在病理诊断过程中，我们主要是通过石蜡HE切片进行；但是在实际工作中，往往也存在一些疾病的诊断或者分型需要依靠其他病理学技术，如特殊染色技术、免疫组织化学技术、原位杂交技术等。 而特殊染色技术与免疫组织化学技术比较而言，虽然前者诊断作用相对较小，但是在某些疾病诊断中仍具优点，可以作为补充诊断技术。 文丨南方医科大学南方医院病理科 黎兵兵 01 特殊染色技术 特殊染色技术主要是通过对相应的成分进行染色，以便了解与明确组织或细胞中正常结构或病理过程中出现的异常物质、病变或病原体等的一种病理学技术[1-2]。 02 特殊染色技术在病理诊断中的应用 目前特殊染色技术在病理诊断中主要体现在以下几方面的应用[1-6]，如鉴别或确认各种组织（胶原纤维、弹性纤维、网状纤维等），鉴定或区别各种异常物质或正常物质（糖原、黏液、脂肪、淀粉样物质等），某些病原体或者微生物的诊断和鉴别（结核分枝杆菌、念珠菌、隐球菌、曲霉菌等），某些特殊类型肿瘤的鉴别等。 特殊染色技术的类型及作用 一、鉴别或确认各种组织： 1 胶原纤维染色（VG染色、Masson染色）可以是胶原纤维性还是肌源性肿瘤，因为VG染色胶原纤维为红色，肌纤维为黄色，在Masson染色中胶原纤维为绿色，而肌纤维为红色。 2 弹性纤维染色可以显示皮肤组织中弹力纤维的变化；显示和判断心内膜及血管病变[7]；还可以鉴别肿瘤组织中的成分如弹性纤维瘤[3]。 3 网状纤维染色：网状纤维的染色方法有很多种，但是染色原理基本一致，大多都是采用氨银液染色，可以用于癌与肉瘤的鉴别，血管内皮瘤与血管外皮瘤的鉴别等。 4 神经元及神经纤维染色主要采用镀银染色的方法，使神经元轴突及神经纤维呈黑色，可用于诊断及鉴别神经系统肿瘤，如用于神经纤维瘤或者节细胞神经纤维瘤与神经鞘瘤的鉴别。 二、鉴定或区别各种异常物质或正常物质： 1 糖原：PAS染色（糖原PAS过碘酸雪夫反应法）糖原及其他PAS反应阳性物质（中性黏液性物质、软骨、霉菌等）均呈红色。 2 黏液物质：AB-PAS（黏液物质AB-PAS阿尔辛蓝过碘酸雪夫反应）可用于区别酸性黏液、中性黏液及混合型黏液，显示结果呈酸性黏液物质呈蓝色，中性黏液物质呈红色，混合黏液呈紫红色，细胞核呈浅蓝色。 3 淀粉样物质染色：如刚果红染色，可以显示局部或全身淀粉样变性，也可用于肿瘤的诊断及鉴别诊断，识别肿瘤间质中是否是淀粉样物质沉积，如甲状腺髓样癌、浆细胞骨髓瘤等。 4 脂类物质染色：如常见的为苏丹IV，油红O，脂肪染色可以用于组织器官的脂肪变性和类脂质的异常沉积，也可以用于诊断及鉴别脂肪组织发生的肿瘤。脂类物质染色主要适用于冰冻切片，对于石蜡切片而言，石蜡切片在脱蜡过程中需要使用脂溶性溶剂，因此在处理过程中脂类物质会流失，所以我们在脂类物质染色时使用冰冻切片。 5 含铁血黄素染色：在慢性心衰时肺淤血病人，肺泡腔内出现心衰细胞，胞浆中见到大量含铁血黄素沉积；此外在骨髓活检组织中经常用到，可以将细胞内和细胞外铁含量显示出来，不仅可以反映出铁含量，还可以反映出可用铁量，因此可以根据染色的结果鉴别缺铁性贫血铁粒幼红细胞性贫血与非缺铁性铁粒幼红细胞性贫血[2]。 6 黑色素染色：如采用多巴氧化酶（酪氨酸酶）法主要用于无黑色素的黑色素瘤的诊断和研究[5]。 三、某些病原体或者微生物： 1 抗酸染色：抗酸杆菌主要包括结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌，当在HE切片中看到结核结节时可以行抗酸染色进行鉴别及诊断是结核分枝杆菌还是其他情况引起肉芽肿性炎（真菌、结节病、异物、寄生虫等）。 2 真菌染色：包括多种多样的染色方法，如六胺银法、PAS等，其中PAS可以将大部分真菌显示出来；六胺银法在念珠菌、曲菌以及放线菌等真菌显示上效果最佳[1-3]。 四、某些特殊类型肿瘤的鉴别： 在鉴别血管内皮瘤与血管外皮瘤时可以使用网状纤维染色[6]等。 03 特殊染色技术在感染性疾病中病理诊断的作用 近年由于各种导管技术、器官移植、高效广谱抗生素、抗肿瘤药物、免疫抑制药物的使用，导致各种条件致病真菌性感染及结核病患者日益增多，而肺部真菌感染占深部真菌感染的首位，50％～60％侵犯支气管、肺[8]。目前深部真菌病的早期诊断具有一定的困难，分泌物、排泄物等直接镜检阳性率较低，真菌培养耗时比较长等原因，往往不利于临床诊断及治疗，但是如果能够取得一定的病变组织进行病理诊断及某些特殊染色，将可以缩短时间早期诊断深部真菌病。 在临床中我们常见一些肺部真菌感染性疾病如新型隐球菌、曲霉菌、毛霉菌、念珠菌等，如果单单通过HE切片有时我们常常难以给出诊断及真菌的类型，这时往往需要借助特殊染色技术协助我们进行诊断。 在真菌感染性疾病中，常使用六胺银法及PAS染色以区别及诊断真菌感染性疾病，但是六胺银染色相对于PAS染色更敏感[9]。在HE切片中曲霉菌和毛霉菌还是可以见到不易漏诊，但是有时当毛霉菌的菌丝较狭窄，而菌丝里见到一些横隔的情况两者也是不易鉴别的[8]。在HE切片中隐球菌往往呈淡红色或者不着色，因此隐球菌感染往往容易漏诊的。当出现这些情况时我们可以进行六胺银染色（图1、2）可以提高阳性率。在肺部感染性疾病中，我们也常看到结核分枝杆菌感染，当在HE切片中看到结核结节时，常常往这方面考虑，但是当进行抗酸染色时往往不尽人意，很难找到结核分枝杆菌。 图1 ×40 GMS（六胺银染色）隐球菌 图2 ×60 GMS（六胺银染色）隐球菌 04 小结与展望 近年来，病理技术飞速发展，先不说蛋白水平、分子水平上所作的测试和分析，就是免疫组化的应用也扩展了病理学的诊断手段，从而部分取代了常规染色技术和特殊染色技术的作用，特别是特殊染色技术在病理诊断实际应用中越来越少。哪怕如上所述，网状纤维可以区别癌与肉瘤，但是我们使用免疫组化中的CK、Vimentin等项目也是可以区别的，因此许多特殊染色技术的应用往往被取代了。 但特殊染色技术还是存在一定的自身优势。一是在某些疾病的诊断中，特殊染色是应该优先考虑的方案，而免疫组化往往不能达到相同的效果。比如对于IgA肾病、膜性肾病以及狼疮性肾病，免疫荧光染色的诊断率均较低[10]。在诊断深部真菌感染时，特殊染色也是一种不可或缺的辅助手段，可以缩短确诊的时间，有助于临床快速制订有效的治疗方案。 其次，随着疾病谱的变化和临床技术的发展，诊疗模式也在不断地演进，如抗肿瘤药物、免疫抑制剂的使用等，特殊染色技术在这些方面也有一些独特的优势。 另外，一些特殊染色的试剂公司开发了一些适宜少量切片染色的特殊染色试剂，这也促进了特殊染色技术的发展和应用，使得特殊染色技术更加规范化、标准化、节省时间等。 因此，对于特殊染色技术不应「一刀切」，因地制宜地用其所长，仍然能够对病理诊有所裨益。 参考文献 [1] 鞠学萍. 现代病理学技术条件下特殊染色的应用价值. 中国继续医学教育. 2016. 8(12). 35-36 [2] 莫居容, 梁开弟. 现代病理学技术条件下特殊染色的应用价值. 东方食疗与保健. 2017. (2). 58 [3] 冯庆云. 现代病理学技术条件下特殊染色的应用价值探讨. 医药前沿. 2017. 7(12). 132-133 [4] 王玉芳, 徐晓艳, 武彦. 常用特殊染色在病理诊断中的应用. 实用医技杂志. 2013. 20(12). 1357-1358 [5] 曾汉英, 于桂臣, 杨秋佳. 特殊染色在肿瘤病理组织学诊断中的应用. 吉林军医学院学报. 2002. (03). 139-140 [6] 张明伟, 尚春霞. 谈特殊染色及光镜观察与免疫组化在软组织肿瘤诊断中的应用. 母婴世界. 2015. (14). 1, 2 [7] 李彦玮, 王伟, 梅少帅, 滕飞, 陈东. 联合特殊染色在血管壁病变观测中的应用价值. 中国医学科学院学报. 2018. 40(03). 360-364 [8] 刘菲菲, 李雪, 金木兰. 规范化特殊染色技术对肺真菌感染性疾病病理诊断的意义. 临床与实验病理学杂志. 2017. 33(6). 653-658 [9] 邱小文, 黄建平, 杨映红. PAS联合crocott六胺银染色在真菌显示中的应用. 福建医药杂志. 2012. 34(04). 97-98 [10] 罗教秀, 储兵, 曹晓珊, 陈应智, 吴师珍. 免疫荧光和几种特殊染色在肾活检病理诊断中的应用. 河北医学. 2017. 23(06). 898-901
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