示教｜缪应江：细胞同步化&染色体高分辨技术

8月31日，来自全国20余家医疗机构的相关从业人员参加了由长治市妇幼保健院医学遗传科主办的“人类高分辨染色体制备操作示教”。

主讲人：上海乐辰生物缪应江

参与工作人员：长治市妇幼保健院医学遗传科张敏、赵云岗、李娟、李惠、陈黎恒

部分医疗机构和本院的高分辨染色体结果如下所示：

外周血高分辨率制备规程 

1、外周血淋巴细胞培养48-72小时后，晚上离开实验室时，向每个培养管中加入100 ul溶液A，避光培养过夜，处理15-17小时。

2、第二天早上向每个培养管中加入100 ul溶液B，细胞培养5h。

3、将水浴箱打开，温度平衡至37℃，把配好的低渗液放入恒温水浴箱进行预热。

4、从外周血培养箱内取出待收获的外周血，上下颠倒，至完全混匀，开盖，加45ul 50ug/ul的秋碱，混匀，放外周血培养箱培养15min。

5、准备15ml离心管、吸管并编号，配制固定液（甲醇：冰乙酸=3:1）。

6、将外周血培养混悬液倒入准备好的离心管内，1500rpm，5min，弃上清。

7、低渗：加10ml预热好的低渗液，轻轻吹打均匀，置水浴箱30min。

8、预固定：每管加1.5ml固定液，混匀，1500rpm，5min，弃上清。

9、第一次固定：加入10ml固定液，混匀， 1500rpm，5min，弃上清。

10、第二次固定：加入10ml固定液，吹打均匀，1500rpm，5min，弃上清。

11、配制新鲜固定液，加入1ml新鲜固定液，吹打均匀，进行滴片。

12、移液器吸取30ul细胞悬液垂直滴在干燥的载玻片上，静置2min，待其充分扩散进行观察。

13、放入电热恒温干燥箱90℃，1h。

14、常规G显带。