“心怀梦想，走近Nature”系列二 ——流式分选后的细胞注射桑椹胚得到嵌合体，

Kazuhiro Murakami等人在Nature上发表了一篇题为“NANOG alone induces germ cells in primed epiblast in vitro by activation of enhancers”的文章，我们先来简单了解一下。Nanog是胚泡内细胞团中的核心多能性因子，也在小鼠的单能原始生殖细胞（PGC）中表达。作者报告了一个意外的发现，即Nanog单独可以诱导EpiLCs中的PGCLC，与BMP4无关。作者还发现了ESC和EpiLCs之间NANOG结合模式的全基因组变化，表明调控元件的表观遗传重置。该研究证明了细胞如何获得细胞命运决定能力的广泛适用机制，阐明关键转录因子在发育过程中的依赖性作用。

文章涉及流式分选的相关实验：

1

用于衍生EGC样细胞（EGCLC）的实验设计。 用细胞因子或Nanog（+ Dox）从携带组成型活性Kusabira-Orange报告基因的雄性或雌性GOF-GFP EpiLC诱导PGCLC。 在D4基础上，将聚集物解离并在PGC选择培养基（LIF，SCF，bFGF，视黄酸）中的MEF上培养5天。 将选择的菌落解离并转移到ESC培养基（2i LIF）中。

2

流式分选诱导了D4并同时表达SSEA1 + 和CD61 + 的 Venus  PGCLC。此处运用的正是Bio-Rad S3e流式分选仪!

3

嵌合体生成的实验设计。从组成型表达荧光VENUS报告基因的GOF-GFP ESC系和添加Dox时的Nanog（TVN2细胞系）诱导PGCLC。 在D4上，聚集体被解离，并且通过FACS分选SSEA1 + 和CD61 + 细胞，注射到桑椹胚并在E9.5上分析。

4

ESC对嵌合体生成有贡献而不是PGCLC。 将ESC和FACS分选的Nanog诱导的SSEA1 + / CD61 + PGCLC注射到桑椹胚中，并显示E9.5嵌合体在明场和 VENUS绿色荧光下的图像。

我们往往会担心通过流式分选的细胞活性不佳或引入污染，不能完成后续实验，那Bio-Rad S3e是如何突破的呢？作为流式届的新秀它的亮点何在呢？

一

 S3e采用空气激发，而非石英杯激发。避免细胞在不同介质中受到剪切力的伤害。

二

上样台和分选仓采用精准、快速的半导体温控，可将温度控制在4-37℃任一档。

三

全自动无菌处理程序，确保机器无菌。配备清洗工作站，可自动冲洗样品线内外，防止样品交叉污染。

S3e的其它优点此处省略一万字，亮点总结如下：

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参考文献：Kazuhiro Murakami, Ufuk Günesdogan, Jan J. Zylicz, Walfred W. C. Tang, Roopsha Sengupta, Toshihiro Kobayashi, Shinseog Kim, Richard Butler, Sabine Dietmann, and M. Azim Surani, NANOG alone induces germ cells in primed epiblast in vitro by activation of enhancers, Nature. 2016 January 21; 529(7586): 403–407. doi:10.1038/nature16480.