【干货】基因敲除小鼠鉴定方法

1、基因敲除阳性鼠的鉴定

在敲除的片段两端设计引物，扩增后电泳。理论上敲除成功的小鼠扩增出的片段大小=野生型小鼠的片段大小－敲除的片段大小，所以可通过电泳图的条带大小来进行鉴别，但实际上，若敲除的片段过大，有的酶是扩增不出来野生型片段的，比如有的酶，1.5K以下基本可以P出条带，大于1.5K的大部分是P不出的，所以当野生型的条带无法扩增时，这对引物就不能鉴定纯杂合了。

1.1、野生型片段扩增不出来时

敲除的片段较大时，野生型相应的片段往往扩增不出来。电泳结果若是无条带，则为野生型；若是只有一条条带，则为敲除小鼠（纯合或杂合）。

PS:条带大小=野生型片段大小-敲除片段大小

1.2、野生型片段可以扩增出来时

假设

条带1大小=野生型条带大小

条带2大小=野生型片段大小-敲除片段大小

当野生型的片段可以扩增出来时，电泳结果若是只有条带1，则为野生型；若是既有条带1又有条带2，则为杂合敲除小鼠；若是只有条带2，则为纯合敲除小鼠。所以这种情况就不需要再设计引物鉴定纯杂合了。