竞争性结合试验。其原理如下：固相Ag+待检Ab+酶标Ab结合为Ag-Ab-Ab-E复合物,加入底物后显色，根据显色深浅确定检测抗体含量的多少。间接法由于采用的酶标抗抗体仅针对一类免疫球蛋白分子，通常用的都是抗人IgG，严格地讲，所测的仅为抗体的IgG类，不涉及IgA和IgM。并且第一、二代检测试剂包被的固相抗原为病毒裂解产物，此类抗原不纯，所以以上几种原因导致了第一、二代检测试剂的局限性，为时代所淘汰。

第三代ELISA检测试剂

ELISA第三代检测试剂针对第一、二代试剂的不足，进行了改进。第三代采用的是双抗原夹心法，窗口期短。双抗原夹心法可检测各类抗体，包括IgG和IgM，IgM比IgG出现的时间更高，检测IgM更为有利缩短窗口期，第三代检测试剂包被的固相抗原比第一、二代试剂包被抗原纯化度更高，为人工合成式抗原，因此双抗原夹心法的灵敏度和特异性高于间接法，缩短了HIV抗体检测的窗口期，为目前国内临床检测最为常用的试剂。双抗原夹心法原理为：固相Ag+待检Ab+酶标Ag结合为Ag-Ab-Ag-E复合物,加入底物后显色，根据显色深浅确定检测抗体含量的多少。

第四代ELISA检测试剂

第四代ELISA检测试剂为最新进展试剂，采用的为抗原抗体联合检测法，可同时检测血液中的HIV-P24抗原和HIV-1/2抗体，此抗体包含IgG和IgM，抗原抗体联合检测试剂中抗体检测采用双抗原夹心法，P24抗原检测采用双抗体ELISA夹心法，因此HIV检测窗口期更为缩短。

HIV筛查试验复检要求：对于初筛呈现阳性反应的标本，应使用原有试剂与另外一种不同原理（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行复检试验。针对第四代检测试剂需注意的是：若采用第四代检测试剂进行初筛试验时，则复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反应，而抗体试剂检测为阴性反应，则应考虑进行HIV-P24抗原或核酸检测，必要时要进行随访。

我们实验室遇到一例第四代试剂检测为阳性，确证试验WB检测为阴性的病例，病人对我们医院的检测结果提出了严重质疑。第四代检测试剂初筛为阳性时，送CDC确证试验为阴性，此原因为CDC采用的确证试验多为WB，而WB检测的为HIV抗体，而没有涉及到HIV-P24抗原，所以这种情况也是可能出现的。遇此情况，CDC反应需要定期进行随访，随访期间可根据需要，检测病毒核酸或P24抗原作为辅助诊断。

所以，以上情况，各位同仁们一定要注意各自实验室HIV初筛使用的试剂原理，为第几代检测试剂，只有多了解检测原理，并进行分析，在工作上才不会遇到意外的麻烦。