微生物检验涂抹实验

【2】涂抹实验检验标准微生物涂抹实验

微生物检验设备表面涂抹试验手部

8）http://bbs.foodmate.net/thread-567266-1-1.html

我公司之前参考标准的:GB15979-2002_一次性使用卫生用品卫生标准_2006429.pdf;GBt18204.1-2000 公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定.pdf 

7）http://bbs.foodmate.net/thread-464166-1-1.html

   有关涂抹的问题：我想问下，涂抹物体表面做大肠的无菌瓶里是放50毫升的生理盐水吗？并且这50毫升是按原液计算的还是按负一倍算的？不知我表达的清楚否，意思就是我从这50毫升里取一毫升放到单料里，那么这一步的稀释倍数我是记做1呢还是负1呢？

    顺便再问下如果做菌落，放到试管里的生理盐水是多少毫升？此时稀释倍数是？ 还有如果即做大肠又做菌落，能不能将三角瓶的生理盐水放多点，这样做大肠的和菌落的一起吸取，（因为我听我一同学说做大肠的放到含50毫升的三角瓶里，菌落的放到含10毫升生理盐水试管里）

  2＃1.你在50ml里面取1ml接种，结果乘以50就是原菌落数。

    2.样液可以一样，分别接种就可以了。

    3.你全部放一起也够的。

     菌落1ml*2+接种1ml=3ml。大肠10mL*3+接种1ml=31ml，全部加一起，50ml足够了。

  3＃我这么问吧，你从50毫升里面取了10毫升放到做大肠的双料里，此时的稀释倍数是？

 4＃送小学进修吧  50/10=5

6）这样做稀释对吗？

http://bbs.foodmate.net/thread-458419-1-1.html

    我们是水饺生产厂家，要对清洁后的水饺机器进行涂抹微生物检验，我们用的是5乘5厘米的涂抹面积，换算成英寸就是四平方英寸，我们为了好计算就用四毫升的盐水稀释，之后取一毫升进行检验，大家帮我讨论一下这样取样是否合理，还是应该用九毫升的盐水稀释呢？ 

2＃应该用10毫升的盐水稀释。无论你的取样面积是多少，最后出来结果的时候除掉那个面积不就行了。

3＃我认为这样做可行：

1、将脱脂棉与10ml生理盐水放进小型锥形瓶中

2、灭菌，当然所有涉及微生物检测的都要灭菌

3、现场采样时，将酒精棉点燃，擦拭你要用其去瓶内脱脂棉的镊子，取出脱脂棉，在内壁将其内水分按出一部分，否则，滴至外面，结果不准确；在规格板内涂抹

4、快速放进生理盐水中（原瓶子中）

5、保证取样到完成检测在1个半小时内

6、结果：算出的总数除去那个面积，用平方厘米

5）http://bbs.foodmate.net/thread-443012-1-1.html

  涂抹用九管法测大肠：哪位大虾做车间的涂抹用九管法(乳糖胆盐)测大肠的指教下，涂抹100平厘米的设备表面，放入100ML盐水中，吸1ML放入第一套(3个)试管，稀释10倍后吸1ML到第二套(3个)试管…类推，这样做出来我读数是应该照表直接读吗?单位呢？又该是什么？ 

4＃使用何种方法来测试大肠菌群，主要需要看看在相应面积上面的细菌数量。如果数量多，平板法就可以。如果数量不多，多管发酵法更合适。

5＃如果数量不多，建议使用平板法。如果数量少，第一套试管必须添加10mL稀释液。不然灵敏度不够。这样，你可以按照10、1、0.1的计算方法来报告结果。最后的单位肯定是CFU/cm2。

4)手部涂抹试验及标准值

http://bbs.foodmate.net/thread-223868-1-1.html

   车间人员设备涂抹菌落、霉菌标准.txt (2.79 KB) 

   车间手部验证.doc (28.5 KB) 

3）车间涂抹

    桌面http://bbs.foodmate.net/thread-435238-1-1.html

    刚刚细看了《一次性使用卫生用品卫生标准》里面说做手部和桌面的涂抹要来回10次，我只做了2次，还有那个计算有点怪怪的！~~ 

1）http://bbs.foodmate.net/thread-199447-1-1.html

2＃生产环境采样与测试方法

工人手表面采样

工人手：被检人五指并拢，用一浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10毫升灭菌生理盐水的采样管内送检。

检验方法按照GB/T4789.2有关章节进行。

工器具及手：涂抹法 

可参照GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》

车间空气：空气落下菌 

可参照GB/T18204.1-2000《公共场所空气微生物检验方法—细菌总数的测定》

欢迎加入食品检验行列！

生产环境卫生指标

装配与包装车间空气中细菌菌落总数应≤2500cfu/m3。

工作台表面细菌菌落总数≤20cfu/cm2。

工人手表面细菌菌落总数应≤300cfu/只手，并不得检出致病菌。

2＃车间手部验证.doc

一、        空气采样及检验方法

1培养基：普通营养琼脂平板，按GB4789.28中3.7条配制

2采样（空气沉降法）

2.1布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。

2.2采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。

2.3采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。

3培养：于37℃培养24小时。

4检测频率：每周

空气质量标准：

生车间、熟车间、成品车间：低于100个

半成品库、成品库：低于10个

二、设备的采样与检验方法

根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。

1采样方法

1.1涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面）

取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。

1.2贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面）

将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。

2检验方法

2.1细菌总数的检验

将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。

结果计算

表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×2

2.2致病菌的检验

沙门氏菌，参照GB4789.4进行

金黄色葡球菌，参照GB7918.5进行

4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2，

5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2

一般区域：细菌总数≤100个∕cm2

三、人员手表面细菌污染情况的检验

1.        采样方法：用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部，反复两次，涂擦的时候棉拭子要相应地转动，擦完后，将手接触部分剪去，将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检培养。

2.        检验方法：同工器具表面细菌总数检验方法。

3.        结果计算：每只手表面的细菌总数（cfu/只手）=平皿上菌落的平均数× 样液稀释倍数

四、消毒液药效的微生物学鉴定法

1采样对象：正常使用的消毒液，和已知配制好备用的消毒液

2采样及检验方法

在无菌条件下，用无菌吸管吸取1毫升样液，加入9毫升稀释液中混匀，对于醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤即可；对于含氯消毒剂、含碘消毒剂，需在肉汤中加入0.1%硫代硫酸钠，对洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在肉汤中加入3%（W/V）土温80和0.3%卵磷脂；对醛类消毒剂，需在肉汤中加入0.3%甘氨酸；对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂，需在肉汤中加入（W/V）土温80，以中和被检样液中的残效作用，

将注入了样液的稀释液充分摇匀，取1毫升注入平皿，随之倒入普通营养琼脂，待琼脂凝固后，翻转平皿，将平皿于37℃条件下培养24小时后计平板上生长的菌落数。

3结果分析

平板上有菌生长，表明被检样液中有残存活菌，若每个平板菌落数在10个以下，仍可用于消毒，若每个平板菌落数超过10个，说明每毫升被检样液含菌量已超过100个，即不宜在用于消毒。

大肠菌群的测定：

1 用10ml灭菌吸管吸取10ml液体，沿管壁缓缓注入装有10ml双料乳糖胆盐发酵管内，接种3个试管；

2 用1ml灭菌吸管吸取1ml液体，沿管壁缓缓注入装有10ml单料乳糖胆盐发酵管内，接种3个试管；

3 用1ml灭菌吸管吸取1ml液体，沿管壁缓缓注入装有9ml生理盐水的试管内，混匀做成1：10的稀释液；

4 用1ml灭菌吸管吸取1ml1：10的稀释液，沿管壁缓缓注入装有10ml单料乳糖胆盐发酵管内，接种3个试管；

5 做好标记置于36±1℃温箱内培养24±2h。

该公式是一个经验公式.它的理论模式依据是:100CM2的面积上10MIN降落的菌落数,

等于1升空气中所含的细菌总数.系数50000基于上述假说和单位换算而来.

细菌总数(CFU/M3)=5/10T*100/A*1000*N=50000*N/AT

    5/10T:实际放置了5MIN;

    100/A:A单一培养皿面积;

    1000:1M3=1000L啊,换算成m3

N:平均菌落数

GB15979-2002   一次性使用卫生用品卫生标准

消毒环境    卫生用品生产环    工人手表面细菌菌落总数应≤300cfu/只手，并不得检出致病菌。

消毒环境    卫生用品生产环    空气：           菌落≤2500cfu/m3.

生产环境采样与测试方法

工人手表面采样

工人手：被检人五指并拢，用一浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10毫升灭菌生理盐水的采样管内送检。

检验方法按照GB/T4789.2有关章节进行。

生产环境卫生指标

装配与包装车间空气中细菌菌落总数应≤2500cfu/m3。

工作台表面细菌菌落总数≤20cfu/cm2。

工人手表面细菌菌落总数应≤300cfu/只手，并不得检出致病菌。

7＃探 物体表面采样及检查方法

1 采样时间

选择消毒处理后4h内进行采样。

2 采样面积

被采表面<100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2,取100cm2。

3采样方法

  用5×5cm2的标准灭菌规格板；放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水平样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次；并随之转动棉拭子。连续采样4个规格板面积；剪去手接触部分，将棉拭子放入装10ml采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。

结果计算

物体表面细菌菌落总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×采样液稀释倍数/采样面积(cm2）

E 2 工作台表面与工人手表面采样与浏试方

8＃

1.空气落菌:杀菌的培养基加热溶化化冷却至45化时，在无菌操作环境要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。待培养基凝固后，将培养基平皿倒置于36±1℃恒温培养箱中培养48h，若培养基平皿上确实无菌落生长，即可供采样用。经过确认后准备好的培养基平皿需要在2℃---8℃的环境中存放。将已经制备好的培养皿按照(四个角各一个和中间一个)进行放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中30min（清洁要求低于10万级水平，空气沉降菌检测只需要暴露5min），再将培养皿盖盖上后倒置保存。

2.食品接触面的采样:设备食品接触表面（包括手套、工作服、空包）：将灭菌之取样钢板（钢板，中空成5cm×5cm正方形）固定于待测设备与食品接触表面，使用用无菌盐水润湿后的无菌棉签（如果待测表面是湿润的则不需要润湿棉签）在规格内往返涂抹10次后，将检测人手接触部分棉棒剪去后，将棉签头置于50ml无菌盐水中。共取两次为50 cm2,此液为原液.

3.手部菌落的采样:生理盐水以10毫升分装入试管中连同包好的棉签用高压灭菌器灭菌备用。被检人五指并拢，用一浸湿生理盐水的灭菌棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回擦拭10次，然后剪去检测人手接触部分棉棒，将带菌棉签放入有10毫升生理盐水的试管中，充分振荡后备用,此液为10-1

/bbs.foodmate.net/thread-657277-1-1.html

3）为什么有的工厂涂抹大肠菌群是（CFU/100cm2）<30/bbs.foodmate.net/thread-519814-1-1.html

3＃你先用棉签涂抹你要检测的设备或目标，面积为100cm2(10*10cm)。再用涂抹后的棉签做大肠菌群检测。如阴性就可以报 大肠菌群是（CFU/100cm2）<30 。（这<30是查表所得的。你们应该是用2003版的方法）

5＃很明显。单位是CFU的时候用平板法。MPN才是试管法。楼上的2位给你说的有误。做一个10乘10CM的框，在框内进行涂抹。面积就是100CM^2， 然后对涂抹棒用平板法做， 就OK了.

2)微生物涂抹实验 http://bbs.foodmate.net/thread-185123-1-1.html

1)涂抹实验检验标准 http://bbs.foodmate.net/thread-321846-1-1.html

  找 GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准 看看吧

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