2017年5月，Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis发表了来自中检院研究人员的文章，题目为“Development of a robust reporter gene assay to measure the bioactivity of anti-PD-1/anti-PD-L1 therapeutic antibodies”。文章主要介绍了一种PD-1/PD-L1抗体基于细胞层面的生物活性检测方法的开发，文章共同第一作者为王兰、于传飞、杨雅岚，作者还包括高凯主任，通讯作者为王军志副院长。
▲中检院副院长 王军志
PD-1/PD-L1生物活性检测方法简介
近年来PD-1/PD-L1抗体飞速发展，取得了许多里程碑般的进展：改写非小细胞肺癌的治疗格局、首次获批用于治疗特定基因背景而非发病部位的癌症。国内的PD-1/PD-L1抗体研发同样火热，君实生物、百济神州、嘉和生物、誉衡药业、基石药业、信达生物、康宁杰瑞、丽珠单抗、百奥泰等一大批企业加入该领域的竞争。
生物活性是抗体药物的关键质量参数（CQA），在批次放行、稳定性监测、工艺开发过程中都可能需要检测。常规的竞争性ELISA方法只能反映抗原结合能力，不能反映药物作用机制（MOA）。Mixed lymphocyte reaction (MLR) 和antigen-specific recall assays 可以通过检测IFN-γ的分泌来检测生物活性，但检测周期太长，需要4-5天。且这些方法需要使用原代细胞，由于来源于不同个体及操作的复杂性，检测的变异性很大。基于T细胞增殖、细胞毒性等的检测方法，同样由于需要使用原代细胞以及复杂的操作，并不适合作为通用的生物活性检测方法。
一方面是PD-1/PD-L1抗体研发的火热，一方面是对稳定、便捷的生物活性检测方法的需求，中检院建立了报告基因法来检测PD-1/PD-L1抗体的生物活性。该方法基于两种细胞系，CHO-PD-L1-CD3L细胞系及Jurkat-PD-1-NFAT细胞系。CHO-PD-L1-CD3L细胞系稳定表达PD-L1和anti-CD3-scFv，作为靶细胞；Jurkat-PD-1-NFAT细胞系稳定表达PD-1和荧光素酶（luciferase），荧光素酶基因受NFAT元件（转录因子）调控（IL-2启动子），作为效应细胞。PD-1与PD-L1结合可以阻断CD3下游信号的转导，从而抑制荧光素酶的表达，当加入PD-1抗体或者PD-L1抗体时，这种Block效应被反转，荧光素酶可以表达，从而检测到荧光信号。经过方法验证，该检测方法灵敏度、特异性、准确度都很好，且稳定性很好。
▲中检院开发的PD-1/PD-L1抗体生物活性检测方法
中检院的研究人员针对该方法后续进行了大量的优化试验，确定了检测方案的具体参数。优化后的方法特异性和准确度都很好。该方法对默沙东的PD-1抗体Keytruda（Pembrolizuamb）有很好的响应，对贝伐珠单抗、Tremulimumab、利妥昔单抗、西妥昔单抗则几乎没有响应，且对Pembrolizumab的线性准确度非常好。
该方法的稳定性测试结果也很理想。
最后，中检院研究人员测定了PD-1抗体Pembrolizumab与另外两个厂家PD-1抗体、罗氏的PD-L1抗体Atemzolizumab与另外两个厂家PD-L1抗体的生物活性，结果发现3个PD-1抗体的生物活性非常相似，3个PD-L1抗体也是一样。
小编总结
近年来PD-1/PD-L1抗体研究火热，国内多达数十家企业投身该领域，颇有过度重复开发之嫌。同靶点药物开发，提升标准、差异化开发满足细分市场需求是必由之路。中检院开发分析方法的努力一方面将从技术角度为CFDA审批新药保驾护航，另一方面小编也希望能引导更多药企在药学研究、工艺开发等方面做足功夫。
参考文献
Development of a robust reporter gene assay to measure the bioactivity of anti-PD-1/anti-PD-L1 therapeutic antibodies
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