一种猪肺炎疫苗组合物及其制备方法和应用的制作方法15（专利）

一种疫苗组合物及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种疫苗组合物，该疫苗组合物包括免疫量的猪圆环病毒抗原，免疫量的猪肺炎支原体抗原，以及左旋咪唑或其衍生物，聚合物。该疫苗组合物不仅可以对两种抗原同时起到免疫增强作用，且具有稳定性，并可用于稀释猪繁殖与呼吸系统综合征活疫苗。
【专利说明】一种疫苗组合物及其制备方法和应用

【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种疫苗组合物，具体地说，涉及一种猪圆环病毒和猪肺炎支原体二 联苗疫苗组合物。

【背景技术】
[0002] 猪圆环病毒（PCV)是迄今发现的一种最小的动物病毒。现已知PCV有两个血清 型，即PCV1和PCV2。PCV1为非致病性的病毒。PCV2为致病性的病毒，它是断奶仔猪多系统 衰竭综合征（PMWS)的主要病原。PMWS的临床特征有消瘦、皮肤苍白、呼吸困难、腹泻、黄疸 等。病理变化可见全身淋巴结肿大，特别是腹股沟淋巴结肿大可达5?10倍；肺主要呈弥 散性、间质性肺炎变化，质地硬如橡皮，表面一般呈灰褐色的斑驳状外观；肾的变化较多，可 见皮质和髓质散在大小不一的白色坏死灶，由于水肿而导致其呈现蜡样外观；脾轻度肿大； 大多病猪的肝有不同程度的萎缩、纤维化。
[0003] 猪气喘病又称猪支原体肺炎或猪地方性流行性肺炎，是由猪肺炎支原体 (Mycoplasma hyopneumoniae)引起的一种接触性慢性呼吸道传染病，普遍存在于世界各 地。患病猪主要表现为咳嗽和气喘，生长迟缓，饲料转化率低，体温基本正常。解剖时以肺 部病变为主，尤以两肺心叶，中间叶和尖叶出现胰样变和肉样变为其特征。发病率高，死亡 率低。近年的研究发现，猪肺炎支原体与猪繁殖呼吸综合征病毒和其它病原混合感染，使其 感染的严重性进一步提高。到目前为止，该病仍是造成养猪经济损失最重要的疾病之一。 猪支原体肺炎感染后可引起猪体的免疫抑制，导致猪体的免疫功能下降，对猪的巨噬细胞、 T细胞和B细胞的功能均有抑制。因此，猪群一旦发生猪支原体肺炎感染，就很容易与其它 病毒和细菌发生混合感染，以猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus type2，PCV2)最为常 见。
[0004] 猪肺炎支原体对培养基的营养条件要求非常苛刻，在一般的培养基中很难生长， 是动物支原体中较难培养的一种，现有技术通过使用活疫苗或佐剂提高其免疫效力，但现 有技术缺乏针对对圆环病毒和支原体都起到免疫增强作用的有效佐剂疫苗。


【发明内容】

[0005] 为解决现有技术的不足，本发明提供一种猪圆环病毒2型、肺炎支原体二联灭活 疫苗疫苗。
[0006] 本发明的主要目的在于提供一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量 的猪圆环病毒抗原，免疫量的猪肺炎支原体抗原，以及左旋咪唑或其衍生物，聚合物。
[0007] 优选地，所述猪圆环病毒抗原为猪圆环病毒全病毒抗原、含有PCV2免疫原性氨基 酸序列的嵌合病毒，或含PCV2免疫原性氨基酸序列的多肽或亚单位成分；以及所述猪肺炎 支原体抗原为猪肺炎支原体全病原抗原。
[0008] 术语"猪圆环病毒2型抗原"是指含有至少一种PCV2抗原形式的任何组合物，所述 抗原接种猪可诱导、刺激或增强抵抗PCV2感染的免疫应答。所述PCV2抗原可以是PCV2全 病毒、如灭活的PCV2全病毒、含有PCV2免疫原性氨基酸序列(如0RF2蛋白）的嵌合病毒，任 何其它至少含PCV2免疫原性氨基酸序列的多肽或亚单位或其他成分。PCV2抗原还可以包 含以下组合物的任一种抗原：如梅里亚公司（Merial)的Cii'COVac?;辉瑞公司（Pfizer) 的Suvaxyn?PC V2;哈尔滨维科生物技术开发公司的猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株)； 福州大北农生物技术有限公司的猪圆环病毒2型灭活疫苗（DBN-SX07株）和基因工程亚单 位疫苗(如勃林格殷格翰公司（Boehringer-Ingelheim)的Ingelvac CircoFLEX?等等） 因 PCV2基因组大小为1767bp或1768bp，不同毒株之间核苷酸序列同源性较高，均在90%以 上，因此 PCV2SH 株（GenBank 登录号为 AY686763 )、PCV2LG 株（GenBank 登录号为 HM038034 )、 PCV2DBN-SX07-2 (GenBank登录号为HM641752)均在本发明之内。
[0009] 本发明中术语"猪肺炎支原体抗原"是指含有灭活的猪肺炎支原体抗原，所述抗原 接种猪可诱导、刺激或增强抵抗猪肺炎支原体感染的免疫应答。猪肺炎支原体包括本领域 技术人员熟知的临床分离的野毒株。优选地，所述猪肺炎支原体抗原是完整的猪肺炎支原 体，优选为灭活形式，更优选为猪肺炎支原体HN0613株或J株（ATCC登记号25934)。副猪 嗜血杆菌抗原还可以包含以下组合物的任一种抗原猪肺炎支原体如勃林格殷格翰公司的 M. hyo ;哈药集团公司的瑞倍适Respisure和RespisureOne ;美国普泰克公司的MycoGard; 美国辉瑞公司的RespiFend ΜΗ;梅里亚动物保健公司的猪克喘；国内生产的168株活疫苗。 [0010] 本发明所述圆环病毒2型抗原，优选亚单位抗原或灭活后的全病毒抗原。作为本 发明的一种实施方式，全病毒抗原为SH株全病毒抗原，可按照专利申请CN101240264A公 开的方法制备，作为本发明的另外一种实施方式，抗原为PCV20RF2蛋白，可按照专利申请 CN103173470A公开的方法制备。
[0011] 本发明的猪肺炎支原体抗原优选一种猪肺炎支原体菌株，菌株名称为ΗΝ0613株， 保藏编号为CCTCC Μ2012230,保藏单位为位于中国武汉的中国典型培养物保藏中心，保藏 日期：2012年6月13日，公开于专利申请CN103031258A。作为本发明的一种实施方式，全 病毒抗原为SH株全病毒抗原，可按照专利申请CN101240264A公开的方法制备，作为本发明 的一种实施方式，猪肺炎支原体全支原体抗原为HN0613株全猪肺炎支原体抗原，可按照专 利申请CN103031258A公开的方法制备。
[0012] 优选地，所述猪圆环病毒抗原为彡2μ g PCV20RF2蛋白/剂量，优选2?300μ g PCV20RF2蛋白/剂量，最优选20 μ g PCV20RF2蛋白/剂量；以及所述猪肺炎支原体抗原为 107?109CCU/剂量，优选2X 108CCU/剂量。
[0013] 优选地，所述圆环病毒2型抗原为PCV20RF2蛋白，所述PCV20RF2蛋白为2?300 微克/mL，更优选2?60微克/mL，最优选20微克/mL。
[0014] 优选地，所述猪圆环病毒2型抗原为灭活前彡IX 105_°TCID5(/剂量的灭活的猪圆 环病毒2型全病毒抗原，优选彡10 6_°TCID5(I的灭活的猪圆环病毒2型全病毒抗原；以及所述 猪肺炎支原体抗原为1〇 7?l〇9(XU/剂量，优选2X 108(XU/剂量。
[0015] 本发明疫苗组合物中，猪肺炎支原体抗原灭活前含量为1〇7?109(XU /头份；更优 选地，本发明疫苗组合物中，猪肺炎支原体HN0613株抗原