Western Blot条带长得差不多是不是就是造假？

Western这种东西吧，也难怪，确实是不太靠谱

。有专门的文章，讨论了Western Blot对于论文造假撤稿的贡献

。

一般来说，主要原因就是，文章为了好看，都不会让你贴出整张Western的膜压片的图来

。高分可能要求提供原始数据，但低分估计就不是太严格了。所以，很容易就出现这种一个实验室几篇文章里，条带通用之类的造假情况

：

这图乍一看好像不是很像

，实际上应该还是同一个条带压出来的，当然，这两篇都撤稿了

。

那问题来了，是不是真的会有长得像的条带呢？

有可能的，那就涉及到WB的一种常见技术，就是抗体剥离（Stripping and re-probing）。当然，这种技术，一般是为了省钱，省时间。

比如样本比较珍贵，你又要做磷酸化检测又要做表达检测，那就先做完磷酸化的WB后

，把检测磷酸化抗体剥离下来，再重新封闭，用普通一抗进行孵育，重新检测。

这样就可能会造成磷酸化的条带和基础表达的条带就可能会长得挺像的……

当然，有的人会连内参都在一块膜上做，

比如先测完待检基因，然后剥离抗体后，再检测内参。

剥离抗体的方法有蛮多，一般就是用剥离缓冲液就行了，还有加热，降低pH都可以使得抗体从抗原蛋白上剥离下来。如果用的是硝酸纤维素膜，最简单的方法，就是0.2N的NaOH中，处理15分钟左右就行了

。实际上PVDF膜更经（nai）用（cao）一些，但如果是PVDF膜的话，可能就需要用剥离缓冲液了

。

当然，同一张膜上，检测内参的话，实际上并不需要剥离，只要在大概的位置上剪膜就OK了。

剥离这种技术的话，主要就是针对这样几种情况：

1）样品特别珍贵

2）要使用几种不同的抗体进行检测的（比如不同亚型的蛋白）

3）抗体加错了

4）节约时间

5）WB出现异常结果，需要用同个蛋白的不同抗体进行在验证的

如果是同一张膜上，同一个条带，用了不同的抗体进行了检测，那势必会造成压出来的条带可能长相差不多

，但这并不是WB造假哦。有兴趣的，可以自己去网上搜搜看关于剥离缓冲液的Protocol。好了，今天就先策到这里吧，祝你们心明

眼亮。