说起蛋白验证实验 ，相信经历过生化分子实验室摸爬滚打的科研人员首先想到的便是 Western Blot / ELISA。Western Blot / ELISA 的实验原理是基于抗原抗体反应，如果我们验证的目的蛋白没有相应的商业化抗体，则无法进行验证。今天小编给各位科普一项基于质谱方法，不依赖于抗体的靶向蛋白质验证技术。目前基于质谱的靶向蛋白质组学主要有两类技术：多反应监测（MRM）和平行反应监测（PRM）。
Tips
讲技术前先回顾下蛋白在二级串联质谱检测过程中的变化，以一个蛋白为例：
1. 蛋白A首先经过酶解成多个肽段（母离子）A-1,A-2,A-3… 进入一级质谱；
2. 母离子经过碰撞进一步碎裂为多个子离子A-1-1,A-1-2,A-1-3… 进入二级质谱。
▪ MRM / PRM 技术概述
MRM 是一项经典的靶向蛋白质组检测技术，需要先锁定某蛋白的一个母离子及其一个子离子，比如上图中的 A-1与 A-1-2。后续依赖三重四级杆质谱对离子对（母离子/子离子）进行采集。
PRM 是 MRM 基础上的新兴技术，此技术依赖于高分辨 Orbitrap 质谱仪，只需锁定一个母离子，后续可以对此母离子所有的子离子进行检测。比如上图中只需锁定母离子A-1。
在实际操作方面，PRM 比 MRM更加简单，只需锁定一个母离子，节约实验设计和操作时间，这得益于高分辨率的质谱仪 Orbitrap。
从靶向定量结果上看，与 MRM 相比，PRM 选择性更高，灵敏度更佳，重现性更好，在复杂背景中的抗干扰能力更强。
▪ PRM 技术细分
PRM 根据是否加入合成的目标肽段（待检测蛋白的母离子），可进一步细分为三个分支。
1. 不合成目标肽段：经过预实验锁定目标肽段后，直接按照PRM的方式采集目标肽段，获得相对定量值。
2. 合成普通肽段：经过预实验锁定目标肽段后，化学合成目标肽段，配置不同浓度梯度的样本上质谱，构建标准浓度曲线；将正式样本中的目标肽段信号值代入标曲，获得相对定量值。
3. 合成同位素肽段：经过预实验锁定目标肽段后，化学合成同位素目标肽段，将其掺入待检测样本，获得绝对定量值。
▪ PRM 实验方法简述（以不合成目标肽段为例）：
1. 蛋白提取，酶解除盐成多肽;
2. 混样预实验，选择合适的目标蛋白的目标肽段并建立其 PRM 采集方法;
3. 正式实验，每例样本进行目标肽段的 PRM 采集，并通过同位素内标进行定量校正。
PRM 与 WB/ELISA 辨析
与传统蛋白定量（Western Blot/ELISA）技术互补，使蛋白验证更加简单，具有更多的选择性，玩转蛋白验证。
从参数上看，通量、特异性、准确度，PRM 优于 WB/ELISA；灵敏度次于 WB/ELISA；实验周期、实验成本，因为涉及到抗体是否定制、抗体货期不定、抗体价格多变，自然是各位老师根据自己的具体项目具体分析。
基于质谱的靶向蛋白验证技术，科普到此为止，MRM/PRM，您 get 到了吗？
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